丙酮酸和葡萄糖标准校正ALT仪器常数
作者：黄亨健 李一松 贾成瑶
单位：华西医科大学附属第一医院检验科 成都 610041
关键词：ALT仪器常数K值；NADH消光摩尔系数
华西医学000280
摘要：ALT酶活性浓度测定的仪器常数K值通常采用计算方法
求得. εNADH的理论值为6220。本文运用ALT酶促反应的产物丙酮酸和己糖激酶(HK)的底物葡萄糖为标准，按终点法测定K值(K＝
)。理论上计算方法求得K值应该与终点法测定的K值相同
。实验提示同一台生化仪采用丙酮酸为标准和葡萄糖为标准按终点法测定的K值一致。但与计算方法测定的K值存在着差异。建议各种酶活性浓度测定选择有效的产物或底物作为校正标准，达到酶活性浓度测定的一致性。
, http://www.100md.com
[中图分类号]R446 [文献标识码]B
[文章编号]1002-0179(2000)02-0242-02
Pyruvate and Glucose Standard Solution Calibrate K value for ALT
HUANG Heng-jian，LI Yi-song，JIA Cheng-yao
酶活性单位测定遵循
公式.其中
称为仪器常数K值，通常计算求得。但因生化仪分析仪器品牌、仪器性能、状态以及各厂家试剂组成成份的差异，导致计算K值与实际的K值存在偏差，从而影响酶活性的准确性。本文分别用ALT单一干粉试剂和液体双试剂以丙酮酸为标准和己糖激酶法以葡萄糖为标准，按终点法校正ALT仪器常数K值，并进行了初步探讨。
, 百拇医药
1 原理
1.1 计算公式法
1.2 终点法
标准液浓度(丙酮酸或葡萄糖)，Ast标准液吸光度，Ab试剂空白。丙酮酸为ALT酶促反应的产物，反应仅存于第二步消耗NADH，吸光度下降K为负值。Ast-Ab与ΔNADH关系如下：①Ast-Ab＝εdΔSNADH106；②其中 ΔSNADH＝ΔS丙酮酸钠；③实际标准液浓度
S丙酮酸。
, 百拇医药
1.3 计算公式与终点法关系如下 K＝
丙酮酸/ε*d*S丙酮酸
葡萄糖为己糖激酶的底物。反应存在于第二步并能生成NADH，吸光度上升K为正值，推导原理同上。
2 材料与方法
2.1 试剂 上海长征医学科学有限公司ALT干粉单一试剂。批号950892。葡萄糖己糖激酶干粉试剂。批号951164。上海科华—菱诊断用品公司ALT液体双试剂。批号950721。上海生物制品研究所丙酮酸标准液2000μmol/L。
2.2 仪器和方法 日立7170A全自动生化仪，反应时间10分钟，主付波长为340/405nm，ALT单一试剂和ALT双试剂，以丙酮酸为标准，浓度范围：1400～2600μmol/L，HK单一试剂和HK双试剂(同一试剂)，以葡萄糖为标准，浓度范围：2800～5600μmol/L，各自测定不同标准浓度4次求其均值。样本和试剂体积按试剂说明书设置。
, 百拇医药
3 实验结果
丙酮酸和葡萄糖标准分别用ALT单一试剂和HK试剂在日立7170A测定，结果见表1、表2。
表1.ALT单一试剂用丙酮酸标准校正K值 丙酮酸标准含量
μmol/L
校正K值
仪器340/405nm实际NADH ε
公式计算K值
校正K值/公式计算K值
666
-3157
5596
, http://www.100md.com
111.1%
1333
-3175
5564
-2840
111.7%
2000
-3155
5634
110.4%
2600
-3104
5549
, http://www.100md.com
112.1%
丙酮酸和葡萄糖标准分别用ALT液体双试剂和HK试剂在日立7170A测定。结果见表3、表4。表2.葡萄糖激酶法用葡萄糖标准校正K值 葡萄糖标准含量
μmol/L
校正K值
仪器340/405nm实际NADH ε
公式计算K值
校正K值/公式计算K值
1666
3120
5490
108.9%
, 百拇医药
2800
3172
5455
2865
110.7%
3733
3165
5520
110.5%
5600
3165
5626
110.5%
, http://www.100md.com
表3.ALT液体双试剂用丙酮酸标准校正K值 丙酮酸标准含量
μmol/L
校正K值
仪器340/405nm实际NADH ε
公式计算K值
校正K值/公式计算K值
2400
-4594
5560
109.9%
2000
-4582
, http://www.100md.com
5567
-4180
109.6%
2400
-4595
5664
109.8%
表4.己糖激酶法用葡萄糖标准校正K值 丙酮酸标准含量
μmol/L
校正K值
仪器340/405nm实际NADH ε
公式计算K值
, 百拇医药
校正K值/公式计算K值
4480
4545
5721
107.9%
5600
4589
5666
4213
108.9%
7840
4578
5679
, 百拇医药
108.9%
4 讨论
4.1 校正与公式计算K值差异 本法所测定K值多公式计算K值理论上应一致。实验结果表明，同一台生化仪采用ALT单一试剂以丙酮酸为标准和HK单一试剂以葡萄糖为标准测定的K值一致，采用ALT双试剂以丙酮酸为标准和HK双试剂以葡萄糖为标准测定的K值一致。但是不同的两种试剂类型测定的K值都与计算K值存在差异。日立7170A测定K值高于公式计算K值，平均高10%。NADH摩尔消光系数在该仪器340/405nm处平均为5607，而不是6220。可见使用公式计算K值运用εNADH6220，所测定的ALT活性单位均偏低。导致该差异原因可能是NADH在405nm处存在吸收，εNADH实际测定值应为εNADH340nm-εNADH405nm。因此校正K值的应更准确反映酶活性浓度。
4.2 校正标准液浓度选择 丙酮酸标准浓度应选择1400～2600μmol/L之间。葡萄糖标准浓度应选择2800～5600μmol/L之间，HK法校正的K值前面加上负号，在分析样品时将终点法改为速率法。
, 百拇医药
4.3 酶活性浓度测定可比性 因各种仪器状况、性能及实验条件不一致，使用试剂品种繁多，使测定结果可比性差。目前酶校正液还未普及，所以通过已知浓度的各种酶的产物或底物作为标准校正K值，能避免或降低各种仪器测定结果的差异。终点法测定K值不仅适用于各种生化仪而且适用于各种酶活性浓度校正K值。凡能选择有效的产物或底物作为校正标准均可按终点法。资料介绍，丙酮酸标准液可校正AST和LDH-P.Nitrophenol标准液可校正Nitrphenyl phosphate为底物的ALP.5-Amino-2-Nitrobenzot-Acid标准校正L-r-Glutamy-3-Caboxy-4-Nitroanilide为底物的r-GT或P-Nitroaniline校准液校正L-r-Glutamyl-p-Nitroanilid为底物的r-GT，D-Glucose标准液可校正CK-NAC等。
参考文献
1，The reference manual for Shimazu CL-7000.5.10～12.
(收稿日期：1999-10-05), http://www.100md.com
单位：华西医科大学附属第一医院检验科 成都 610041
关键词：ALT仪器常数K值；NADH消光摩尔系数
华西医学000280
摘要：ALT酶活性浓度测定的仪器常数K值通常采用计算方法
求得. εNADH的理论值为6220。本文运用ALT酶促反应的产物丙酮酸和己糖激酶(HK)的底物葡萄糖为标准，按终点法测定K值(K＝)。理论上计算方法求得K值应该与终点法测定的K值相同。实验提示同一台生化仪采用丙酮酸为标准和葡萄糖为标准按终点法测定的K值一致。但与计算方法测定的K值存在着差异。建议各种酶活性浓度测定选择有效的产物或底物作为校正标准，达到酶活性浓度测定的一致性。, http://www.100md.com
[中图分类号]R446 [文献标识码]B
[文章编号]1002-0179(2000)02-0242-02
Pyruvate and Glucose Standard Solution Calibrate K value for ALT
HUANG Heng-jian，LI Yi-song，JIA Cheng-yao
酶活性单位测定遵循
公式.其中称为仪器常数K值，通常计算求得。但因生化仪分析仪器品牌、仪器性能、状态以及各厂家试剂组成成份的差异，导致计算K值与实际的K值存在偏差，从而影响酶活性的准确性。本文分别用ALT单一干粉试剂和液体双试剂以丙酮酸为标准和己糖激酶法以葡萄糖为标准，按终点法校正ALT仪器常数K值，并进行了初步探讨。, 百拇医药
1 原理
1.1 计算公式法
1.2 终点法
标准液浓度(丙酮酸或葡萄糖)，Ast标准液吸光度，Ab试剂空白。丙酮酸为ALT酶促反应的产物，反应仅存于第二步消耗NADH，吸光度下降K为负值。Ast-Ab与ΔNADH关系如下：①Ast-Ab＝εdΔSNADH106；②其中 ΔSNADH＝ΔS丙酮酸钠；③实际标准液浓度S丙酮酸。, 百拇医药
1.3 计算公式与终点法关系如下 K＝
丙酮酸/ε*d*S丙酮酸葡萄糖为己糖激酶的底物。反应存在于第二步并能生成NADH，吸光度上升K为正值，推导原理同上。
2 材料与方法
2.1 试剂 上海长征医学科学有限公司ALT干粉单一试剂。批号950892。葡萄糖己糖激酶干粉试剂。批号951164。上海科华—菱诊断用品公司ALT液体双试剂。批号950721。上海生物制品研究所丙酮酸标准液2000μmol/L。
2.2 仪器和方法 日立7170A全自动生化仪，反应时间10分钟，主付波长为340/405nm，ALT单一试剂和ALT双试剂，以丙酮酸为标准，浓度范围：1400～2600μmol/L，HK单一试剂和HK双试剂(同一试剂)，以葡萄糖为标准，浓度范围：2800～5600μmol/L，各自测定不同标准浓度4次求其均值。样本和试剂体积按试剂说明书设置。
, 百拇医药
3 实验结果
丙酮酸和葡萄糖标准分别用ALT单一试剂和HK试剂在日立7170A测定，结果见表1、表2。
表1.ALT单一试剂用丙酮酸标准校正K值 丙酮酸标准含量
μmol/L
校正K值
仪器340/405nm实际NADH ε
公式计算K值
校正K值/公式计算K值
666
-3157
5596
, http://www.100md.com
111.1%
1333
-3175
5564
-2840
111.7%
2000
-3155
5634
110.4%
2600
-3104
5549
, http://www.100md.com
112.1%
丙酮酸和葡萄糖标准分别用ALT液体双试剂和HK试剂在日立7170A测定。结果见表3、表4。表2.葡萄糖激酶法用葡萄糖标准校正K值 葡萄糖标准含量
μmol/L
校正K值
仪器340/405nm实际NADH ε
公式计算K值
校正K值/公式计算K值
1666
3120
5490
108.9%
, 百拇医药
2800
3172
5455
2865
110.7%
3733
3165
5520
110.5%
5600
3165
5626
110.5%
, http://www.100md.com
表3.ALT液体双试剂用丙酮酸标准校正K值 丙酮酸标准含量
μmol/L
校正K值
仪器340/405nm实际NADH ε
公式计算K值
校正K值/公式计算K值
2400
-4594
5560
109.9%
2000
-4582
, http://www.100md.com
5567
-4180
109.6%
2400
-4595
5664
109.8%
表4.己糖激酶法用葡萄糖标准校正K值 丙酮酸标准含量
μmol/L
校正K值
仪器340/405nm实际NADH ε
公式计算K值
, 百拇医药
校正K值/公式计算K值
4480
4545
5721
107.9%
5600
4589
5666
4213
108.9%
7840
4578
5679
, 百拇医药
108.9%
4 讨论
4.1 校正与公式计算K值差异 本法所测定K值多公式计算K值理论上应一致。实验结果表明，同一台生化仪采用ALT单一试剂以丙酮酸为标准和HK单一试剂以葡萄糖为标准测定的K值一致，采用ALT双试剂以丙酮酸为标准和HK双试剂以葡萄糖为标准测定的K值一致。但是不同的两种试剂类型测定的K值都与计算K值存在差异。日立7170A测定K值高于公式计算K值，平均高10%。NADH摩尔消光系数在该仪器340/405nm处平均为5607，而不是6220。可见使用公式计算K值运用εNADH6220，所测定的ALT活性单位均偏低。导致该差异原因可能是NADH在405nm处存在吸收，εNADH实际测定值应为εNADH340nm-εNADH405nm。因此校正K值的应更准确反映酶活性浓度。
4.2 校正标准液浓度选择 丙酮酸标准浓度应选择1400～2600μmol/L之间。葡萄糖标准浓度应选择2800～5600μmol/L之间，HK法校正的K值前面加上负号，在分析样品时将终点法改为速率法。
, 百拇医药
4.3 酶活性浓度测定可比性 因各种仪器状况、性能及实验条件不一致，使用试剂品种繁多，使测定结果可比性差。目前酶校正液还未普及，所以通过已知浓度的各种酶的产物或底物作为标准校正K值，能避免或降低各种仪器测定结果的差异。终点法测定K值不仅适用于各种生化仪而且适用于各种酶活性浓度校正K值。凡能选择有效的产物或底物作为校正标准均可按终点法。资料介绍，丙酮酸标准液可校正AST和LDH-P.Nitrophenol标准液可校正Nitrphenyl phosphate为底物的ALP.5-Amino-2-Nitrobenzot-Acid标准校正L-r-Glutamy-3-Caboxy-4-Nitroanilide为底物的r-GT或P-Nitroaniline校准液校正L-r-Glutamyl-p-Nitroanilid为底物的r-GT，D-Glucose标准液可校正CK-NAC等。
参考文献
1，The reference manual for Shimazu CL-7000.5.10～12.
(收稿日期：1999-10-05), http://www.100md.com