注射用阿洛西林钠细菌内毒素检查法的可行性探讨
作者：张跃春 贾金芳
单位：张跃春(义乌 322000 浙江义乌市药品检验所)；贾金芳(义乌市人 民医院)
关键词：
注射用阿洛西林钠 注射用阿洛西林钠(A)是一广谱的半合成青霉 素，对革兰氏阳性菌和阴性菌及绿脓杆菌均有良好的抗菌作用。部颁标准WS-421(X-363)-95 规定应对其作热原检查。本文通过实验证明其热原检查可以用细菌内毒素检查法代替。
1 仪器与试剂
注射用阿洛西林钠(以下简称A，康恩贝 集团金华制药厂，规格：1.0g，批号：981031，981106和981112)；鲎试剂(TAL，湛江安度 斯生物有限公司，规格：0.25Eu/ml,0.5ml/支，批号970928)；细菌内毒素工作标准品( CSE，湛江安度斯生物有限公司，规格：10Eu/支，批号：970802)；细菌内毒素检查用水(BE TW，湛江安度斯生物有限公司；规格：5ml,批号：981005)；细菌内毒素检查用具一套(湛江 安度斯生物有限公司)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 灵敏度 复核
由浙江省药品检验所复核标定符合规定。
2.2 对细菌内毒素检查干扰评价试验
2.2.1 样品内毒素理论限值的计 算 A的热原检查的兔注射剂量(M)为1ml/kg(100mg/ml)细菌内毒素阈值(K)为5.0Eu/kg,细菌 内毒素理论限值(L)为:L=K/M=5.0Eu/ml。
2.2.2 初筛试验 以TAL灵敏度0.5Eu/ml为基准灵敏度(λ0.5),计 算样品相应的最大有效稀释:MVD0.5=L/0.5,以MVD0.5为起始浓度，用BE TW将样品等倍稀释成下述2个系列的样品溶液。
, 百拇医药
NC系列：用BETW将样品稀释成MVD0.5 (1∶10)，MVD0.25(1∶20),MVC0.12(1∶40),MVD0.06(1∶80)和MVD 0.03(1∶160)的系列浓度。
PPC系列：将样品稀释成与上述NC系列相同浓度系列但在 稀释过程中每一浓度样品都含有2λ内毒素。
采用灵敏度λ=0.25Eu/ml的TAL分别将NC和PP C 2个系列的样品反应(37℃,60min)结果见表1。结果显示，任一规格灵敏度的TAL都可做干 扰试验，样品对TAL无抑制作用。
表1 初筛试验结果
样品浓度
MVD0.5
, http://www.100md.com
/1∶10
MVD 0.25
/1∶20
MVC0.12
/1∶40
MVD0.06
/1∶80
MVD0.0 3
/1∶160
NC----------
PPC
, 百拇医药
++
++
++
++
++
注：NC-阴性对照管；PPC-阳性产品对照管
2.3 干扰试验
分别用BETW(Ⅰ)，样品1∶20倍稀释液(Ⅱ)复溶TAL与系 列内毒素溶液(2λb，λb，0.5λb，0.25λb)反应(37℃,60min),结果见表2。结果显示,Ⅰ 的灵敏度(λc)为0.25Eu/ml,λc=λb;Ⅱ的灵敏度(λ′c)为0.5Eu/ml,λ′c=2λb,供试 品在该浓度下对鲎试验无干扰。表2 干扰试验结果/n=3
内毒素浓度/Eu.ml-1
, 百拇医药
阴性对照
0.5
0.25
0.12
0.06
Ⅰ
++++
++++----------- -
Ⅱ
++++----------------
2.4 细菌内毒素检查法测定结果与家兔法检测结果对比
由初筛试验结 果显示，样品对鲎试验无干扰的有效浓度在1∶10～1∶160倍稀释之间。在此有效浓度范围 内，可以选择λ=0.5～0.03Eu/ml灵敏度的鲎试剂对相应MVD浓度的样品检查。本实验采用将 3批样品(以100mg/ml为原料液)稀释1∶20倍与0.25Eu/ml灵敏度的TAL反应结果均为阴性。3 批样品同时用家兔法进行热原检查，结果均为阴性。2种检测法结果完全一致，从而验证细 菌内毒素检查法可用于A内毒素的检测。
3 讨 论
本实验结果显示，注射用阿洛西林对内毒素与鲎试剂的凝胶反应无干扰，即选择任一灵敏度 的TAL与相对应的最大有效稀释倍数(MVD)液进行实验，用细菌内毒素检查代替热原检查是可 行的。
收稿日期：1999-03-01, http://www.100md.com
单位：张跃春(义乌 322000 浙江义乌市药品检验所)；贾金芳(义乌市人 民医院)
关键词：
注射用阿洛西林钠 注射用阿洛西林钠(A)是一广谱的半合成青霉 素，对革兰氏阳性菌和阴性菌及绿脓杆菌均有良好的抗菌作用。部颁标准WS-421(X-363)-95 规定应对其作热原检查。本文通过实验证明其热原检查可以用细菌内毒素检查法代替。
1 仪器与试剂
注射用阿洛西林钠(以下简称A，康恩贝 集团金华制药厂，规格：1.0g，批号：981031，981106和981112)；鲎试剂(TAL，湛江安度 斯生物有限公司，规格：0.25Eu/ml,0.5ml/支，批号970928)；细菌内毒素工作标准品( CSE，湛江安度斯生物有限公司，规格：10Eu/支，批号：970802)；细菌内毒素检查用水(BE TW，湛江安度斯生物有限公司；规格：5ml,批号：981005)；细菌内毒素检查用具一套(湛江 安度斯生物有限公司)。
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2 方法与结果
2.1 灵敏度 复核
由浙江省药品检验所复核标定符合规定。
2.2 对细菌内毒素检查干扰评价试验
2.2.1 样品内毒素理论限值的计 算 A的热原检查的兔注射剂量(M)为1ml/kg(100mg/ml)细菌内毒素阈值(K)为5.0Eu/kg,细菌 内毒素理论限值(L)为:L=K/M=5.0Eu/ml。
2.2.2 初筛试验 以TAL灵敏度0.5Eu/ml为基准灵敏度(λ0.5),计 算样品相应的最大有效稀释:MVD0.5=L/0.5,以MVD0.5为起始浓度，用BE TW将样品等倍稀释成下述2个系列的样品溶液。
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NC系列：用BETW将样品稀释成MVD0.5 (1∶10)，MVD0.25(1∶20),MVC0.12(1∶40),MVD0.06(1∶80)和MVD 0.03(1∶160)的系列浓度。
PPC系列：将样品稀释成与上述NC系列相同浓度系列但在 稀释过程中每一浓度样品都含有2λ内毒素。
采用灵敏度λ=0.25Eu/ml的TAL分别将NC和PP C 2个系列的样品反应(37℃,60min)结果见表1。结果显示，任一规格灵敏度的TAL都可做干 扰试验，样品对TAL无抑制作用。
表1 初筛试验结果
样品浓度
MVD0.5
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/1∶10
MVD 0.25
/1∶20
MVC0.12
/1∶40
MVD0.06
/1∶80
MVD0.0 3
/1∶160
NC----------
PPC
, 百拇医药
++
++
++
++
++
注：NC-阴性对照管；PPC-阳性产品对照管
2.3 干扰试验
分别用BETW(Ⅰ)，样品1∶20倍稀释液(Ⅱ)复溶TAL与系 列内毒素溶液(2λb，λb，0.5λb，0.25λb)反应(37℃,60min),结果见表2。结果显示,Ⅰ 的灵敏度(λc)为0.25Eu/ml,λc=λb;Ⅱ的灵敏度(λ′c)为0.5Eu/ml,λ′c=2λb,供试 品在该浓度下对鲎试验无干扰。表2 干扰试验结果/n=3
内毒素浓度/Eu.ml-1
, 百拇医药
阴性对照
0.5
0.25
0.12
0.06
Ⅰ
++++
++++----------- -
Ⅱ
++++----------------
2.4 细菌内毒素检查法测定结果与家兔法检测结果对比
由初筛试验结 果显示，样品对鲎试验无干扰的有效浓度在1∶10～1∶160倍稀释之间。在此有效浓度范围 内，可以选择λ=0.5～0.03Eu/ml灵敏度的鲎试剂对相应MVD浓度的样品检查。本实验采用将 3批样品(以100mg/ml为原料液)稀释1∶20倍与0.25Eu/ml灵敏度的TAL反应结果均为阴性。3 批样品同时用家兔法进行热原检查，结果均为阴性。2种检测法结果完全一致，从而验证细 菌内毒素检查法可用于A内毒素的检测。
3 讨 论
本实验结果显示，注射用阿洛西林对内毒素与鲎试剂的凝胶反应无干扰，即选择任一灵敏度 的TAL与相对应的最大有效稀释倍数(MVD)液进行实验，用细菌内毒素检查代替热原检查是可 行的。
收稿日期：1999-03-01, http://www.100md.com