广西藤茶中黄酮类成份的提取工艺研究
作者：覃洁萍 许学健 董明姣
单位：南宁 530001 广西中医学院
关键词：显齿蛇葡萄；双氢杨梅树皮素；杨梅素；提取方法
中国现代应用药学000310 摘要 目的：提取分离藤茶(Ampelosis grossedentata)中的双氢杨梅树皮素(dihydromyricetin)和杨梅素(Myricetin)。方法：采用新的水提取和溶剂分离的方法，经化学和光谱鉴定确定结构。结果：提取产物经确证为双氢杨梅树皮素(dihydromyricetin)和杨梅素(Myricetin)，平均收 率分别为19.6%和0.51%。结论：该提取法经济、简便，易于操作，并且 提取率较高。
Study on the new extraction method of the
, http://www.100md.com flavonoids in Ampel opsis grossedentata
Qin Jieping
(Guangxi College of Traditional Medicine,Nanning 530001)
Xu Xuejian
(Guangxi College of Traditional Medicine,Nanning 530001)
Dong Mingjiao
(Guangxi College of Traditional Medicine,Nanning 530001)
ABSTRACT OBJECTIVE：To extract and is olate dihydromyricetin and myricetin in Ampelosis grossedentata.METHOD:The extraction and isolation were carried out by a new method usi ng H2O、Me2CO and EtOH.The structures were determined by means of physicoche mical properties and spectral analysis(UV,IR,1HNMR and EI-MS).RESULTS:Dihydromyricetin and myricetin were isolated and the yields were 19.6% and 0.51% respectively.CONCLUSION:This method were simple and convenient to operate.
, 百拇医药
KEY WORDS Ampelopsis grossedentata,dihydr omyricetin,myricetin,extraction method
广西瑶 族藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄Ampelosis grossedentata(Hand .-Mazz.)W.T.Wang的嫩茎叶经传统加工揉制、干燥而成。该植物又名藤茶，广泛分布于广 西各地以及云南、广东、湖南等地，具清热解毒等功效[1]。瑶族山乡百姓常将其 制成保健茶，用于治疗感冒、发热、中暑、头晕、心烦等症。经研究，其主要成份为双氢杨 梅树皮素，并含少量杨梅素[2]。药理实验表明，双氢杨梅树皮素能明显拮抗肾上 腺素(NA)和高K+所致的兔主动脉条收缩反应，毒性低[3]；并有祛痰止咳、降血 脂和保肝等作用[4]。杨梅素有抗菌、抗癌、止咳、祛痰、利尿等作用[5] 。由于其药用价值高，对其黄酮类成份的提取分离工艺研究具有十分重要的意义。我们通过 系统研究该茶主要化学成份的性质，反复研究探索，找到了一种既经济 、又简便易行的提 取方法，该法双氢杨梅树皮素平均得率为19.6%,杨梅素平均得率为0.51%(以生药计)。现详 细报道如下。
, 百拇医药
1 仪器与材料
熔点用柳本mp-s3微量熔点测定仪测定(未校正)。紫外光谱用岛津UV-160A紫外光谱仪测定 。红外光谱用岛津IR-470型红外光谱仪测定(KBr压片)。EI-Ms用HP5988A型质谱仪测定。F AB-MS用ZABSPEC型质谱仪测定。核磁共振谱用Bruker AM-500型核磁共振仪测定(室温)， 内标为TMS。薄层层析用硅胶G(青岛海洋化工厂)。其他试剂均为分析纯或化学纯。
藤茶于1996年3月采自广西恭城县，由本院药用植物教研室刘寿养副教授鉴定为Amp elopsis grossedentata。实验用其嫩茎叶，按传统方法加工干燥后备用。
2 提取分离方法
2.1 提取 取藤茶300g，加水煎煮2次，趁热过滤，合并滤液并浓缩后，放置 3d，析出浅黄色颗粒状结晶，抽滤，干燥，得粗结晶72.6g，收率为24.2%(以生药计)。
, 百拇医药
2.2 分离精制
取上述粗结晶20g，加丙酮回流提取2次，第1次加丙酮60 ml，第2次加丙酮30ml，每次回流5～10min。合并2次提取液，浓缩至小体积后，加水至700m l，放置，析出大量白色结晶，过滤。所得结晶再依上法重结晶，最后得白色细针晶或粉末状结晶(结晶Ⅰ)。
取上述20g粗结晶经丙酮提取后的不溶性残渣，加乙醇：水(1∶1)30ml，回流提取20min，趁 热过滤，然后浓缩至小体积，放置，数日后慢慢析出棕黄色簇状或小颗粒状结晶(结晶Ⅱ)。
将提得的粗结晶分3次按上述方法进行分离精制，每次取20g,得到结晶Ⅰ分别为16.4，16. 0和16.2g，平均收率为19.6%；得到结晶Ⅱ分别为0.451，0.403和0.421g，平均收率为0 .51%(以上提取率均按生药计)。
3 鉴 定
, 百拇医药
3.1 薄层色谱分析
将上述提取分离得到的各产物结晶Ⅰ和结晶Ⅱ分别取少量用 乙醇溶解后，点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-氯仿-甲酸(10∶6∶1)或苯-乙酸乙酯- 甲酸(6∶10∶1)展开，以1%三氯化铁乙醇液为显色剂，可见各产物用以上两个不同溶剂系统 展开后均为单一斑点，并且结晶Ⅰ和结晶Ⅱ的Rf值分别与已知双氢杨梅树皮素和 杨梅素对照品的Rf值一致。
3.2 鉴定
结晶Ⅰ为白色细针晶，mp.244～245℃(dec.)，易溶于丙酮、热乙醇、热水，溶于甲醇、乙 醇，不溶于氯仿、石油醚。盐酸镁粉反应呈玫瑰红色，三氯化铁反应呈紫黑色，与三氯化铝 反应呈强黄绿色荧光；α-萘酚反应阴性；与锆盐-柠檬酸反应，鲜黄色 不褪；UVλMeOHmaxnm(lgε)：291.5nm(4.17，带Ⅱ)和330nm(sh)。IR(KBr,cm -1)：3300～3650(OH)，1640(α，β-不饱和C=0)，1595，1500， 1465(芳环C=C)，所得光谱与已知双氢杨梅树皮素对照品的光谱一致。质谱m/z(%)测得分子 量为320(53)，主要裂解碎片有 153(100)，291(66)，139(29)，165(22)，166(34)，168(22 )，69(8)，符合二氢黄酮醇的裂解规律。综上，确证新方法 提取所得到的结晶Ⅰ为3，5，7 ，3′，4′，5′-六羟基二氢黄酮，即双氢杨梅树皮素(dihydromyricetin)。
, 百拇医药
结晶Ⅱ为棕黄色颗粒状结晶，mp>300℃，溶于热乙醇、甲醇，不溶于丙酮、氯仿、石油醚 。盐酸镁粉反应呈玫瑰红色，三氯化铁反应呈紫黑色，与三氯化铝反应呈强黄绿色荧光；[ WTBX α-萘酚反应阴性；与锆盐-柠檬酸反应，鲜黄色不褪；UVλMeOH maxnm：376.5nm(带Ⅰ)，254nm(带Ⅱ)。IR(KBr,cm-1)：3575,3380,3255(OH)，1 646(α，β-不饱和C=0)，1612,1550,1505,1454 (芳环C=C)，所得光谱 与已知杨梅素对照品的光谱完全一致。FAB-MSm/z(%)：319(M++H,100)，318(M+,23.5) 。乙酰化物mp.210～211℃，1HNMR(CDCl3)ppm：δ7.62(2H,s,C2′,6′-H),δ7 .35(1H,s,C8-H),δ6.88(1H,s,C6-H),δ2.42(3H,s,OCOCH3),δ2.31(15H,m,5×OCO CH3)。根据以上理化性质和光谱数据分析，确证新方法提取得到的结晶Ⅱ是杨梅素(Myric etin)。
, 百拇医药
致谢：广西中医学院药学系九七届毕业实习生张全安、罗荔东参 加部分工作，特此致谢。
参考文献
1，广西中医药研究所编.广西药用植物名录.南宁：广西人 民出版社，1986∶300.
2，覃洁萍，许学健，李剑江.广西瑶族藤茶化学成份的研究 .天然产物研究与开发，1997；9(4)∶41.
3，周天达，周雪仙.藤茶中双氢黄酮醇的分离、结构鉴定及 药理活性研究.中国药学杂志，1996；31(8)∶458.
4，钟正贤，覃洁萍，周桂芬，等.广西瑶族藤茶中双氢杨梅 树皮素的药理研究.中国民族医药杂志，1998，4(3)∶42.
5，国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册 .北京：人民卫生出版社，1986∶751.
收稿日期：1998-10-12, 百拇医药
单位：南宁 530001 广西中医学院
关键词：显齿蛇葡萄；双氢杨梅树皮素；杨梅素；提取方法
中国现代应用药学000310 摘要 目的：提取分离藤茶(Ampelosis grossedentata)中的双氢杨梅树皮素(dihydromyricetin)和杨梅素(Myricetin)。方法：采用新的水提取和溶剂分离的方法，经化学和光谱鉴定确定结构。结果：提取产物经确证为双氢杨梅树皮素(dihydromyricetin)和杨梅素(Myricetin)，平均收 率分别为19.6%和0.51%。结论：该提取法经济、简便，易于操作，并且 提取率较高。
Study on the new extraction method of the
, http://www.100md.com flavonoids in Ampel opsis grossedentata
Qin Jieping
(Guangxi College of Traditional Medicine,Nanning 530001)
Xu Xuejian
(Guangxi College of Traditional Medicine,Nanning 530001)
Dong Mingjiao
(Guangxi College of Traditional Medicine,Nanning 530001)
ABSTRACT OBJECTIVE：To extract and is olate dihydromyricetin and myricetin in Ampelosis grossedentata.METHOD:The extraction and isolation were carried out by a new method usi ng H2O、Me2CO and EtOH.The structures were determined by means of physicoche mical properties and spectral analysis(UV,IR,1HNMR and EI-MS).RESULTS:Dihydromyricetin and myricetin were isolated and the yields were 19.6% and 0.51% respectively.CONCLUSION:This method were simple and convenient to operate.
, 百拇医药
KEY WORDS Ampelopsis grossedentata,dihydr omyricetin,myricetin,extraction method
广西瑶 族藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄Ampelosis grossedentata(Hand .-Mazz.)W.T.Wang的嫩茎叶经传统加工揉制、干燥而成。该植物又名藤茶，广泛分布于广 西各地以及云南、广东、湖南等地，具清热解毒等功效[1]。瑶族山乡百姓常将其 制成保健茶，用于治疗感冒、发热、中暑、头晕、心烦等症。经研究，其主要成份为双氢杨 梅树皮素，并含少量杨梅素[2]。药理实验表明，双氢杨梅树皮素能明显拮抗肾上 腺素(NA)和高K+所致的兔主动脉条收缩反应，毒性低[3]；并有祛痰止咳、降血 脂和保肝等作用[4]。杨梅素有抗菌、抗癌、止咳、祛痰、利尿等作用[5] 。由于其药用价值高，对其黄酮类成份的提取分离工艺研究具有十分重要的意义。我们通过 系统研究该茶主要化学成份的性质，反复研究探索，找到了一种既经济 、又简便易行的提 取方法，该法双氢杨梅树皮素平均得率为19.6%,杨梅素平均得率为0.51%(以生药计)。现详 细报道如下。
, 百拇医药
1 仪器与材料
熔点用柳本mp-s3微量熔点测定仪测定(未校正)。紫外光谱用岛津UV-160A紫外光谱仪测定 。红外光谱用岛津IR-470型红外光谱仪测定(KBr压片)。EI-Ms用HP5988A型质谱仪测定。F AB-MS用ZABSPEC型质谱仪测定。核磁共振谱用Bruker AM-500型核磁共振仪测定(室温)， 内标为TMS。薄层层析用硅胶G(青岛海洋化工厂)。其他试剂均为分析纯或化学纯。
藤茶于1996年3月采自广西恭城县，由本院药用植物教研室刘寿养副教授鉴定为Amp elopsis grossedentata。实验用其嫩茎叶，按传统方法加工干燥后备用。
2 提取分离方法
2.1 提取 取藤茶300g，加水煎煮2次，趁热过滤，合并滤液并浓缩后，放置 3d，析出浅黄色颗粒状结晶，抽滤，干燥，得粗结晶72.6g，收率为24.2%(以生药计)。
, 百拇医药
2.2 分离精制
取上述粗结晶20g，加丙酮回流提取2次，第1次加丙酮60 ml，第2次加丙酮30ml，每次回流5～10min。合并2次提取液，浓缩至小体积后，加水至700m l，放置，析出大量白色结晶，过滤。所得结晶再依上法重结晶，最后得白色细针晶或粉末状结晶(结晶Ⅰ)。
取上述20g粗结晶经丙酮提取后的不溶性残渣，加乙醇：水(1∶1)30ml，回流提取20min，趁 热过滤，然后浓缩至小体积，放置，数日后慢慢析出棕黄色簇状或小颗粒状结晶(结晶Ⅱ)。
将提得的粗结晶分3次按上述方法进行分离精制，每次取20g,得到结晶Ⅰ分别为16.4，16. 0和16.2g，平均收率为19.6%；得到结晶Ⅱ分别为0.451，0.403和0.421g，平均收率为0 .51%(以上提取率均按生药计)。
3 鉴 定
, 百拇医药
3.1 薄层色谱分析
将上述提取分离得到的各产物结晶Ⅰ和结晶Ⅱ分别取少量用 乙醇溶解后，点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-氯仿-甲酸(10∶6∶1)或苯-乙酸乙酯- 甲酸(6∶10∶1)展开，以1%三氯化铁乙醇液为显色剂，可见各产物用以上两个不同溶剂系统 展开后均为单一斑点，并且结晶Ⅰ和结晶Ⅱ的Rf值分别与已知双氢杨梅树皮素和 杨梅素对照品的Rf值一致。
3.2 鉴定
结晶Ⅰ为白色细针晶，mp.244～245℃(dec.)，易溶于丙酮、热乙醇、热水，溶于甲醇、乙 醇，不溶于氯仿、石油醚。盐酸镁粉反应呈玫瑰红色，三氯化铁反应呈紫黑色，与三氯化铝 反应呈强黄绿色荧光；α-萘酚反应阴性；与锆盐-柠檬酸反应，鲜黄色 不褪；UVλMeOHmaxnm(lgε)：291.5nm(4.17，带Ⅱ)和330nm(sh)。IR(KBr,cm -1)：3300～3650(OH)，1640(α，β-不饱和C=0)，1595，1500， 1465(芳环C=C)，所得光谱与已知双氢杨梅树皮素对照品的光谱一致。质谱m/z(%)测得分子 量为320(53)，主要裂解碎片有 153(100)，291(66)，139(29)，165(22)，166(34)，168(22 )，69(8)，符合二氢黄酮醇的裂解规律。综上，确证新方法 提取所得到的结晶Ⅰ为3，5，7 ，3′，4′，5′-六羟基二氢黄酮，即双氢杨梅树皮素(dihydromyricetin)。
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结晶Ⅱ为棕黄色颗粒状结晶，mp>300℃，溶于热乙醇、甲醇，不溶于丙酮、氯仿、石油醚 。盐酸镁粉反应呈玫瑰红色，三氯化铁反应呈紫黑色，与三氯化铝反应呈强黄绿色荧光；[ WTBX α-萘酚反应阴性；与锆盐-柠檬酸反应，鲜黄色不褪；UVλMeOH maxnm：376.5nm(带Ⅰ)，254nm(带Ⅱ)。IR(KBr,cm-1)：3575,3380,3255(OH)，1 646(α，β-不饱和C=0)，1612,1550,1505,1454 (芳环C=C)，所得光谱 与已知杨梅素对照品的光谱完全一致。FAB-MSm/z(%)：319(M++H,100)，318(M+,23.5) 。乙酰化物mp.210～211℃，1HNMR(CDCl3)ppm：δ7.62(2H,s,C2′,6′-H),δ7 .35(1H,s,C8-H),δ6.88(1H,s,C6-H),δ2.42(3H,s,OCOCH3),δ2.31(15H,m,5×OCO CH3)。根据以上理化性质和光谱数据分析，确证新方法提取得到的结晶Ⅱ是杨梅素(Myric etin)。
, 百拇医药
致谢：广西中医学院药学系九七届毕业实习生张全安、罗荔东参 加部分工作，特此致谢。
参考文献
1，广西中医药研究所编.广西药用植物名录.南宁：广西人 民出版社，1986∶300.
2，覃洁萍，许学健，李剑江.广西瑶族藤茶化学成份的研究 .天然产物研究与开发，1997；9(4)∶41.
3，周天达，周雪仙.藤茶中双氢黄酮醇的分离、结构鉴定及 药理活性研究.中国药学杂志，1996；31(8)∶458.
4，钟正贤，覃洁萍，周桂芬，等.广西瑶族藤茶中双氢杨梅 树皮素的药理研究.中国民族医药杂志，1998，4(3)∶42.
5，国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册 .北京：人民卫生出版社，1986∶751.
收稿日期：1998-10-12, 百拇医药