黄蜀葵花对肾病综合征模型大鼠肾小管损伤保护作用的研究
作者：尹莲芳 刘璐 弓玉祥 濮家伉
单位：尹莲芳 弓玉祥(南京铁道医学院附属医院肾内科)；刘璐(南京铁道医学院放免中心)；濮家伉(南京铁道医学院药理教研室)
关键词：黄蜀葵花；阿霉素肾病大鼠；Ⅲ型胶原；NAG；β2-MG
首都医科大学学报000310 提要：为探讨中药黄蜀葵花对肾病综合征肾小管损伤的保护作用，将每只实验大鼠静脉注射阿霉素5 mg/kg，同时饲以黄蜀葵花,观察其对大鼠尿Ⅲ型胶原、N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2微球蛋白(β2-MG)总排泄量的影响。结果：阿霉素肾病模型大鼠尿Ⅲ型胶原、NAG、β2-MG水平均显著高于对照组(P<0.01)，而黄蜀葵花治疗组的上述3项指标与对照组相比无差异，且显著低于模型组(P<0.01)。结果提示：阿霉素肾病综合征模型大鼠存在肾小管间质损害，黄蜀葵花对其具有保护作用。
, http://www.100md.com
中图分类号：R692
Protective Effect of Abelmosehus
Manihot on Rats Renal Tubular
with Nephrotic Syndrome
Yin Lianfang，Gong Yuxiang
(Department of Nephrology, Affiliated Hospital of Nanjing Railway Medical College)
Liu Lu
(Radioimmunoassay Center)
, http://www.100md.com
Pu Jiakang
(Department of Pharmacology)
Abstract：To investigate the protective effects of Abelmosehus manihot (Am) on rat renal tubular with nephrotic syndrome, the nephrotic rat model was made by tail vein injection of adriamycin 5mg/kg. Am was given and changes of urinary type Ⅲ collagen(C-Ⅲ)，N-acetyl-β-D-glucosa-minidase(NAG)and β2-microglobulin(β2-MG) were observed. It was shown that the excretion of urinary C-Ⅲ，NAG and β2-MG in nephrotic rats were significantly increased as compared with those of the normal control group (P<0.01). In the group treated with Am, the excretion of urinary C-Ⅲ，NAG and β2-MG did not increase obviously . Am exerted strong protective effects on rats renal tubular damage with adriamycin-induced nephrotic syndrome.
, http://www.100md.com
Key words: Abelmosehus manihot; adriamycin-induced nephrotic syndrome; type Ⅲ collagen; N-acetyl-β-D-glucosa-minidase; β2-microglobulin
我们在前期研究中发现阿霉素对肾小管细胞有直接损害作用[1]。1999年4～8月，我们从阿霉素肾病模型制备早期开始采用中药黄蜀葵花进行干预治疗，以观察黄蜀葵花对肾小管的保护作用，间接探讨肾小管细胞损害在该模型中的病理生理意义。
1 材料和方法
1.1 动物模型的制备及给药方法
雄性SD大鼠25只，体质量150～200 g，由本院动物实验中心提供。其中16只行阿霉素(汕头明治医药公司生产，用生理盐水配制成2 g/L的溶液)5 mg/kg 1次尾静脉注射。9只为正常对照组：尾静脉注射相应容量的生理盐水。将阿霉素注射大鼠按体质量排序随机分为2组，即阿霉素肾病组(AN)和黄蜀葵花治疗组(AN/A)。AN/A组：一注射阿霉素即开始黄蜀葵花(南京老山制药厂提供)灌胃，2 g/kg，每日1次。AN组及正常对照组于注射后即开始灌胃等量自来水。各组大鼠于注射后3周结束实验。
, 百拇医药
1.2 观察项目
24 h尿蛋白定量，24h尿Ⅲ型胶原(放免法)、N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)(化学法)、β2微球蛋白(β2-MG)(放免法)总排泄量及血肌酐、尿素氮、胆固醇、三酰甘油、白蛋白、总蛋白。
1.3 统计学处理
所有数据用均数±标准差表示，多组均数差异的统计学分析用方差分析，2组均数差异的统计学分析用q检验。
2 结果
黄蜀葵花治疗对阿霉素肾病大鼠尿和血指标的影响见表1和表2。AN/A组24 h尿量及24 h尿Ⅲ型胶原、NAG、β2-MG总排泄量及血胆固醇(CH)、三酰甘油(TG)、白蛋白、总蛋白与AN组比较均有显著差异(P<0.01)。而黄蜀葵花治疗对24 h尿蛋白定量及血肌酐、尿素氮的影响无统计学意义。
, 百拇医药
表1 黄蜀葵花对阿霉素肾病模型大鼠尿各项指标的影响 组别
n
尿量/
(mL.d-1)
尿蛋白/
(mg.d-1)
Ⅲ型胶原/
(μg.d-1)
NAG/(mU.d-1)
β2-MG/
, 百拇医药
(μg.d-1)
对照组
9
5.18±2.42
12.34±8.55
0.20±0.04
7.16±0.19
0.15±0.02
AN
8
8.93±4.08
50.99±22.62* *
, http://www.100md.com
0.50±0.16* *
11.03±0.85* *
0.37±0.04* *
AN/A
8
6.20±1.35
42.92±18.35* *
0.28±0.11△ △
8.80±0.78△ △
0.31±0.02△ △
, 百拇医药
* *与对照组比较P<0.01；△ △与AN组比较P<0.01表2 黄蜀葵花对阿霉素肾病模型大鼠血各项指标的影响 组别
n
c(BUN)/
(mmol*L-1)
c(Cr)/
(μmol*L-1)
ρ(TP)/
(g*L-1)
ρ(Alb)/
(g*L-1)
, http://www.100md.com
c(CH)/
(mmol*L-1)
c(TG)/
(mmol*L-1)
对照组
9
6.63±1.09
75.86±4.95
68.71±3.25
27.86±1.57
1.62±0.20
, http://www.100md.com 0.56±0.18
AN
8
5.81±1.78
69.62±17.25
48.75±3.91**
19.66±2.50**
4.62±1.50*
6.36±5.13*
AN/A
8
, 百拇医药
58±1.14
72.33±11.19
59.22±5.47△ △ **
23.11±1.16△ △ **
2.57±1.41△
3.09±1.59△
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01； 与AN组比较△P<0.05，△ △P<0.01
3 讨论
阿霉素对肾小管间质损害的报道不多，也缺乏有效的对抗阿霉素肾毒性的药物。本实验结果表明，阿霉素肾病大鼠尿Ⅲ型胶原、NAG以及β2-MG的总排泄量均明显增加，提示存在肾小管损害。有实验表明Ⅲ型胶原氨基段肽在尿中的浓度为血清中的50倍[2]，提示该胶原片段在肾脏降解并从尿中排泄。NAG广泛存在于细胞的溶酶体内，肾脏是其储存的主要器官之一，以近曲小管上皮细胞中含量最高[3]。尿NAG是由近曲小管释放的大分子酶，其尿排泄量增加可作为近曲小管损害的标志[4]。尿NAG是肾中毒性损伤的敏感指标[5]。尿β2-MG的排泄量主要取决于近曲小管功能，如尿中含量增加，则可说明近曲小管受损。
, http://www.100md.com
阿霉素致肾小管间质损害发生机制尚未十分明确。大多数研究表明尿蛋白有明显的肾毒性，主要是由于肾小球受损时滤过到肾小管液中的某些大分子蛋白以及具有特殊生物活性的蛋白与肾小管上皮细胞相互作用，激活肾小管细胞，后者可以与间质中的吞噬细胞和成纤维细胞相互作用，引起细胞外基质蛋白在肾内大量沉积，导致间质纤维化[6]。
缺血、中毒或感染是造成肾小管损害的最常见原因，缺血缺氧产生的氧自由基可直接破坏细胞膜的完整性[7]。而黄蜀葵花提取物含有黄酮甙类如槲皮素等均为活泼的自由基清除剂[8]。我们推测黄蜀葵花保护肾小管损害的机制可能与其有效成分槲皮素有关。同时黄蜀葵花纠正阿霉素大鼠的低蛋白血症和高脂血症也非常有效。但值得注意的是，我们的初步研究结果提示黄蜀葵花对肾小管细胞的保护作用不以显著降低蛋白尿为前提。鉴于黄蜀葵花保护肾小管细胞的特异性，这些研究结果可能间接反映了阿霉素在该肾病模型中对肾小管的直接损伤，并提示黄蜀葵花有对抗阿霉素肾毒性的作用，值得进一步研究。
, http://www.100md.com
铁道部卫生司基金资助课题(97079)
参考文献
1，尹莲芳,濮家伉,弓玉祥,等.黄蜀葵花对阿霉素大鼠钠潴留改善作用的机制.中华肾脏病杂志,1999,15(5):324
2，Bentsen K D, Henriksen J H, Boeshy S, et al. Hepatic and renal extraction of circulation type Ⅲ procollagen amino-termina propeptide and hyaluronan in pig. J Hepatol, 1989, 9(2):177:83
3，Price B G. Urinary emzymes,nephrotoxicity and renal. Toxicology, 1982,23:99
, 百拇医药
4，Malleson, Lociitch G, Mackinnon M, et al. Renal disease in chronic arthritis of childhood: A Study of urinary N-acetyl-betaglcosaminidase and beta-2-microglobulin exeretion. Arthritics Rheum, 1990,33:1560
5，Dance N. The excretion of N-acetyl-β-D-glucosa-minidase and β-galactosidase by patients with renal disease. Clin Chim Acta, 1970,27:89
6，Shi-Nong Wang, Raimund Hirschberg. Tubular epithelial cell activation and interstitial fibrosis, The role of glomerular ultrafiltration of growth factors in the nephrotic syndrome and diabeticnephropathy. Nephrol Dial Transplant, 1999,14:2072～2074
7，顾振伦,赵雪英.槲皮素对培养内皮细胞释放内皮素的影响.中国药理学报,1996,(5):442
8，王光荣.黄蜀葵花的化学成分研究.植物学报,1981,23(3):222
收稿日期：1999-12-23, 百拇医药
单位：尹莲芳 弓玉祥(南京铁道医学院附属医院肾内科)；刘璐(南京铁道医学院放免中心)；濮家伉(南京铁道医学院药理教研室)
关键词：黄蜀葵花；阿霉素肾病大鼠；Ⅲ型胶原；NAG；β2-MG
首都医科大学学报000310 提要：为探讨中药黄蜀葵花对肾病综合征肾小管损伤的保护作用，将每只实验大鼠静脉注射阿霉素5 mg/kg，同时饲以黄蜀葵花,观察其对大鼠尿Ⅲ型胶原、N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2微球蛋白(β2-MG)总排泄量的影响。结果：阿霉素肾病模型大鼠尿Ⅲ型胶原、NAG、β2-MG水平均显著高于对照组(P<0.01)，而黄蜀葵花治疗组的上述3项指标与对照组相比无差异，且显著低于模型组(P<0.01)。结果提示：阿霉素肾病综合征模型大鼠存在肾小管间质损害，黄蜀葵花对其具有保护作用。
, http://www.100md.com
中图分类号：R692
Protective Effect of Abelmosehus
Manihot on Rats Renal Tubular
with Nephrotic Syndrome
Yin Lianfang，Gong Yuxiang
(Department of Nephrology, Affiliated Hospital of Nanjing Railway Medical College)
Liu Lu
(Radioimmunoassay Center)
, http://www.100md.com
Pu Jiakang
(Department of Pharmacology)
Abstract：To investigate the protective effects of Abelmosehus manihot (Am) on rat renal tubular with nephrotic syndrome, the nephrotic rat model was made by tail vein injection of adriamycin 5mg/kg. Am was given and changes of urinary type Ⅲ collagen(C-Ⅲ)，N-acetyl-β-D-glucosa-minidase(NAG)and β2-microglobulin(β2-MG) were observed. It was shown that the excretion of urinary C-Ⅲ，NAG and β2-MG in nephrotic rats were significantly increased as compared with those of the normal control group (P<0.01). In the group treated with Am, the excretion of urinary C-Ⅲ，NAG and β2-MG did not increase obviously . Am exerted strong protective effects on rats renal tubular damage with adriamycin-induced nephrotic syndrome.
, http://www.100md.com
Key words: Abelmosehus manihot; adriamycin-induced nephrotic syndrome; type Ⅲ collagen; N-acetyl-β-D-glucosa-minidase; β2-microglobulin
我们在前期研究中发现阿霉素对肾小管细胞有直接损害作用[1]。1999年4～8月，我们从阿霉素肾病模型制备早期开始采用中药黄蜀葵花进行干预治疗，以观察黄蜀葵花对肾小管的保护作用，间接探讨肾小管细胞损害在该模型中的病理生理意义。
1 材料和方法
1.1 动物模型的制备及给药方法
雄性SD大鼠25只，体质量150～200 g，由本院动物实验中心提供。其中16只行阿霉素(汕头明治医药公司生产，用生理盐水配制成2 g/L的溶液)5 mg/kg 1次尾静脉注射。9只为正常对照组：尾静脉注射相应容量的生理盐水。将阿霉素注射大鼠按体质量排序随机分为2组，即阿霉素肾病组(AN)和黄蜀葵花治疗组(AN/A)。AN/A组：一注射阿霉素即开始黄蜀葵花(南京老山制药厂提供)灌胃，2 g/kg，每日1次。AN组及正常对照组于注射后即开始灌胃等量自来水。各组大鼠于注射后3周结束实验。
, 百拇医药
1.2 观察项目
24 h尿蛋白定量，24h尿Ⅲ型胶原(放免法)、N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)(化学法)、β2微球蛋白(β2-MG)(放免法)总排泄量及血肌酐、尿素氮、胆固醇、三酰甘油、白蛋白、总蛋白。
1.3 统计学处理
所有数据用均数±标准差表示，多组均数差异的统计学分析用方差分析，2组均数差异的统计学分析用q检验。
2 结果
黄蜀葵花治疗对阿霉素肾病大鼠尿和血指标的影响见表1和表2。AN/A组24 h尿量及24 h尿Ⅲ型胶原、NAG、β2-MG总排泄量及血胆固醇(CH)、三酰甘油(TG)、白蛋白、总蛋白与AN组比较均有显著差异(P<0.01)。而黄蜀葵花治疗对24 h尿蛋白定量及血肌酐、尿素氮的影响无统计学意义。
, 百拇医药
表1 黄蜀葵花对阿霉素肾病模型大鼠尿各项指标的影响 组别
n
尿量/
(mL.d-1)
尿蛋白/
(mg.d-1)
Ⅲ型胶原/
(μg.d-1)
NAG/(mU.d-1)
β2-MG/
, 百拇医药
(μg.d-1)
对照组
9
5.18±2.42
12.34±8.55
0.20±0.04
7.16±0.19
0.15±0.02
AN
8
8.93±4.08
50.99±22.62* *
, http://www.100md.com
0.50±0.16* *
11.03±0.85* *
0.37±0.04* *
AN/A
8
6.20±1.35
42.92±18.35* *
0.28±0.11△ △
8.80±0.78△ △
0.31±0.02△ △
, 百拇医药
* *与对照组比较P<0.01；△ △与AN组比较P<0.01表2 黄蜀葵花对阿霉素肾病模型大鼠血各项指标的影响 组别
n
c(BUN)/
(mmol*L-1)
c(Cr)/
(μmol*L-1)
ρ(TP)/
(g*L-1)
ρ(Alb)/
(g*L-1)
, http://www.100md.com
c(CH)/
(mmol*L-1)
c(TG)/
(mmol*L-1)
对照组
9
6.63±1.09
75.86±4.95
68.71±3.25
27.86±1.57
1.62±0.20
, http://www.100md.com 0.56±0.18
AN
8
5.81±1.78
69.62±17.25
48.75±3.91**
19.66±2.50**
4.62±1.50*
6.36±5.13*
AN/A
8
, 百拇医药
58±1.14
72.33±11.19
59.22±5.47△ △ **
23.11±1.16△ △ **
2.57±1.41△
3.09±1.59△
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01； 与AN组比较△P<0.05，△ △P<0.01
3 讨论
阿霉素对肾小管间质损害的报道不多，也缺乏有效的对抗阿霉素肾毒性的药物。本实验结果表明，阿霉素肾病大鼠尿Ⅲ型胶原、NAG以及β2-MG的总排泄量均明显增加，提示存在肾小管损害。有实验表明Ⅲ型胶原氨基段肽在尿中的浓度为血清中的50倍[2]，提示该胶原片段在肾脏降解并从尿中排泄。NAG广泛存在于细胞的溶酶体内，肾脏是其储存的主要器官之一，以近曲小管上皮细胞中含量最高[3]。尿NAG是由近曲小管释放的大分子酶，其尿排泄量增加可作为近曲小管损害的标志[4]。尿NAG是肾中毒性损伤的敏感指标[5]。尿β2-MG的排泄量主要取决于近曲小管功能，如尿中含量增加，则可说明近曲小管受损。
, http://www.100md.com
阿霉素致肾小管间质损害发生机制尚未十分明确。大多数研究表明尿蛋白有明显的肾毒性，主要是由于肾小球受损时滤过到肾小管液中的某些大分子蛋白以及具有特殊生物活性的蛋白与肾小管上皮细胞相互作用，激活肾小管细胞，后者可以与间质中的吞噬细胞和成纤维细胞相互作用，引起细胞外基质蛋白在肾内大量沉积，导致间质纤维化[6]。
缺血、中毒或感染是造成肾小管损害的最常见原因，缺血缺氧产生的氧自由基可直接破坏细胞膜的完整性[7]。而黄蜀葵花提取物含有黄酮甙类如槲皮素等均为活泼的自由基清除剂[8]。我们推测黄蜀葵花保护肾小管损害的机制可能与其有效成分槲皮素有关。同时黄蜀葵花纠正阿霉素大鼠的低蛋白血症和高脂血症也非常有效。但值得注意的是，我们的初步研究结果提示黄蜀葵花对肾小管细胞的保护作用不以显著降低蛋白尿为前提。鉴于黄蜀葵花保护肾小管细胞的特异性，这些研究结果可能间接反映了阿霉素在该肾病模型中对肾小管的直接损伤，并提示黄蜀葵花有对抗阿霉素肾毒性的作用，值得进一步研究。
, http://www.100md.com
铁道部卫生司基金资助课题(97079)
参考文献
1，尹莲芳,濮家伉,弓玉祥,等.黄蜀葵花对阿霉素大鼠钠潴留改善作用的机制.中华肾脏病杂志,1999,15(5):324
2，Bentsen K D, Henriksen J H, Boeshy S, et al. Hepatic and renal extraction of circulation type Ⅲ procollagen amino-termina propeptide and hyaluronan in pig. J Hepatol, 1989, 9(2):177:83
3，Price B G. Urinary emzymes,nephrotoxicity and renal. Toxicology, 1982,23:99
, 百拇医药
4，Malleson, Lociitch G, Mackinnon M, et al. Renal disease in chronic arthritis of childhood: A Study of urinary N-acetyl-betaglcosaminidase and beta-2-microglobulin exeretion. Arthritics Rheum, 1990,33:1560
5，Dance N. The excretion of N-acetyl-β-D-glucosa-minidase and β-galactosidase by patients with renal disease. Clin Chim Acta, 1970,27:89
6，Shi-Nong Wang, Raimund Hirschberg. Tubular epithelial cell activation and interstitial fibrosis, The role of glomerular ultrafiltration of growth factors in the nephrotic syndrome and diabeticnephropathy. Nephrol Dial Transplant, 1999,14:2072～2074
7，顾振伦,赵雪英.槲皮素对培养内皮细胞释放内皮素的影响.中国药理学报,1996,(5):442
8，王光荣.黄蜀葵花的化学成分研究.植物学报,1981,23(3):222
收稿日期：1999-12-23, 百拇医药