鼻咽癌病人多项免疫功能及EB病毒PCR检测的综合研究
作者：展鸿谋 杨一兵 叶聪俊 葛继红 伍治平 王文慧
单位：(昆明医学院第一附属医院，昆明 650032)
关键词：鼻咽癌；免疫功能；EB病毒；PCR检测
昆明医学院学报000313 摘要：为进一步了解EB病毒与鼻咽癌的关系，全面综合调查鼻咽癌病人的免疫功能，应用PCR方法检测鼻咽癌病人组织块EB病毒DNA，并对鼻咽癌病人血清中EB病毒(EBV—VCA/IgA)抗体、超氧化物歧化酶(SOD)活性、脂质过氧化物降解产物(MDA)及数种微量元素含量进行测定.结果：从鼻咽癌病人鼻咽部活检组织中成功地检测出EB病毒DNA片断.进一步证实了EB病毒与鼻咽癌的发生有密切关系.并对鼻咽癌病人血清VCA/IgA，SOD，MDA 及数种微量元素进行对比观测及综合研究，为鼻咽癌的诊断、治疗及预后评估等，提供了可靠的依据.
中图分类号：R 739 文献标识码：A 文章编号：1003-4706(2000)03-0049-05
, http://www.100md.com
The Synthetical Study of Multiple Immune Functions
and Epstein-Barr Virus Detected by Polymerase Chain
Reaction in Nasopharyngeal Carcinoma Patients
ZHAN Hong-mou，YANG Yi-bing，YE Chong-jun，GUO Ji-hong，WANG Wen-hui，WANG Jia-cui
(the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650032)
WU Zhi-ping
, http://www.100md.com
(the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650106)
Abstract：To understand further the relations between Epstein-Bar virus (EBV) and nasopharyngeal carcinoma(NPC) and synthetically investigate immune functions in NPC patients, we detected DNA fragment of EBV using polymerase chain reaction (PCR) method and determined antibody (EBV-VCA/IgA), activity of superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde(MDA) and varied trace elements in serum in NPC patients. The results: DNA fragment of EBV was detected from nasopharyngeal tissue in NPC patients, it is further demonstrated that there are close relations between the occurrence of nasopharyngeal carcinoma and the infection of Epstein-Barr virus. The synthetical and comparative study on EBV-VCA/IgA, SOD, MDA and varied trace elements in serum in NPC patients provided a scientific basis for diagnosis, therapeusis and prognosis.
, http://www.100md.com
Key words：Nasopharyngeal carcinoma； Immune function； Epstein-Barr virus； Polymerase chain reaction
鼻咽癌系鼻咽部发生的癌肿，大多数是鳞状细胞癌，为我国最常见的恶性肿瘤之一.
鼻咽癌的发病率为耳鼻咽喉部恶性肿瘤之冠.在全身恶性肿瘤中，亦占重要地位.据李振权等观察，鼻咽癌占全身恶性肿瘤的30.97%，占头颈部癌的78.08%，占上呼吸道癌的92.99%.男性的发病率较高，男女病人的比例约为3：1，患者年龄在3～86岁均可发生，但多在30～49岁之间，正值壮年奋发有为之际，且鼻咽部解剖位置隐蔽，更造成鼻咽癌诊断治疗的困难.
为了提高鼻咽癌诊断治疗水平，国内外对鼻咽癌有较多的研究报道，但对鼻咽癌病人鼻咽部活检组织中EB病毒的检测报道甚少.我省地处边疆，医疗条件差，而鼻咽癌病人很多，对鼻咽癌病人血清中EB病毒壳抗原(EBV-VCA/IgA)抗体滴度的改变，超氧化物歧化酶(SOD)，脂质过氧化物降解产物(MDA)及微量元素的测定等均无系统性观测，更无综合研究的报道.现将我们的研究报道如下.
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1 材料与方法
1.1 应用PCR技术检测鼻咽癌病人鼻咽组织块中EB病毒DNA
试剂与仪器：(1)德国QIAG公司产DNA提取试剂盒；(2)上海复星高科技公司产EB病毒DNA，PCR检测试剂盒；(3)德国Perkin-Elmer公司9600型PCR仪；(4)北京六一厂生产微型琼脂糖电泳仪.
所有试剂均为分析纯以上，溶液使用双蒸水配制.
方法：共检测5例病人，取每例病人鼻咽部活检组织各2块，1块送常规病理检查；另1块作EB病毒NDA的PCR检测，使用前保存在液氮中.另设由原试剂盒已配备的阳性对照和阴性对照各1例.
组织块经组织裂解液及蛋白酶消化，提取DNA；DNA经PCR 40个循环扩增.
, 百拇医药
进行PCR扩增时，热循环的条件为：
共进行40个循环，最后一个循环后，72℃延伸10 min.
作PCR扩增产物鉴定，在紫外检测仪上观察，并在暗室中照相，记录实验结果.
实验重复进行一次.
1.2 鼻咽癌病人血清中EB病毒壳抗原(EBV-VCA/IgA)抗体水平的测定
鼻咽癌病人血清中EB病毒壳抗原(EBV-VCA/IgA)抗体水平的测定采用免疫酶标法进行，酶标试剂盒系卫生部上海生物制品研究所生产.进行测定的有鼻咽癌病人57例，对照组15例.
1.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定及脂质过氧化物降解产物测定
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超氧化物歧化酶(SOD)活性测定采用黄嘌呤氧化酶法，脂质过氧化物降解产物(MDA)水平测定采用硫化巴比妥法，药盒均由南京建成生物工程研究所提供，分别测定鼻咽癌病人30例，对照组47例.
1.4 鼻咽癌病人4种微量无素含量测定
对30例鼻咽癌病人及47例对照组进行Zn2+，Cu2+，Ca2+，Mg2+4种元素含量的测定.测定方法采用AA-670型原子吸收分光光度法.2 结果
2.1 应用PCR方法检测鼻咽癌病人组织块EB病毒DNA
作常规病理检查的5例，结果皆为鳞状细胞癌；标本为5例经病理检查证实为鳞状细胞癌患者的鼻咽组织块.
应用PCR方法检测组织块EB病毒DNA，5例样品，在PCR扩增后，经琼脂糖电泳，均在250 bp处有特异扩增带，经两次重复实验，结果皆一致.可以判定5例样品组织均为EB病毒感染阳性，阳性对照1例为(+++)，阴性对照1例为(-)，结果见表1.
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表1 PCR方法检测鼻咽癌组织块EB病毒DNA 样品编号
PCR结果
病理检查
阳性对照
+++
-
1
+
低分化鳞癌
2
+
低分化鳞癌
3
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+
低分化鳞癌
4
+
低分化鳞癌
5
+
低分化鳞癌
阴性对照
-
-
2.2 鼻咽癌病人血清中EB病素(EBV-VCA/IgA)抗体测定
鼻咽癌病人血清EBV-VCA/IgA抗体阳性率为100%.
, 百拇医药
鼻咽癌组与对照组血清EBV-VCA/IgA抗体滴度结果见表2.表2 鼻咽癌组与对照组EBV-VCA/IgA抗体滴度比较 组别
n
<1：5
1：5
1：10
1：20
1：40
1：80
1：160
1：320
鼻咽癌组
51
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0
0
3
9
21
12
6
0
对照组
15
10
2
3
0
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0
0
0
0
鼻咽癌组平均滴定度为1：44.50，对照组平均滴度为1：1.96，以两组数据行对数转换后以t检验进行统计学分析，两组平均滴定度(几何均数)的差异有显著性(P<0.01).
鼻咽癌临床分期与EBV-VCA/IgA抗体滴度关系见表3.表3 鼻咽癌临床分期与血清EBV-VCA/IgA抗体滴度的关系 分期
n
1：5
1：10
1：20
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1：40
1：80
1：160
1：320
Ⅱ
20
0
0
9
10
1
0
0
Ⅲ
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27
0
2
0
10
10
5
0
Ⅳ
4
0
1
0
1
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1
1
0
Ⅱ期平均滴定度为1：30.31，Ⅲ期平均滴定度为1：60.32，Ⅳ期平均滴定度为1：47.57.
以方差分析法对3期之间的EBV-VCA/IgA滴定度进行统计学处理，结果3期之间的EBV-VCA/IgA滴定度有显著性差异(P<0.01)，且各期之间相互比较q检验均有显著性或高度显著性差异.Ⅱ与Ⅲ期比，P<0.01；Ⅱ与Ⅳ期比，P<0.01；Ⅲ与Ⅳ期比，P<0.05.
鼻咽癌病人血清EBV-VCA/IgA与肿瘤病理类型的关系上，我们检测的51例中低分化鳞癌49例，中分化鳞癌、未分化癌各1例.由于绝大部分病人为低分化鳞癌，其余病理类型太少，未进行统计学处理.
2.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定及脂质过氧化物降解产物测定
, 百拇医药
结果见表4.表4 鼻咽癌组与对照组SOD与MDA含量的比较 组别
n
SOD(nU/mL)
MDA(nmol/mL)
鼻咽癌组
30
72.5±10.76
5.23±0.92
对照组
47
84.57±8.74
4.72±0.65
, 百拇医药
P 值
<0.01
<0.01
鼻咽癌组与对照组的SOD及MDA含量比较，分别以t检验进行统计学处理，显示鼻咽癌组SOD低于对照组(P<0.01)，鼻咽癌组MDA高于对照组(P<0.01)，鼻咽癌组SOD及MDA与对照组比均有高度显著性差异.
2.4 鼻咽癌病人4种微量元素含量测定
结果见表5.表5 鼻咽癌组与对照组4种微量元素含量比较
(μmol/L) 组别
鼻咽癌组
对照组
, 百拇医药
例数
30
47
Zn2+
17.55±6.01
22.85±6.05
Cu2+
18.30±3.26
21.85±4.55
Ca2+
2.24±0.32
2.625±0.375
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Mg2+
0.903±0.208
0.985±0.285
以t检验进行统计学处理，鼻咽癌组Zn2+，Cu2+，Ca2+与对照组比较均有高度显著性差异，低于对照组(P<0.01)，而鼻咽癌组的Mg2+与对照组比未见显著性差异(P>0.05).3 讨论
3.1 EB病毒与鼻咽癌的关系
鼻咽癌是多因素综合作用的结果，如遗传因素、病毒因素、环境致癌因素等，为了深入寻找鼻咽癌病因，国内外作了大量的研究工作.1964年Epstein和Barr首次从非洲儿童淋巴瘤(Burkitt淋巴瘤)的活检组织中建立了一株可以传代的淋巴母细胞株，电镜下可见疱疹型病毒颗粒.由于其具有与疱疹病毒家族其它成员不同的特性，故被命名为Epstein-Barr病毒，即EB病毒.多年来的流行病学调查认为EB病毒与鼻咽癌的发生有密切关系.
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为进一步证实鼻咽癌与EB病毒的关系，本课题共检测5例病人，取每例病人鼻咽部活检组织各2块，1块送常规病理检查；另1块用PCR方法检测EB病毒DNA，并各设1例阳性对照和阴性对照.结果病检结果皆为鼻咽鳞状细胞癌的5例用PCR 测定EB病毒DNA，经两次重复实验，均证实为EB病毒感染阳性.且本课题检测鼻咽癌病人血清EBV-VCA/IgA 5例，证实均存在EB病毒特异性抗体，而且其滴定度明显高于正常人，以上结果皆可提示EB病毒与鼻咽癌的发生有密切关系，至于EB病毒是如何导致鼻咽癌?是直接产生鼻咽癌，还是EB病毒在其它因素的作用下，才诱发鼻咽癌的?这些还有待进一步深入研究.
鼻咽癌病人鼻咽组织EB病毒PCR检测难度大，要求高，技术性强，国内报道极少，我省系首次成功作PCR检测EB病毒，填补了我省的一项空白.
3.2 鼻咽癌病人血清中EBV-VCA/IgA抗体测定的临床意义
抗原与相应的抗体接触后，可形成不溶性的“抗原-抗体复合物”.此复合物在细胞内或组织内是不可见的，为使“抗原-抗体复合物”成为可见，须先将某类色素与上述抗体结合，成为色素标记的抗体，当它再与相应的抗原结合时，即成为可见的“抗原-抗体复合物”.如用酶作为色素与抗体结合的接合剂时，称为“免疫酶标记法”.所用酶的种类很多，常用者为辣根过氧化物酶.
, 百拇医药
自1996年Nakane和Avrameas等用辣根过氧化物酶代替荧光素标记抗体成功后，免疫酶标技术在其后有了飞跃发展，证明它较免疫荧光法有更多的优点，现在越来越多地将免疫酶标法用于鼻咽癌的监测、普查.
本课题用免疫酶标法检测51例鼻咽癌病人，证实其血清中均存在EB病毒VCA/IgA特异性抗体，而且滴定度明显高于正常人，对照组各例的滴定度不超过1：10，平均滴定度1：44.50.提示EB病毒与鼻咽癌的发生有密切关系.
鼻咽癌病人EB病毒VCA/IgA的滴定度随着肿瘤临床分期的不同而不同.一般讲，随着临床分期升高，即病变范围扩大，EB病毒VCA/IgA的滴定度就增高.本课题中Ⅱ期病人的平均滴定度为1：30.31，Ⅲ期病人的平均滴定度为1：60.32，但Ⅳ期病人的平均滴定度为1：47.57，较Ⅲ期病人降低，是否与我们检测Ⅳ期病人例数少有关，尚需进一步研究.
3.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定及脂质过氧化物降解产物(MDA)水平测定的意义
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自由基是外层轨道未配对的电子原子团或特殊状态的分子，是机体利用氧的过程中产生的超氧化物[1].正常的机体自由基的产生、利用和消除之间存在着动态的平衡.当吸烟、酗酒、病毒感染及离子辐射等损伤而致超氧化自由基的生成和消除中平衡失调时，超氧化自由基和过氧化氢堆积到一定的浓度，就可能引起细胞内导致有害自由基链反应的运作，损害磷脂、蛋白质、核酸等，使其丧失正常的功能而诱发疾病[2].超氧化物歧化酶(SOD)是消除机体内自由基使其转化为无害的水和氧的重要酶.SOD活力的变化反映了机体抑制自由基损伤的能力.我们对30例鼻咽癌血清中SOD活力和MDA的检测发现，SOD活力都明显低于正常对照组，其差别有显著性.且鼻咽癌脂质过氧化物的含量亦明显高于对照组，表明病人体内有组织细胞的损伤，机体防御自由基损伤的能力降低，是肿瘤得以发生的重要原因.
3.4 微量元素在机体中的意义
机体内SOD防御自由基链运作的机制有赖于特定的抗氧化微量营养素的存在，其中 锰是SOD的主要成份，锌有维持隔室封闭，防止自由基对细胞的攻击，保护细胞膜和正常分裂的作用.铜是多种酶的组成成分，可影响线粒体的能量代谢与细胞的生长，作为抗氧化酶的辅助因子，有作者报道可影响肿瘤病人病情的转归[3].
, 百拇医药
我们对30例鼻咽癌病人Zn2+，Cu2+，Ca2+，Mg2+的测定显示，鼻咽癌组Zn2+，Cu2+，Ca2+3种微量元素含量均明显低于对照组，只有Mg2+的含量无变化，表明鼻咽癌病人SOD活力的降低与体内微量元素的缺乏有一定关系.
由于人体内微量元素很多，它们之间既有协调作用，也有拮抗作用，其关系很复杂，但体内微环境影响不可忽视.有可能是肿瘤产生的一个促发因素.因此，通过补充锌、铜、锰及维生素A，C，E等富含抗氧化作用的食物，提高机体抵抗超氧化物损伤的能力，以预防肿瘤的产生，促进肿瘤的转归可能有重要的作用，值得我们进一步探讨.
(本文的统计学处理，请张开宁教授审核，在此表示衷心地感谢.)
云南省教委科研基金资助项目(9310019)
, 百拇医药
作者简介：展鸿谋(1946～)，男，重庆人，教授，硕士生导师，从事耳鼻喉科临床研究.
参考文献
[1] 张维宁.自由基与头颈肿瘤[J].国外医学耳鼻咽喉科学分册，1990，14：1
[2] JENNIFER KELLY B A.RGN，RCNT，DIPN，DIP，NEDUC making sense of free radicals and their effects on the body[J].Nurse Time,1994,14:18
[3] 顾康生，孙昕.肿瘤患者血清铜/锌比值的临床意义[J].微量元素与健康研究，1997，14(2)：10
(2000-04-20收稿), http://www.100md.com
单位：(昆明医学院第一附属医院，昆明 650032)
关键词：鼻咽癌；免疫功能；EB病毒；PCR检测
昆明医学院学报000313 摘要：为进一步了解EB病毒与鼻咽癌的关系，全面综合调查鼻咽癌病人的免疫功能，应用PCR方法检测鼻咽癌病人组织块EB病毒DNA，并对鼻咽癌病人血清中EB病毒(EBV—VCA/IgA)抗体、超氧化物歧化酶(SOD)活性、脂质过氧化物降解产物(MDA)及数种微量元素含量进行测定.结果：从鼻咽癌病人鼻咽部活检组织中成功地检测出EB病毒DNA片断.进一步证实了EB病毒与鼻咽癌的发生有密切关系.并对鼻咽癌病人血清VCA/IgA，SOD，MDA 及数种微量元素进行对比观测及综合研究，为鼻咽癌的诊断、治疗及预后评估等，提供了可靠的依据.
中图分类号：R 739 文献标识码：A 文章编号：1003-4706(2000)03-0049-05
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The Synthetical Study of Multiple Immune Functions
and Epstein-Barr Virus Detected by Polymerase Chain
Reaction in Nasopharyngeal Carcinoma Patients
ZHAN Hong-mou，YANG Yi-bing，YE Chong-jun，GUO Ji-hong，WANG Wen-hui，WANG Jia-cui
(the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650032)
WU Zhi-ping
, http://www.100md.com
(the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650106)
Abstract：To understand further the relations between Epstein-Bar virus (EBV) and nasopharyngeal carcinoma(NPC) and synthetically investigate immune functions in NPC patients, we detected DNA fragment of EBV using polymerase chain reaction (PCR) method and determined antibody (EBV-VCA/IgA), activity of superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde(MDA) and varied trace elements in serum in NPC patients. The results: DNA fragment of EBV was detected from nasopharyngeal tissue in NPC patients, it is further demonstrated that there are close relations between the occurrence of nasopharyngeal carcinoma and the infection of Epstein-Barr virus. The synthetical and comparative study on EBV-VCA/IgA, SOD, MDA and varied trace elements in serum in NPC patients provided a scientific basis for diagnosis, therapeusis and prognosis.
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Key words：Nasopharyngeal carcinoma； Immune function； Epstein-Barr virus； Polymerase chain reaction
鼻咽癌系鼻咽部发生的癌肿，大多数是鳞状细胞癌，为我国最常见的恶性肿瘤之一.
鼻咽癌的发病率为耳鼻咽喉部恶性肿瘤之冠.在全身恶性肿瘤中，亦占重要地位.据李振权等观察，鼻咽癌占全身恶性肿瘤的30.97%，占头颈部癌的78.08%，占上呼吸道癌的92.99%.男性的发病率较高，男女病人的比例约为3：1，患者年龄在3～86岁均可发生，但多在30～49岁之间，正值壮年奋发有为之际，且鼻咽部解剖位置隐蔽，更造成鼻咽癌诊断治疗的困难.
为了提高鼻咽癌诊断治疗水平，国内外对鼻咽癌有较多的研究报道，但对鼻咽癌病人鼻咽部活检组织中EB病毒的检测报道甚少.我省地处边疆，医疗条件差，而鼻咽癌病人很多，对鼻咽癌病人血清中EB病毒壳抗原(EBV-VCA/IgA)抗体滴度的改变，超氧化物歧化酶(SOD)，脂质过氧化物降解产物(MDA)及微量元素的测定等均无系统性观测，更无综合研究的报道.现将我们的研究报道如下.
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1 材料与方法
1.1 应用PCR技术检测鼻咽癌病人鼻咽组织块中EB病毒DNA
试剂与仪器：(1)德国QIAG公司产DNA提取试剂盒；(2)上海复星高科技公司产EB病毒DNA，PCR检测试剂盒；(3)德国Perkin-Elmer公司9600型PCR仪；(4)北京六一厂生产微型琼脂糖电泳仪.
所有试剂均为分析纯以上，溶液使用双蒸水配制.
方法：共检测5例病人，取每例病人鼻咽部活检组织各2块，1块送常规病理检查；另1块作EB病毒NDA的PCR检测，使用前保存在液氮中.另设由原试剂盒已配备的阳性对照和阴性对照各1例.
组织块经组织裂解液及蛋白酶消化，提取DNA；DNA经PCR 40个循环扩增.
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进行PCR扩增时，热循环的条件为：
共进行40个循环，最后一个循环后，72℃延伸10 min.
作PCR扩增产物鉴定，在紫外检测仪上观察，并在暗室中照相，记录实验结果.
实验重复进行一次.
1.2 鼻咽癌病人血清中EB病毒壳抗原(EBV-VCA/IgA)抗体水平的测定
鼻咽癌病人血清中EB病毒壳抗原(EBV-VCA/IgA)抗体水平的测定采用免疫酶标法进行，酶标试剂盒系卫生部上海生物制品研究所生产.进行测定的有鼻咽癌病人57例，对照组15例.
1.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定及脂质过氧化物降解产物测定
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超氧化物歧化酶(SOD)活性测定采用黄嘌呤氧化酶法，脂质过氧化物降解产物(MDA)水平测定采用硫化巴比妥法，药盒均由南京建成生物工程研究所提供，分别测定鼻咽癌病人30例，对照组47例.
1.4 鼻咽癌病人4种微量无素含量测定
对30例鼻咽癌病人及47例对照组进行Zn2+，Cu2+，Ca2+，Mg2+4种元素含量的测定.测定方法采用AA-670型原子吸收分光光度法.2 结果
2.1 应用PCR方法检测鼻咽癌病人组织块EB病毒DNA
作常规病理检查的5例，结果皆为鳞状细胞癌；标本为5例经病理检查证实为鳞状细胞癌患者的鼻咽组织块.
应用PCR方法检测组织块EB病毒DNA，5例样品，在PCR扩增后，经琼脂糖电泳，均在250 bp处有特异扩增带，经两次重复实验，结果皆一致.可以判定5例样品组织均为EB病毒感染阳性，阳性对照1例为(+++)，阴性对照1例为(-)，结果见表1.
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表1 PCR方法检测鼻咽癌组织块EB病毒DNA 样品编号
PCR结果
病理检查
阳性对照
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-
1
+
低分化鳞癌
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低分化鳞癌
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低分化鳞癌
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低分化鳞癌
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低分化鳞癌
阴性对照
-
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2.2 鼻咽癌病人血清中EB病素(EBV-VCA/IgA)抗体测定
鼻咽癌病人血清EBV-VCA/IgA抗体阳性率为100%.
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鼻咽癌组与对照组血清EBV-VCA/IgA抗体滴度结果见表2.表2 鼻咽癌组与对照组EBV-VCA/IgA抗体滴度比较 组别
n
<1：5
1：5
1：10
1：20
1：40
1：80
1：160
1：320
鼻咽癌组
51
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0
0
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9
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鼻咽癌组平均滴定度为1：44.50，对照组平均滴度为1：1.96，以两组数据行对数转换后以t检验进行统计学分析，两组平均滴定度(几何均数)的差异有显著性(P<0.01).
鼻咽癌临床分期与EBV-VCA/IgA抗体滴度关系见表3.表3 鼻咽癌临床分期与血清EBV-VCA/IgA抗体滴度的关系 分期
n
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1：80
1：160
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Ⅱ期平均滴定度为1：30.31，Ⅲ期平均滴定度为1：60.32，Ⅳ期平均滴定度为1：47.57.
以方差分析法对3期之间的EBV-VCA/IgA滴定度进行统计学处理，结果3期之间的EBV-VCA/IgA滴定度有显著性差异(P<0.01)，且各期之间相互比较q检验均有显著性或高度显著性差异.Ⅱ与Ⅲ期比，P<0.01；Ⅱ与Ⅳ期比，P<0.01；Ⅲ与Ⅳ期比，P<0.05.
鼻咽癌病人血清EBV-VCA/IgA与肿瘤病理类型的关系上，我们检测的51例中低分化鳞癌49例，中分化鳞癌、未分化癌各1例.由于绝大部分病人为低分化鳞癌，其余病理类型太少，未进行统计学处理.
2.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定及脂质过氧化物降解产物测定
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结果见表4.表4 鼻咽癌组与对照组SOD与MDA含量的比较 组别
n
SOD(nU/mL)
MDA(nmol/mL)
鼻咽癌组
30
72.5±10.76
5.23±0.92
对照组
47
84.57±8.74
4.72±0.65
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P 值
<0.01
<0.01
鼻咽癌组与对照组的SOD及MDA含量比较，分别以t检验进行统计学处理，显示鼻咽癌组SOD低于对照组(P<0.01)，鼻咽癌组MDA高于对照组(P<0.01)，鼻咽癌组SOD及MDA与对照组比均有高度显著性差异.
2.4 鼻咽癌病人4种微量元素含量测定
结果见表5.表5 鼻咽癌组与对照组4种微量元素含量比较
(μmol/L) 组别
鼻咽癌组
对照组
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例数
30
47
Zn2+
17.55±6.01
22.85±6.05
Cu2+
18.30±3.26
21.85±4.55
Ca2+
2.24±0.32
2.625±0.375
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Mg2+
0.903±0.208
0.985±0.285
以t检验进行统计学处理，鼻咽癌组Zn2+，Cu2+，Ca2+与对照组比较均有高度显著性差异，低于对照组(P<0.01)，而鼻咽癌组的Mg2+与对照组比未见显著性差异(P>0.05).3 讨论
3.1 EB病毒与鼻咽癌的关系
鼻咽癌是多因素综合作用的结果，如遗传因素、病毒因素、环境致癌因素等，为了深入寻找鼻咽癌病因，国内外作了大量的研究工作.1964年Epstein和Barr首次从非洲儿童淋巴瘤(Burkitt淋巴瘤)的活检组织中建立了一株可以传代的淋巴母细胞株，电镜下可见疱疹型病毒颗粒.由于其具有与疱疹病毒家族其它成员不同的特性，故被命名为Epstein-Barr病毒，即EB病毒.多年来的流行病学调查认为EB病毒与鼻咽癌的发生有密切关系.
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为进一步证实鼻咽癌与EB病毒的关系，本课题共检测5例病人，取每例病人鼻咽部活检组织各2块，1块送常规病理检查；另1块用PCR方法检测EB病毒DNA，并各设1例阳性对照和阴性对照.结果病检结果皆为鼻咽鳞状细胞癌的5例用PCR 测定EB病毒DNA，经两次重复实验，均证实为EB病毒感染阳性.且本课题检测鼻咽癌病人血清EBV-VCA/IgA 5例，证实均存在EB病毒特异性抗体，而且其滴定度明显高于正常人，以上结果皆可提示EB病毒与鼻咽癌的发生有密切关系，至于EB病毒是如何导致鼻咽癌?是直接产生鼻咽癌，还是EB病毒在其它因素的作用下，才诱发鼻咽癌的?这些还有待进一步深入研究.
鼻咽癌病人鼻咽组织EB病毒PCR检测难度大，要求高，技术性强，国内报道极少，我省系首次成功作PCR检测EB病毒，填补了我省的一项空白.
3.2 鼻咽癌病人血清中EBV-VCA/IgA抗体测定的临床意义
抗原与相应的抗体接触后，可形成不溶性的“抗原-抗体复合物”.此复合物在细胞内或组织内是不可见的，为使“抗原-抗体复合物”成为可见，须先将某类色素与上述抗体结合，成为色素标记的抗体，当它再与相应的抗原结合时，即成为可见的“抗原-抗体复合物”.如用酶作为色素与抗体结合的接合剂时，称为“免疫酶标记法”.所用酶的种类很多，常用者为辣根过氧化物酶.
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自1996年Nakane和Avrameas等用辣根过氧化物酶代替荧光素标记抗体成功后，免疫酶标技术在其后有了飞跃发展，证明它较免疫荧光法有更多的优点，现在越来越多地将免疫酶标法用于鼻咽癌的监测、普查.
本课题用免疫酶标法检测51例鼻咽癌病人，证实其血清中均存在EB病毒VCA/IgA特异性抗体，而且滴定度明显高于正常人，对照组各例的滴定度不超过1：10，平均滴定度1：44.50.提示EB病毒与鼻咽癌的发生有密切关系.
鼻咽癌病人EB病毒VCA/IgA的滴定度随着肿瘤临床分期的不同而不同.一般讲，随着临床分期升高，即病变范围扩大，EB病毒VCA/IgA的滴定度就增高.本课题中Ⅱ期病人的平均滴定度为1：30.31，Ⅲ期病人的平均滴定度为1：60.32，但Ⅳ期病人的平均滴定度为1：47.57，较Ⅲ期病人降低，是否与我们检测Ⅳ期病人例数少有关，尚需进一步研究.
3.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定及脂质过氧化物降解产物(MDA)水平测定的意义
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自由基是外层轨道未配对的电子原子团或特殊状态的分子，是机体利用氧的过程中产生的超氧化物[1].正常的机体自由基的产生、利用和消除之间存在着动态的平衡.当吸烟、酗酒、病毒感染及离子辐射等损伤而致超氧化自由基的生成和消除中平衡失调时，超氧化自由基和过氧化氢堆积到一定的浓度，就可能引起细胞内导致有害自由基链反应的运作，损害磷脂、蛋白质、核酸等，使其丧失正常的功能而诱发疾病[2].超氧化物歧化酶(SOD)是消除机体内自由基使其转化为无害的水和氧的重要酶.SOD活力的变化反映了机体抑制自由基损伤的能力.我们对30例鼻咽癌血清中SOD活力和MDA的检测发现，SOD活力都明显低于正常对照组，其差别有显著性.且鼻咽癌脂质过氧化物的含量亦明显高于对照组，表明病人体内有组织细胞的损伤，机体防御自由基损伤的能力降低，是肿瘤得以发生的重要原因.
3.4 微量元素在机体中的意义
机体内SOD防御自由基链运作的机制有赖于特定的抗氧化微量营养素的存在，其中 锰是SOD的主要成份，锌有维持隔室封闭，防止自由基对细胞的攻击，保护细胞膜和正常分裂的作用.铜是多种酶的组成成分，可影响线粒体的能量代谢与细胞的生长，作为抗氧化酶的辅助因子，有作者报道可影响肿瘤病人病情的转归[3].
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我们对30例鼻咽癌病人Zn2+，Cu2+，Ca2+，Mg2+的测定显示，鼻咽癌组Zn2+，Cu2+，Ca2+3种微量元素含量均明显低于对照组，只有Mg2+的含量无变化，表明鼻咽癌病人SOD活力的降低与体内微量元素的缺乏有一定关系.
由于人体内微量元素很多，它们之间既有协调作用，也有拮抗作用，其关系很复杂，但体内微环境影响不可忽视.有可能是肿瘤产生的一个促发因素.因此，通过补充锌、铜、锰及维生素A，C，E等富含抗氧化作用的食物，提高机体抵抗超氧化物损伤的能力，以预防肿瘤的产生，促进肿瘤的转归可能有重要的作用，值得我们进一步探讨.
(本文的统计学处理，请张开宁教授审核，在此表示衷心地感谢.)
云南省教委科研基金资助项目(9310019)
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作者简介：展鸿谋(1946～)，男，重庆人，教授，硕士生导师，从事耳鼻喉科临床研究.
参考文献
[1] 张维宁.自由基与头颈肿瘤[J].国外医学耳鼻咽喉科学分册，1990，14：1
[2] JENNIFER KELLY B A.RGN，RCNT，DIPN，DIP，NEDUC making sense of free radicals and their effects on the body[J].Nurse Time,1994,14:18
[3] 顾康生，孙昕.肿瘤患者血清铜/锌比值的临床意义[J].微量元素与健康研究，1997，14(2)：10
(2000-04-20收稿), http://www.100md.com