反相HPLC法测定氯雷他定及其片剂的含量
作者：高青 郭小洁 赵明
单位：北京市药品检验所 100035
关键词：
首都医药000410 氯雷他定片为北京某研究所研制的四类新药，为长效、无镇静作用的第三代三环类抗组胺药物。用于过敏性鼻炎、急慢性荨麻疹及其他过敏性疾病的治疗。本文建立了反相HPLC法，采用紫外检测器测定氯雷他定及其片剂的含量。
1 仪器与试药
美国惠普HP1100型高效液相色谱仪(包括HP1100型泵，可变波长紫外检测器和LC3DHP工作站)。氯雷他定原料、氯雷他定对照品、氯雷他定片及氯雷他定前体均由北京某研究所提供，甲基睾丸素从中央药检所购得。乙腈为色谱醇，醋酸铵、醋酸及乙醇为分析纯。
2 色谱条件
, http://www.100md.com
色谱柱：参照有关文献报道，确定色谱柱为C18柱(250mm×4.6mm，phenonmenex,LUNA柱，S/No.226035)，流动相为乙腈—0.02%醋酸铵醋酸缓冲液(用醋酸调pH=6.2)(70:30)，流速为1.0ml/min，检测波长为247nm，柱温为室温。
3 实验方法
3.1 系统适用性试验
精密称取甲基睾丸素适量，加乙醇制成每1ml含0.15mg的溶液，摇匀，作为内标储备液；另精密称取氯雷他定对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，精密量取1ml，精密加入内标储备液1ml,混匀，即得。精密量取10μl，注入液相色谱仪，色谱图见图1。在该色谱条件下，内标物甲基睾丸素峰与氯雷他定峰的保留时间及以氯雷他定峰计算的理论板数(n)，分离度(R)，拖尾因子(T)的测试结果见表。
, 百拇医药
保留时间
(min)
理论板数
(n)
分离度
(R)
拖尾因子
(T)
甲基睾丸素
5.105
7123
氯雷他定
8.423
, http://www.100md.com
7554
10.5
1.05
图1 氯雷他定对照品与甲基睾丸素内标物含量测定色谱图
1.甲基睾丸内标物 2.氯雷他定
3.2 空白辅料干扰试验
按氯雷他定处方称取空白辅料并按含量测定项下方法配制测定供试品溶液，结果证明在上述色谱条件下，空白辅料在主成分保留时间处无吸收峰。
3.4 线性关系考察
精密称取氯雷他定对照品16.6mg及内标物甲基睾丸素12.9mg，加乙醇溶解并稀释至50ml，精密量取1，2，3，4，5和6ml，加乙醇稀释至10ml。精密量取10μl，注入液相色谱仪，量取峰面积，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，分别按外标法与内标法计算氯雷他定的线性方程，结果见下表。 氯雷他定进样
, 百拇医药
浓度(mg/ml)
0.0332
0.0664
0.0996
0.1328
0.1660
0.1992
峰面积
325231
641281
952648
1272954
, http://www.100md.com
1570475
1887152
线性方程
A=16540.87
B=9395432.88
r=1.0
氯雷他定进样
浓度(mg/ml)
0.0258
0.0516
0.0774
0.1032
, http://www.100md.com
0.1290
0.1548
峰面积
326131
641281
952648
1272954
1570475
1887152
线性方程
A=16540.87
B=9395432.88
, http://www.100md.com
r=1.0
3.5 回收率试验
按氯雷他定片处方比例称取样品及辅料，按上述实验方法操作，结果见下表： 试验次数
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
, 百拇医药
(%)
1
10.07
10.14
100.7
2
9.98
10.18
102.0
3
9.73
9.721
99.91
, http://www.100md.com
100.5
0.96
4
9.70
9.646
99.45
5
8.97
9.005
100.4
3.6 精密度试验
精密称取氯雷他定原料药适量，加乙醇制成每1ml含0.08—0.12mg的溶液，照含量测定项下的方法测定，按内标法计算含量，结果见下表。 序号
, 百拇医药
1
2
3
4
5
含量(%)
100.9
99.75
99.82
100.8
101.5
平均值
100.6%
, http://www.100md.com
RSD%=0.75%
3.7 重现性试验
精密称取含量测定用3批氯雷他定片剂细粉，照含量测定项下配制并测定(不同仪器，不同试验者)，结果见下表。 批 号
1
2
3
含量
(惠普1100)
100.9%
100.8%
99.93%
, 百拇医药 含量
(岛津LC—6A)
99.75%
99.43%
99.74%
3.8 供试品溶液稳定性考察
取含量测定项下溶液放置24小时后测定，结果见下表。 含量
24小时后含量
106.0%
105.9%
3.9 样品测定
精密称取氯雷他定细粉适量，加乙醇溶解并稀释制成每1ml含0.2mg的溶液，摇匀；另取甲基睾丸素适量，精密称定，加乙醇溶解并稀释制成每1ml含0.15mg的溶液；精密量取上述两种溶液各1ml，混匀，精密量取10ul，注入液相色谱仪，按内标法计算含量，结果见重线试验项下。
, 百拇医药
4 讨论
4.1 流动相的选择
根据参考文献，我们分别试验了3种流动相，乙腈-甲醇—0.02%二乙胺(50：20：30)，甲醇—磷酸氢二钾(0.01mol/l)(8：3)及乙腈—0.02%醋酸铵溶液(用醋酸调节pH=6.2) (85:15)，以主成分保留时间，理论塔板数及分离度为指标进行考察，确定第3种流动相保留时间比较合适，为6.5分钟，理论塔板数为7000以上，符合药典要求，但以上3种流动相前体均不出峰，经不断调整流动相3的组成，最后确定为乙腈—0.02%醋酸铵溶液(用醋酸调pH=6.2)(70:30),流速为1.0ml/min，主峰保留时间为8.4分钟，前体出峰，并与主峰有较好的分离度。色谱图见系统适用性项下。
4.2 测定波长的选择
精密称取氯雷他定对照品适量，加流动相制成每1ml中含0.01mg的溶液，紫外扫描，结果在247nm波长处有最大吸收，故选择247nm为含量测定检测波长。
4.3 内标物选择
参考有关资料，分别选择磺胺和甲基睾丸素作为内标进行考察，结果后者与有关杂质及主成分的分离度好，并且稳定性优于磺胺，所以选择甲基睾丸素为内标物。
收稿日期：2000-03-08, 百拇医药
单位：北京市药品检验所 100035
关键词：
首都医药000410 氯雷他定片为北京某研究所研制的四类新药，为长效、无镇静作用的第三代三环类抗组胺药物。用于过敏性鼻炎、急慢性荨麻疹及其他过敏性疾病的治疗。本文建立了反相HPLC法，采用紫外检测器测定氯雷他定及其片剂的含量。
1 仪器与试药
美国惠普HP1100型高效液相色谱仪(包括HP1100型泵，可变波长紫外检测器和LC3DHP工作站)。氯雷他定原料、氯雷他定对照品、氯雷他定片及氯雷他定前体均由北京某研究所提供，甲基睾丸素从中央药检所购得。乙腈为色谱醇，醋酸铵、醋酸及乙醇为分析纯。
2 色谱条件
, http://www.100md.com
色谱柱：参照有关文献报道，确定色谱柱为C18柱(250mm×4.6mm，phenonmenex,LUNA柱，S/No.226035)，流动相为乙腈—0.02%醋酸铵醋酸缓冲液(用醋酸调pH=6.2)(70:30)，流速为1.0ml/min，检测波长为247nm，柱温为室温。
3 实验方法
3.1 系统适用性试验
精密称取甲基睾丸素适量，加乙醇制成每1ml含0.15mg的溶液，摇匀，作为内标储备液；另精密称取氯雷他定对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，精密量取1ml，精密加入内标储备液1ml,混匀，即得。精密量取10μl，注入液相色谱仪，色谱图见图1。在该色谱条件下，内标物甲基睾丸素峰与氯雷他定峰的保留时间及以氯雷他定峰计算的理论板数(n)，分离度(R)，拖尾因子(T)的测试结果见表。
, 百拇医药
保留时间
(min)
理论板数
(n)
分离度
(R)
拖尾因子
(T)
甲基睾丸素
5.105
7123
氯雷他定
8.423
, http://www.100md.com
7554
10.5
1.05
图1 氯雷他定对照品与甲基睾丸素内标物含量测定色谱图
1.甲基睾丸内标物 2.氯雷他定
3.2 空白辅料干扰试验
按氯雷他定处方称取空白辅料并按含量测定项下方法配制测定供试品溶液，结果证明在上述色谱条件下，空白辅料在主成分保留时间处无吸收峰。
3.4 线性关系考察
精密称取氯雷他定对照品16.6mg及内标物甲基睾丸素12.9mg，加乙醇溶解并稀释至50ml，精密量取1，2，3，4，5和6ml，加乙醇稀释至10ml。精密量取10μl，注入液相色谱仪，量取峰面积，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，分别按外标法与内标法计算氯雷他定的线性方程，结果见下表。 氯雷他定进样
, 百拇医药
浓度(mg/ml)
0.0332
0.0664
0.0996
0.1328
0.1660
0.1992
峰面积
325231
641281
952648
1272954
, http://www.100md.com
1570475
1887152
线性方程
A=16540.87
B=9395432.88
r=1.0
氯雷他定进样
浓度(mg/ml)
0.0258
0.0516
0.0774
0.1032
, http://www.100md.com
0.1290
0.1548
峰面积
326131
641281
952648
1272954
1570475
1887152
线性方程
A=16540.87
B=9395432.88
, http://www.100md.com
r=1.0
3.5 回收率试验
按氯雷他定片处方比例称取样品及辅料，按上述实验方法操作，结果见下表： 试验次数
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
, 百拇医药
(%)
1
10.07
10.14
100.7
2
9.98
10.18
102.0
3
9.73
9.721
99.91
, http://www.100md.com
100.5
0.96
4
9.70
9.646
99.45
5
8.97
9.005
100.4
3.6 精密度试验
精密称取氯雷他定原料药适量，加乙醇制成每1ml含0.08—0.12mg的溶液，照含量测定项下的方法测定，按内标法计算含量，结果见下表。 序号
, 百拇医药
1
2
3
4
5
含量(%)
100.9
99.75
99.82
100.8
101.5
平均值
100.6%
, http://www.100md.com
RSD%=0.75%
3.7 重现性试验
精密称取含量测定用3批氯雷他定片剂细粉，照含量测定项下配制并测定(不同仪器，不同试验者)，结果见下表。 批 号
1
2
3
含量
(惠普1100)
100.9%
100.8%
99.93%
, 百拇医药 含量
(岛津LC—6A)
99.75%
99.43%
99.74%
3.8 供试品溶液稳定性考察
取含量测定项下溶液放置24小时后测定，结果见下表。 含量
24小时后含量
106.0%
105.9%
3.9 样品测定
精密称取氯雷他定细粉适量，加乙醇溶解并稀释制成每1ml含0.2mg的溶液，摇匀；另取甲基睾丸素适量，精密称定，加乙醇溶解并稀释制成每1ml含0.15mg的溶液；精密量取上述两种溶液各1ml，混匀，精密量取10ul，注入液相色谱仪，按内标法计算含量，结果见重线试验项下。
, 百拇医药
4 讨论
4.1 流动相的选择
根据参考文献，我们分别试验了3种流动相，乙腈-甲醇—0.02%二乙胺(50：20：30)，甲醇—磷酸氢二钾(0.01mol/l)(8：3)及乙腈—0.02%醋酸铵溶液(用醋酸调节pH=6.2) (85:15)，以主成分保留时间，理论塔板数及分离度为指标进行考察，确定第3种流动相保留时间比较合适，为6.5分钟，理论塔板数为7000以上，符合药典要求，但以上3种流动相前体均不出峰，经不断调整流动相3的组成，最后确定为乙腈—0.02%醋酸铵溶液(用醋酸调pH=6.2)(70:30),流速为1.0ml/min，主峰保留时间为8.4分钟，前体出峰，并与主峰有较好的分离度。色谱图见系统适用性项下。
4.2 测定波长的选择
精密称取氯雷他定对照品适量，加流动相制成每1ml中含0.01mg的溶液，紫外扫描，结果在247nm波长处有最大吸收，故选择247nm为含量测定检测波长。
4.3 内标物选择
参考有关资料，分别选择磺胺和甲基睾丸素作为内标进行考察，结果后者与有关杂质及主成分的分离度好，并且稳定性优于磺胺，所以选择甲基睾丸素为内标物。
收稿日期：2000-03-08, 百拇医药