薄层扫描法测定杜仲茶中氯原酸的含量
作者：王宝华 高增平 江佩芬
单位：北京中医药大学中药学院 北京100029
关键词：杜仲茶；薄层扫描；氯原酸；含量测定
北京中医药大学学报000419 中图分类号：284.1
杜仲茶系由杜仲叶和乌龙茶制成的袋泡茶,杜仲叶为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的叶子[1]。具有镇痛、降血压、中枢神经镇静、利尿、机体非特异性免疫以及提高肾上腺皮质等作用[2，3]。氯原酸为杜仲叶的有效成分，本实验用薄层扫描法测定了杜仲茶中氯原酸的含量[1，4]。
1 仪器与试药
CS-9000双波长薄层扫描仪(日本岛津)；1 μL定量毛细管(美国Drummond公司)；聚酰胺-6薄膜(上海化学试剂四厂)；氯原酸对照品购自中国药品生物品检定所；所用试剂均为分析纯；杜仲茶由德利保健品公司提供。
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2 方法和结果
2.1 薄层条件
聚酰胺-6薄膜(10 cm×10 cm)，用纯棉细线固定在10 cm×10 cm的洁净玻璃板上，以正丁醇—醋酸—水(6∶1∶3)上层液为展开剂，上行展开，展距7 cm，取出，挥干，在紫外灯366 nm下观察氯原酸显亮兰色荧光斑点，Rf=0.6。
2.2 扫描条件
反射法双波长锯齿扫描，经光谱扫描后确定氯原酸的λR=215 nm， λS=250 nm，SX=3，狭缝2.0 mm×2.0 mm，灵敏度×1。
2.3 供试液的制备
取杜仲茶4 g左右，置烘箱70 ℃干燥至恒重，精密称定，置150 mL三角瓶中，加入100 mL氯仿，超声提取30 min，过滤，残渣挥干氯仿，精确加入乙醇100 mL，超声提取30 min，过滤，弃掉初滤液10 mL左右，精确吸取续滤液50 mL,置100 mL三角瓶中，减压回收乙醇至干，趁热用乙醇定量转移至5 mL容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。
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2.4 线性关系的考察
以0.5 g/L的氯原酸乙醇液作为对照品溶液，用定量毛细管吸取1、2、3、4、5 μL对照品液分别点于同一聚酰胺-6薄膜上，依法展开，取出，挥干溶剂，扫描测定，以浓度为横坐标，斑点面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为A=30068.24C+25984.52，相关系数r=0.9970，表明氯原酸在0.5～2.5 μg之间呈良好线性关系。
2.5 精密度试验
对同一斑点连续扫描5次，RSD=1.22%，表明仪器有良好的精密度。吸取对照品溶液2 μL点于同一聚酰胺-6薄膜上，进行扫描测定，RSD=2.36%(n=5)，表明薄膜精密度良好。
2.6 稳定性实验
吸取对照品溶液2 μL点于同一聚酰胺-6薄膜上，依法展开，晾干后，对同一斑点每隔30 min扫描测定1次，连续测定2.5 h，结果积分面积值在2.5 h内稳定，RSD=1.3%(n=6)，表明展开后斑点在2.5 h内稳定。
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2.7 提取时间考察
向氯仿提取后的残渣中精确加入100 mL乙醇，分别超声提取30、40、50 min,依法展开扫描测定。结果样品中氯原酸的平均含量为0.2098%,RSD=3.16%，表明30 min已提取完全。
2.8 重现性试验
对同一批样品分别测定3次,结果RSD=4.1%,表明该方法重现性符合要求。
2.9 加样回收率试验
取已知含量的杜仲茶样品2 g左右，置烘箱中70 ℃干燥至恒重，精密称定，加入已精密称定的氯原酸对照品4 mg左右，按供试液的制备方法操作，制成供试品溶液，依上法进行展开测定，计算平均回收率为101.5%，RSD=3.02%。结果见表1。
2.10 样品的含量测定
, 百拇医药
依法对3批样品进行扫描测定，计算氯原酸的含量，结果见表2。
表1 氯原酸回收率测定结果 (mg) 样品量
添加量
测出量
回收率/%
3.78
4.25
8.11
101.9
4.37
4.14
8.44
, 百拇医药
98.3
3.94
3.94
8.26
104.3
表2 样品含量测定结果 (n=3) 批号
含量/%
RSD/%
9501
0.2150
2.51
9502
, 百拇医药 0.2024
4.28
9503
0.2235
3.03
3 结论
本实验用薄层扫描法测定了杜仲茶中氯原酸的含量，方法可靠，操作简便，重现性好，为杜仲茶的质控研究提供了依据。实验中聚酰胺-6薄膜因较软，展开后前沿不平，经反复试验，用细白线将薄膜上下边沿固定在洁净的玻璃板上，展开效果最佳。
王宝华，女,34岁,助理研究员
参 考 文 献
1，李家实，阎玉凝.杜仲皮与叶化学成分初步研究.中药通讯，1986，11(8)：41～42
2，王景祥，张黎明，楚万照.杜仲叶和杜仲皮的成分比较.中草药，1987，18(3)：11
3，藏友维. 杜仲化学成分研究进展. 中草药， 1989，20(4)：42～44
4，姜懋芬. 复方杜仲片中杜仲叶的鉴别. 中成药， 1993， 15(2)：39
(收稿日期：1999-11-05), http://www.100md.com
单位：北京中医药大学中药学院 北京100029
关键词：杜仲茶；薄层扫描；氯原酸；含量测定
北京中医药大学学报000419 中图分类号：284.1
杜仲茶系由杜仲叶和乌龙茶制成的袋泡茶,杜仲叶为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的叶子[1]。具有镇痛、降血压、中枢神经镇静、利尿、机体非特异性免疫以及提高肾上腺皮质等作用[2，3]。氯原酸为杜仲叶的有效成分，本实验用薄层扫描法测定了杜仲茶中氯原酸的含量[1，4]。
1 仪器与试药
CS-9000双波长薄层扫描仪(日本岛津)；1 μL定量毛细管(美国Drummond公司)；聚酰胺-6薄膜(上海化学试剂四厂)；氯原酸对照品购自中国药品生物品检定所；所用试剂均为分析纯；杜仲茶由德利保健品公司提供。
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2 方法和结果
2.1 薄层条件
聚酰胺-6薄膜(10 cm×10 cm)，用纯棉细线固定在10 cm×10 cm的洁净玻璃板上，以正丁醇—醋酸—水(6∶1∶3)上层液为展开剂，上行展开，展距7 cm，取出，挥干，在紫外灯366 nm下观察氯原酸显亮兰色荧光斑点，Rf=0.6。
2.2 扫描条件
反射法双波长锯齿扫描，经光谱扫描后确定氯原酸的λR=215 nm， λS=250 nm，SX=3，狭缝2.0 mm×2.0 mm，灵敏度×1。
2.3 供试液的制备
取杜仲茶4 g左右，置烘箱70 ℃干燥至恒重，精密称定，置150 mL三角瓶中，加入100 mL氯仿，超声提取30 min，过滤，残渣挥干氯仿，精确加入乙醇100 mL，超声提取30 min，过滤，弃掉初滤液10 mL左右，精确吸取续滤液50 mL,置100 mL三角瓶中，减压回收乙醇至干，趁热用乙醇定量转移至5 mL容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。
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2.4 线性关系的考察
以0.5 g/L的氯原酸乙醇液作为对照品溶液，用定量毛细管吸取1、2、3、4、5 μL对照品液分别点于同一聚酰胺-6薄膜上，依法展开，取出，挥干溶剂，扫描测定，以浓度为横坐标，斑点面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为A=30068.24C+25984.52，相关系数r=0.9970，表明氯原酸在0.5～2.5 μg之间呈良好线性关系。
2.5 精密度试验
对同一斑点连续扫描5次，RSD=1.22%，表明仪器有良好的精密度。吸取对照品溶液2 μL点于同一聚酰胺-6薄膜上，进行扫描测定，RSD=2.36%(n=5)，表明薄膜精密度良好。
2.6 稳定性实验
吸取对照品溶液2 μL点于同一聚酰胺-6薄膜上，依法展开，晾干后，对同一斑点每隔30 min扫描测定1次，连续测定2.5 h，结果积分面积值在2.5 h内稳定，RSD=1.3%(n=6)，表明展开后斑点在2.5 h内稳定。
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2.7 提取时间考察
向氯仿提取后的残渣中精确加入100 mL乙醇，分别超声提取30、40、50 min,依法展开扫描测定。结果样品中氯原酸的平均含量为0.2098%,RSD=3.16%，表明30 min已提取完全。
2.8 重现性试验
对同一批样品分别测定3次,结果RSD=4.1%,表明该方法重现性符合要求。
2.9 加样回收率试验
取已知含量的杜仲茶样品2 g左右，置烘箱中70 ℃干燥至恒重，精密称定，加入已精密称定的氯原酸对照品4 mg左右，按供试液的制备方法操作，制成供试品溶液，依上法进行展开测定，计算平均回收率为101.5%，RSD=3.02%。结果见表1。
2.10 样品的含量测定
, 百拇医药
依法对3批样品进行扫描测定，计算氯原酸的含量，结果见表2。
表1 氯原酸回收率测定结果 (mg) 样品量
添加量
测出量
回收率/%
3.78
4.25
8.11
101.9
4.37
4.14
8.44
, 百拇医药
98.3
3.94
3.94
8.26
104.3
表2 样品含量测定结果 (n=3) 批号
含量/%
RSD/%
9501
0.2150
2.51
9502
, 百拇医药 0.2024
4.28
9503
0.2235
3.03
3 结论
本实验用薄层扫描法测定了杜仲茶中氯原酸的含量，方法可靠，操作简便，重现性好，为杜仲茶的质控研究提供了依据。实验中聚酰胺-6薄膜因较软，展开后前沿不平，经反复试验，用细白线将薄膜上下边沿固定在洁净的玻璃板上，展开效果最佳。
王宝华，女,34岁,助理研究员
参 考 文 献
1，李家实，阎玉凝.杜仲皮与叶化学成分初步研究.中药通讯，1986，11(8)：41～42
2，王景祥，张黎明，楚万照.杜仲叶和杜仲皮的成分比较.中草药，1987，18(3)：11
3，藏友维. 杜仲化学成分研究进展. 中草药， 1989，20(4)：42～44
4，姜懋芬. 复方杜仲片中杜仲叶的鉴别. 中成药， 1993， 15(2)：39
(收稿日期：1999-11-05), http://www.100md.com
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