用高效液相色谱法测定妇淋康中秦皮乙素的含量
作者：邱泽雨 辛向群
单位：辽宁省药品检验所，沈阳 11002
关键词：秦皮乙素；妇淋康；高效液相色谱法
沈阳药科大学学报000513 摘 要 报道了用高效液相色谱法测定妇淋康中秦皮乙素的含量.线性范围0.021 56～0.215 6 μg，相关系数为=0.999 9，平均回收率97.7%，RSD为1.6%，方法准确、可靠.
分类号 R914
Quantitative Determination of the Content of Esculetin in Fulinkang by HPLC
Qiu Zeyu, Xin Xiangqun
, 百拇医药
(Institute for Drug Control of Liaoning Province, Shenyang 110023)
Abstract A HPLC method has been developed for the assay of esculetin in the Fulinkang under following conditions：ODS column, mobile phase acetonitrile -0.17% phosphoric acid(8∶92 in volume rate, pH=3.0±0.1 adjusted by triethylamine). A good linear relationship between the peak area and the esculetin content was found in the range of 0.021 56～0.215 6 μg(r=0.999 9). The average recovery was 97.7% with RSD of 1.6%. This method was adequately sensitive and suitable for the quality control of Fulinkang.
, 百拇医药
Key words esculetin;Fulinkang;HPLC
妇淋康是由秦皮、鱼腥草等6味中药组成的新药，用于治疗女性淋病、子宫颈炎.由于本品所含的君药秦皮中的有效成分秦皮乙素结构比较特殊(见图1)，加上其他药味的干扰，给秦皮乙素的含量测定带来了很大困难.作者采用高效液相法，对妇淋康中秦皮乙素进行了含量测定.
Fig.1 The stru-
cture of esculetin
1 仪器与试药
高效液相色谱仪LC—4A，SPD—2AS紫外检测器，C—R3A数据处理机(日本岛津)；秦皮乙素对照品(中国药品生物制品检定所提供)；妇淋康(沈阳神龙药业公司提供)；水为重蒸馏水；乙腈为色谱纯；所用其他试剂均为分析纯.
, http://www.100md.com
2 色谱条件
色谱柱：Kromasil-C18，4.6 mm×150 mm；流动相：乙腈-0.17%磷酸(体积比为8∶92，用三乙胺调pH值为3.0±0.1，三乙胺用量大约40滴)；检测波长：268 nm；流速：1 mL/min；柱温：33℃；进样量：10 μL.
3 方法与结果
3.1 对照品溶液的制备
精密称取秦皮乙素10 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解(必要时可微温加热)，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀.精密吸取上述溶液1 mL置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀.精密吸取上述溶液2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得(每mL溶液中含秦皮乙素4 μg).
3.2 供试品溶液的制备
, 百拇医药
精密吸取妇淋康药液1 mL，加水10 mL，摇匀，加醋酸乙脂提取4次，每次20 mL.合并醋酸乙脂提取液，加水20 mL洗1次，弃去洗液，蒸干醋酸乙脂提取液，残渣加甲醇使溶解，定量转移至10 mL量瓶中，精密吸取上述溶液1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得.
3.3 空白溶液的制备
按处方比例称取除去秦皮的其他药材适量，依照妇淋康的制备工艺及“3.2”项下方法制备空白溶液.
3.4 干扰试验
照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各10 μL，测定.供试品色谱图中，在与对照品色谱峰相应的位置上，有一相同保留时间的色谱峰，而空白溶液在此保留时间无干扰.见图2.
Fig.2 The chromatogram by HPLC
, 百拇医药
A—Control of esculetin；B—Solution for test；
C—Blank solution；1—Esculetin
3.5 线性关系考察
取秦皮乙素对照品，精密称定10.78 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解(必要时加热微温使溶解)，并稀释至刻度，摇匀.精密量取上述溶液2 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度(21.56 μg/mL)，摇匀.分别精密吸取上述溶液1、2、3、4、5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀.分别精密吸取上述稀释后的5种对照品溶液与21.56 μg/mL的对照品溶液各10 μL，测定峰面积，得回归方程为A=5.48×106C-1.436×10,r=0.999 9.实验结果表明，秦皮乙素在0.021 56～0.215 6 μg的范围内，线性关系良好.
, http://www.100md.com
3.6 稳定性试验
每隔1 h取同一供试品溶液10 μL，依上述色谱条件进行测定.实验结果表明，供试品溶液在4 h内稳定，RSD为1.7%.
3.7 精密度试验
精密量取同一供试品溶液10 μL 5份，重复进样5次，测定峰面积，结果X=181 204，RSD=1.3%.
3.8 回收率试验
精密吸取已知含量的样品1 mL，精密加入用甲醇制成的0.412 mg/mL的对照品溶液1 mL，混匀，照“供试品溶液的制备”方法制备被测溶液，再精密吸取5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得.照上述条件测定，结果见表1.
Tab.1 The results of recoveries(n=5) No.
, 百拇医药
Add/
mg
Found/
mg
Recovery/
%
Mean/
%
RSD/
%
1
0.412 0
0.408 9
, 百拇医药
99.2
2
0.412 0
0.401 2
97.4
3
0.412 0
0.408 3
99.1
97.7
1.6
4
0.412 0
, http://www.100md.com
0.402 4
97.7
5
0.412 0
0.392 7
95.3
3.9 样品的测定
取不同批号的样品，依法制备供试品溶液，分别量取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪测定.结果见表2.Tab.2 Determination of the sample contents Sample No.
1
2
, 百拇医药
3
4
5
6
Content/mg*mL-1
0.358
0.361
0.349
0.354
0.354
0.359
RSD/%
1.5
, http://www.100md.com
1.0
1.7
1.6
1.1
1.5
4 讨论
秦皮为妇淋康的君药，目前报道的秦皮的含量测定方法多为薄层-紫外分光光度法〔1，2〕，通过薄层层析后，刮取薄层板上相应的斑点，用溶剂洗脱后测定，方法繁琐，有误差，重现性差.有关秦皮的含量测定，尚无其他报道.由于妇淋康为复方制剂，成分复杂，干扰因素多，使本药的含量测定较为困难.根据秦皮乙素的极性，用醋酸乙脂进行提取，水洗除杂质，使被测成分提取完全，同时杂质尽可能被除去.作者曾采用薄层-紫外分光光度法及薄层扫描法，因有杂质干扰，无法测定.秦皮所含的秦皮乙素为香豆素类七叶内脂，结构为邻羟基桂皮酸的内酯，同时又含6，7-酚羟基〔3〕.由于6，7-酚羟基易解离，使其亲脂性降低，在色谱柱中保留时间过短.通过增加柱长来延长保留时间，结果不理想.增大流动相中极性大的组分的比例，同时调节流动相的pH值至3.0，抑制其解离，使秦皮乙素在固定相中的溶解度增加，从而增大了容量因子，使其保留时间延长.通过摸索，采用乙腈-0.17%磷酸(8∶92,用三乙胺调pH3.0±0.1)作为流动相，用高效液相法进行测定，获得满意结果.
参考文献
1，中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典：一部.北京:人民卫生出版社,1995.241
2，王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国医药科技出版社,1994.434
3，王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国医药科技出版社,1994.529
收稿日期:2000-03-09
, 百拇医药
单位：辽宁省药品检验所，沈阳 11002
关键词：秦皮乙素；妇淋康；高效液相色谱法
沈阳药科大学学报000513 摘 要 报道了用高效液相色谱法测定妇淋康中秦皮乙素的含量.线性范围0.021 56～0.215 6 μg，相关系数为=0.999 9，平均回收率97.7%，RSD为1.6%，方法准确、可靠.
分类号 R914
Quantitative Determination of the Content of Esculetin in Fulinkang by HPLC
Qiu Zeyu, Xin Xiangqun
, 百拇医药
(Institute for Drug Control of Liaoning Province, Shenyang 110023)
Abstract A HPLC method has been developed for the assay of esculetin in the Fulinkang under following conditions：ODS column, mobile phase acetonitrile -0.17% phosphoric acid(8∶92 in volume rate, pH=3.0±0.1 adjusted by triethylamine). A good linear relationship between the peak area and the esculetin content was found in the range of 0.021 56～0.215 6 μg(r=0.999 9). The average recovery was 97.7% with RSD of 1.6%. This method was adequately sensitive and suitable for the quality control of Fulinkang.
, 百拇医药
Key words esculetin;Fulinkang;HPLC
妇淋康是由秦皮、鱼腥草等6味中药组成的新药，用于治疗女性淋病、子宫颈炎.由于本品所含的君药秦皮中的有效成分秦皮乙素结构比较特殊(见图1)，加上其他药味的干扰，给秦皮乙素的含量测定带来了很大困难.作者采用高效液相法，对妇淋康中秦皮乙素进行了含量测定.
Fig.1 The stru-
cture of esculetin
1 仪器与试药
高效液相色谱仪LC—4A，SPD—2AS紫外检测器，C—R3A数据处理机(日本岛津)；秦皮乙素对照品(中国药品生物制品检定所提供)；妇淋康(沈阳神龙药业公司提供)；水为重蒸馏水；乙腈为色谱纯；所用其他试剂均为分析纯.
, http://www.100md.com
2 色谱条件
色谱柱：Kromasil-C18，4.6 mm×150 mm；流动相：乙腈-0.17%磷酸(体积比为8∶92，用三乙胺调pH值为3.0±0.1，三乙胺用量大约40滴)；检测波长：268 nm；流速：1 mL/min；柱温：33℃；进样量：10 μL.
3 方法与结果
3.1 对照品溶液的制备
精密称取秦皮乙素10 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解(必要时可微温加热)，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀.精密吸取上述溶液1 mL置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀.精密吸取上述溶液2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得(每mL溶液中含秦皮乙素4 μg).
3.2 供试品溶液的制备
, 百拇医药
精密吸取妇淋康药液1 mL，加水10 mL，摇匀，加醋酸乙脂提取4次，每次20 mL.合并醋酸乙脂提取液，加水20 mL洗1次，弃去洗液，蒸干醋酸乙脂提取液，残渣加甲醇使溶解，定量转移至10 mL量瓶中，精密吸取上述溶液1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得.
3.3 空白溶液的制备
按处方比例称取除去秦皮的其他药材适量，依照妇淋康的制备工艺及“3.2”项下方法制备空白溶液.
3.4 干扰试验
照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各10 μL，测定.供试品色谱图中，在与对照品色谱峰相应的位置上，有一相同保留时间的色谱峰，而空白溶液在此保留时间无干扰.见图2.
Fig.2 The chromatogram by HPLC
, 百拇医药
A—Control of esculetin；B—Solution for test；
C—Blank solution；1—Esculetin
3.5 线性关系考察
取秦皮乙素对照品，精密称定10.78 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解(必要时加热微温使溶解)，并稀释至刻度，摇匀.精密量取上述溶液2 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度(21.56 μg/mL)，摇匀.分别精密吸取上述溶液1、2、3、4、5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀.分别精密吸取上述稀释后的5种对照品溶液与21.56 μg/mL的对照品溶液各10 μL，测定峰面积，得回归方程为A=5.48×106C-1.436×10,r=0.999 9.实验结果表明，秦皮乙素在0.021 56～0.215 6 μg的范围内，线性关系良好.
, http://www.100md.com
3.6 稳定性试验
每隔1 h取同一供试品溶液10 μL，依上述色谱条件进行测定.实验结果表明，供试品溶液在4 h内稳定，RSD为1.7%.
3.7 精密度试验
精密量取同一供试品溶液10 μL 5份，重复进样5次，测定峰面积，结果X=181 204，RSD=1.3%.
3.8 回收率试验
精密吸取已知含量的样品1 mL，精密加入用甲醇制成的0.412 mg/mL的对照品溶液1 mL，混匀，照“供试品溶液的制备”方法制备被测溶液，再精密吸取5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得.照上述条件测定，结果见表1.
Tab.1 The results of recoveries(n=5) No.
, 百拇医药
Add/
mg
Found/
mg
Recovery/
%
Mean/
%
RSD/
%
1
0.412 0
0.408 9
, 百拇医药
99.2
2
0.412 0
0.401 2
97.4
3
0.412 0
0.408 3
99.1
97.7
1.6
4
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, http://www.100md.com
0.402 4
97.7
5
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0.392 7
95.3
3.9 样品的测定
取不同批号的样品，依法制备供试品溶液，分别量取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪测定.结果见表2.Tab.2 Determination of the sample contents Sample No.
1
2
, 百拇医药
3
4
5
6
Content/mg*mL-1
0.358
0.361
0.349
0.354
0.354
0.359
RSD/%
1.5
, http://www.100md.com
1.0
1.7
1.6
1.1
1.5
4 讨论
秦皮为妇淋康的君药，目前报道的秦皮的含量测定方法多为薄层-紫外分光光度法〔1，2〕，通过薄层层析后，刮取薄层板上相应的斑点，用溶剂洗脱后测定，方法繁琐，有误差，重现性差.有关秦皮的含量测定，尚无其他报道.由于妇淋康为复方制剂，成分复杂，干扰因素多，使本药的含量测定较为困难.根据秦皮乙素的极性，用醋酸乙脂进行提取，水洗除杂质，使被测成分提取完全，同时杂质尽可能被除去.作者曾采用薄层-紫外分光光度法及薄层扫描法，因有杂质干扰，无法测定.秦皮所含的秦皮乙素为香豆素类七叶内脂，结构为邻羟基桂皮酸的内酯，同时又含6，7-酚羟基〔3〕.由于6，7-酚羟基易解离，使其亲脂性降低，在色谱柱中保留时间过短.通过增加柱长来延长保留时间，结果不理想.增大流动相中极性大的组分的比例，同时调节流动相的pH值至3.0，抑制其解离，使秦皮乙素在固定相中的溶解度增加，从而增大了容量因子，使其保留时间延长.通过摸索，采用乙腈-0.17%磷酸(8∶92,用三乙胺调pH3.0±0.1)作为流动相，用高效液相法进行测定，获得满意结果.
参考文献
1，中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典：一部.北京:人民卫生出版社,1995.241
2，王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国医药科技出版社,1994.434
3，王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国医药科技出版社,1994.529
收稿日期:2000-03-09
, 百拇医药