HBsAg破坏试验载体法制片中温度及时间对HBsAg回收率的影响
作者：尤凤兴 肖勇 吉杏生 丁茂金
单位：无锡市卫生防疫站，无锡，214002
关键词：HBsAg；不锈钢载片；回收率；OD值；温度
苏州医学院学报000612 摘要 目的 比较两种温度制片及不同洗涤时间对载体上HBsAg含量的影响。方法 用37℃、4℃两种温度制片载体经30min振荡洗涤或先经4、8、12h浸泡后再振荡洗涤，用ELISA法测定各自的OD值。结果 37℃制片HBsAg的回收率为88.69%，4℃制片为97.46%，两者之间有显著性差异(P<0.05)。两种载片经30min振荡洗涤和经4℃浸泡4h后再振荡洗涤，37℃HBsAg回收率为87.93%和93.93%，4℃为96.53%和98.47%。二者对应比较，有非常显著差异(P皆<0.01)。结论 在载体法HBsAg破坏试验中，用4℃制片及载体经4h浸泡后再振荡洗涤，回收率效果最好。
, 百拇医药
中图法分类号 R446
Different Effect of Temperature Plate Affect the HBsAg Content on the
Carrier in the HBsAg Destructive Experiment
You Fengxing, Xiao Yong, Ji Xingsheng, et al
(Wuxi Sanitary and Anti-Epidemic Station,Wuxi,214002)
Abstract Objective To compare the effect of plate with different temperature and different washing time on the HBsAg content on the carrier.Method Washing oscillatory the plate of 37℃,4℃ for 30min,or after immersed in liquid for 4,8,12h,the plates were washed vibrantly.the OD value of different plates was measured with ELISA.Result The recover rate of HBsAg on 37℃ plate was 88.69%,and on 4℃ plate was 97.46%,there was obvious difference between them (P<0.05).After the treatment of washing vibrantly,the recover rate on 37℃ plate was 87.93%,and 4℃ plate was 96.53%.Compared with that immersed in liquid at 4℃ for 4 hours followed by washing vibrantly,the recover rate on the 37℃ plate was 93.93% and 4℃ plate was 98.47%,the difference was obvious (P<0.01).Conclusion In HBsAg destructive experiment with carrier,the HBsAg content on 4℃ plate and that on the carrier which immersed in liquid for 4h followed by washing vibrantly has the best recovery.
, 百拇医药
Key words HBsAg;stainless steel plate;recover rate;OD value;temprature
我们在HBsAg破坏试验载体法的实验中，以50mg/L HBsAg稀释至1mg/L的实际浓度[1]作为洗涤对照样本，观察HBsAg不锈钢载片(以下简称载片)上的HBsAg含量，回收率只有88.69%。为此，我们进行了37℃、4℃两种不同温度制片和载片经不同时间浸泡后再振荡洗涤对HBsAg回收率影响的比较试验。结果报道于下。
1 材料和方法
1.1 材料 HBsAg参比标准品1、2、5、10、10000μg/L由中国临床检验中心提供；1g/L HBsAg及HBsAg ELISA测定试剂(批号980925，灵敏度<1μg/L)由山东3V公司提供；OD值用荷兰阿克苏公司210酶标仪测定。
, 百拇医药
1.2 制片 用不锈钢载片，37℃制片按GB15981-1995操作；4℃制片除放4℃冰箱干燥外，余均同GB15981-1995。载片的洗涤：方法按GB15981-1995进行。另设浸泡4、8、12h后再振荡洗涤，收集各自的洗涤液测定OD值。
测定参比HBsAg系列稀释度的OD值，绘制HBsAg浓度的OD值参比曲线，根据机率单位求出对数直线回归方程。被检样本OD值与参比HBsAg系列稀释标本中最高OD值相比，求出载片上HBsAg的回收率(%)[2]；或以S/N≥2.1为阳性，<2.1为阴性[3]。
2 结果
2.1 不同温度对载片上HBsAg含量的影响 见表1。用37℃制片载片上HBsAg的回收率为88.69%，而4℃可达97.46%，两者之间有显著性差异(P<0.05)。
, 百拇医药 2.2 两种温度的制片经不同时间浸泡后HBsAg的回收率 载片经30min振荡洗涤和经4、8、12h浸泡后再振荡洗涤。测定各自洗液中HBsAg含量，以浸泡4h回收率最好(表2)。
表1 37℃、4℃载片上HBsAg回收率比较 1μg/m1 HBsAg
阳性对照OD值
37℃
4℃
OD值
回收率
OD值
回收率
1.486
, 百拇医药
1.317
88.63
1.454
97.85
1.484
1.320
88.93
1.443
97.24
1.484
1.320
88.95
1.443
, 百拇医药
97.24
1.487
1.318
88.63
1.452
97.65
1.489
1.315
88.69
1.445
97.05
平均值
1.486
, 百拇医药
1.318
88.69
1.448
97.46
表2 两种温度制片经不同时间浸泡后HBsAg的回收情况
1μg/ml HBsAg
参比标准品
OD值
振荡30min
4h
8h
12h
, http://www.100md.com
OD值
回收率
(%)
OD值
回收率
(%)
OD值
回收率
(%)
OD值
回收率
(%)
37℃载片
, 百拇医药
1.500
1.319
87.93(1)
1.409
93.93(2)
1.374
91.60
1.313
87.53
4℃载片
3次均值
1.448
, http://www.100md.com
95.53(3)
1.477
98.47(4)
1.404
93.60
1.401
93.40
(1)与(3)、(4)比较，P<0.01；(2)与(3)、(4)比较，P>0.05
3 讨论
用50mg/L HBsAg参比标准品制备的不锈钢片37℃干燥载片HBsAg的回收率为88.69%，4℃为97.46%。两者之间有显著差异(P<0.05)；与参比标准品OD值相比前者差0.172，后者差0.038；两种温度制片之间HBsAg OD值相比差0.130，这在HBsAg破坏试验的结果判断中足够影响阳性和阴性的判别。37℃制片上HBsAg含量比实际加量少11.31%，影响实验结果的准确性。
, 百拇医药
载片经4、8h浸泡后再振荡洗涤，37℃载片上HBsAg含量分别提高了6.8%和3.67%，4℃载片上提高了2.01%和-3.04%，结果以浸泡4h后再振荡洗涤为好。
将4℃制片再经4h浸泡，HBsAg回收率98.47%比37℃制片上HBsAg回收率87.93%提高11.99%，两者之间有非常显著性差异(P<0.01)，在HBsAg破坏试验载体法的制片中和实验中，是否改成4℃制片和载片经4h浸泡后再振荡洗涤作OD值测定，有待进一步研究和商讨。
参考文献
[1] GB15981-1995.消毒与灭菌效果的评价方法与标准
[2] 卫生部消毒技术规范.1991，12∶92
[3] GB15990-1995.乙型肝病毒性肝炎的诊断标准及处理原则∶病原学检查方法
(2000年3月29日收稿), http://www.100md.com
单位：无锡市卫生防疫站，无锡，214002
关键词：HBsAg；不锈钢载片；回收率；OD值；温度
苏州医学院学报000612 摘要 目的 比较两种温度制片及不同洗涤时间对载体上HBsAg含量的影响。方法 用37℃、4℃两种温度制片载体经30min振荡洗涤或先经4、8、12h浸泡后再振荡洗涤，用ELISA法测定各自的OD值。结果 37℃制片HBsAg的回收率为88.69%，4℃制片为97.46%，两者之间有显著性差异(P<0.05)。两种载片经30min振荡洗涤和经4℃浸泡4h后再振荡洗涤，37℃HBsAg回收率为87.93%和93.93%，4℃为96.53%和98.47%。二者对应比较，有非常显著差异(P皆<0.01)。结论 在载体法HBsAg破坏试验中，用4℃制片及载体经4h浸泡后再振荡洗涤，回收率效果最好。
, 百拇医药
中图法分类号 R446
Different Effect of Temperature Plate Affect the HBsAg Content on the
Carrier in the HBsAg Destructive Experiment
You Fengxing, Xiao Yong, Ji Xingsheng, et al
(Wuxi Sanitary and Anti-Epidemic Station,Wuxi,214002)
Abstract Objective To compare the effect of plate with different temperature and different washing time on the HBsAg content on the carrier.Method Washing oscillatory the plate of 37℃,4℃ for 30min,or after immersed in liquid for 4,8,12h,the plates were washed vibrantly.the OD value of different plates was measured with ELISA.Result The recover rate of HBsAg on 37℃ plate was 88.69%,and on 4℃ plate was 97.46%,there was obvious difference between them (P<0.05).After the treatment of washing vibrantly,the recover rate on 37℃ plate was 87.93%,and 4℃ plate was 96.53%.Compared with that immersed in liquid at 4℃ for 4 hours followed by washing vibrantly,the recover rate on the 37℃ plate was 93.93% and 4℃ plate was 98.47%,the difference was obvious (P<0.01).Conclusion In HBsAg destructive experiment with carrier,the HBsAg content on 4℃ plate and that on the carrier which immersed in liquid for 4h followed by washing vibrantly has the best recovery.
, 百拇医药
Key words HBsAg;stainless steel plate;recover rate;OD value;temprature
我们在HBsAg破坏试验载体法的实验中，以50mg/L HBsAg稀释至1mg/L的实际浓度[1]作为洗涤对照样本，观察HBsAg不锈钢载片(以下简称载片)上的HBsAg含量，回收率只有88.69%。为此，我们进行了37℃、4℃两种不同温度制片和载片经不同时间浸泡后再振荡洗涤对HBsAg回收率影响的比较试验。结果报道于下。
1 材料和方法
1.1 材料 HBsAg参比标准品1、2、5、10、10000μg/L由中国临床检验中心提供；1g/L HBsAg及HBsAg ELISA测定试剂(批号980925，灵敏度<1μg/L)由山东3V公司提供；OD值用荷兰阿克苏公司210酶标仪测定。
, 百拇医药
1.2 制片 用不锈钢载片，37℃制片按GB15981-1995操作；4℃制片除放4℃冰箱干燥外，余均同GB15981-1995。载片的洗涤：方法按GB15981-1995进行。另设浸泡4、8、12h后再振荡洗涤，收集各自的洗涤液测定OD值。
测定参比HBsAg系列稀释度的OD值，绘制HBsAg浓度的OD值参比曲线，根据机率单位求出对数直线回归方程。被检样本OD值与参比HBsAg系列稀释标本中最高OD值相比，求出载片上HBsAg的回收率(%)[2]；或以S/N≥2.1为阳性，<2.1为阴性[3]。
2 结果
2.1 不同温度对载片上HBsAg含量的影响 见表1。用37℃制片载片上HBsAg的回收率为88.69%，而4℃可达97.46%，两者之间有显著性差异(P<0.05)。
, 百拇医药 2.2 两种温度的制片经不同时间浸泡后HBsAg的回收率 载片经30min振荡洗涤和经4、8、12h浸泡后再振荡洗涤。测定各自洗液中HBsAg含量，以浸泡4h回收率最好(表2)。
表1 37℃、4℃载片上HBsAg回收率比较 1μg/m1 HBsAg
阳性对照OD值
37℃
4℃
OD值
回收率
OD值
回收率
1.486
, 百拇医药
1.317
88.63
1.454
97.85
1.484
1.320
88.93
1.443
97.24
1.484
1.320
88.95
1.443
, 百拇医药
97.24
1.487
1.318
88.63
1.452
97.65
1.489
1.315
88.69
1.445
97.05
平均值
1.486
, 百拇医药
1.318
88.69
1.448
97.46
表2 两种温度制片经不同时间浸泡后HBsAg的回收情况
1μg/ml HBsAg
参比标准品
OD值
振荡30min
4h
8h
12h
, http://www.100md.com
OD值
回收率
(%)
OD值
回收率
(%)
OD值
回收率
(%)
OD值
回收率
(%)
37℃载片
, 百拇医药
1.500
1.319
87.93(1)
1.409
93.93(2)
1.374
91.60
1.313
87.53
4℃载片
3次均值
1.448
, http://www.100md.com
95.53(3)
1.477
98.47(4)
1.404
93.60
1.401
93.40
(1)与(3)、(4)比较，P<0.01；(2)与(3)、(4)比较，P>0.05
3 讨论
用50mg/L HBsAg参比标准品制备的不锈钢片37℃干燥载片HBsAg的回收率为88.69%，4℃为97.46%。两者之间有显著差异(P<0.05)；与参比标准品OD值相比前者差0.172，后者差0.038；两种温度制片之间HBsAg OD值相比差0.130，这在HBsAg破坏试验的结果判断中足够影响阳性和阴性的判别。37℃制片上HBsAg含量比实际加量少11.31%，影响实验结果的准确性。
, 百拇医药
载片经4、8h浸泡后再振荡洗涤，37℃载片上HBsAg含量分别提高了6.8%和3.67%，4℃载片上提高了2.01%和-3.04%，结果以浸泡4h后再振荡洗涤为好。
将4℃制片再经4h浸泡，HBsAg回收率98.47%比37℃制片上HBsAg回收率87.93%提高11.99%，两者之间有非常显著性差异(P<0.01)，在HBsAg破坏试验载体法的制片中和实验中，是否改成4℃制片和载片经4h浸泡后再振荡洗涤作OD值测定，有待进一步研究和商讨。
参考文献
[1] GB15981-1995.消毒与灭菌效果的评价方法与标准
[2] 卫生部消毒技术规范.1991，12∶92
[3] GB15990-1995.乙型肝病毒性肝炎的诊断标准及处理原则∶病原学检查方法
(2000年3月29日收稿), http://www.100md.com