3种饮片中川芎嗪含量的测定
作者：袁伯勇 袁慧 赵铭
单位：袁伯勇(泰山医学院 泰安 271000)；袁慧(泰山医学院附属医院)；赵铭(泰山医学院第一教学医院)
关键词：
中草药000615 川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort. 的干燥根茎，能 活 血行气、祛风止痛。国内对该中药在心血管系统的作用有较多的研究，临床上使用的川芎有 生品、酒炙品、炒品3 种饮片[1，2]。川芎嗪是川芎中主要有活性的生物碱，制剂 中川芎嗪含量的测定已有报道[3，4]。为了探讨川芎炮制前后川芎嗪的变化，用RP -HPLC法测定了3 种饮片中川芎嗪的含量。
1 试药与仪器
川芎：购于滕州市药材公司，经本院中医教研室秦庆云鉴定为Ligusticum chuanxi ong Hort. 的干燥根茎。洗净处理后备用。
, 百拇医药
川芎炒品、酒炙品：参照文献[1，5]制备。上述各样品均粉碎过40 目筛。
试剂：盐酸川芎嗪对照品由中国药品生物制品检定所提供，试剂均为分析纯；重蒸水。
仪器：岛津LC-6A 高效液相色谱系统；SCL-6A系统控制器，7125型进样阀，LC-6A溶剂 泵，CTO-6A色谱柱箱，SPD-6AV可见-紫外检测器，C-R3A数据处理机。岛津UV-265 型紫外分光光度计。
2 实验方法和结果
2.1 样品液的制备：精密称取样品粉末约0.6 g，置10 mL具塞试管中，加无水乙醇7 mL ，放置12 h以上，超声提取25 min，离心5 min (4 000 r/min)，上清液移到25 mL量瓶中 。按上法将残渣用无水乙醇再提取2 次，上清液转入量瓶中，用无水乙醇定容。精取6 mL样品的提取液置50 mL烧杯中，加1 moL/L的盐酸甲醇溶液适量，混匀，pH=1.2， 置恒温水浴45 ℃蒸干。加1 moL/L盐酸9 mL溶解残渣，过滤。滤液用浓氨水(7.5 moL/L) 调 pH=9～10 后，再用二氯甲烷提取2 次(9 mL、7 mL)。将二氯甲烷提取液置50 mL烧杯中，用 1 moL/L盐酸甲醇液调pH=1.2，置恒温水浴上45 ℃蒸干。精加甲醇5 mL溶解残渣，将溶解 液转入5 mL具塞离心试管中，离心5 min(4 000r/min)，得待测样品液。
, 百拇医药
2.2 色谱条件：岛津Shim-Pack CLC-ODS(150 mm×6 mm，5μm)柱，流动相甲醇-0.1 moL/L醋酸、醋酸钠缓冲液=32∶68(pH4.0，比较实验确定)，流速1.0 mL/min，检测波长2 78 nm，灵敏度0.08AUFS，纸速2 mm/min，柱温室温。
2.3 对照品纯度检查：取对照品甲醇溶液(18.30 μg/mL)4.5 μL，按上色谱条件测峰 面积，除去溶剂峰后，用归一化法计算盐酸川芎嗪的含量为100%(n=5)， 对照品符合该色谱分析的要求。
2.4 标准曲线：称对照品3.66 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇定容为A液(含川芎嗪288.6 μg/mL)。取A液1.25 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇定容，为B液。分别取B液0.25，0.75 ，1.25，1.75，2.25 mL置于5 个10 mL量瓶中，用甲醇定容后混匀，在前述色谱条件下 进样20 μL，得进样量在0.007 22～0.064 9 μg间川芎嗪量(Y)和峰高(X)呈良 好的线性关系，回归方程为：Y=1.080 5×10-3+0.019 829X，r=0.999 8。
, 百拇医药
2.5 回收率及精密度试验：取盐酸川芎嗪甲醇液(A液)1.5 mL，用甲醇稀释到10 mL，取 该液0.3 mL加入已精密称取的川芎生品粉末约0.3 g中，用2.1项的方法制备样品液，进 样20 μL，测定回收率为99.1%，RSD=1.66%(n=5)。
制备炒品样品液，进样20 μL，在2.2项的色谱条件下重复进样8 次，样品中川芎嗪的含 量(μg/g)分别为44.93，44.07，44.07，44.93，44.93，44.93，44.93，44.93， 计算川芎嗪含量的RSD为0.89%。
2.6 检测限：称取酒炙品粉末约0.3 g 4 份，按2.1项方法制备样品液，进样20 μL， 取信噪比为4 时川芎嗪量作为检测限，结果为5.07 ng，样品液中川芎嗪最 低检测浓度为0.255 μg/mL。
2.7 样品分析：分别取3 种饮片样品液进样20 μL，按前述色谱条件进行定量分析，结果 见表1，色谱图见图1，川芎嗪的保留时间为23.318 min。
, http://www.100md.com
3 讨论
3.1 溶剂的极性及pH值对碱性物质的紫外光谱影响比较大。用流动相配制盐酸川芎嗪对照 品溶液(含盐酸川芎嗪 12.81 μg/mL)， 在波长200 nm ～400 nm处扫描，紫外光谱图见图2。λmax=278 nm，故本研究选择278 nm检测川芎嗪。
表1 3 种饮片中川芎嗪的含量(μg/g) 样 品
含 量
x
RSD
(%)
P*
生品
, 百拇医药
60.40
59.60
59.77
59.80
60.28
59.97
0.58
酒炙品
54.30
55.22
55.69
54.81
59.74
, 百拇医药
55.15
1.11
<0.001
炒 品
44.92
44.72
44.23
45.27
45.37
44.90
1.0 2
<0.001
*炒品、酒炙品分别与生品作t检验
, 百拇医药
3.2 分别对生品的第3，4，5次提取液进川芎嗪含量测定，第3 次提取液中川芎嗪含量 在LC-6A检测限以上，第4、第5 次提取液中川芎嗪含量在LC-6A检测限以下。第4、第5 次 提取从每克川芎生品中提出的川芎嗪量占5 次提取总量的百分比 小于4.0%，说明提取3 次生品中96.0%以上的川芎嗪已被提取出。故本法采用样品粉末 加入无水乙醇放置12 h以上后超声提3 次，每次25 min的方法。
A-对照品 B-生品 C-炒品 D-酒炙品 T-川芎嗪
图1 3 种饮片和对照品色谱图
图2 盐酸川芎嗪紫外光谱
3.3 由结果知，和生品相比， 酒炙品川芎嗪含量降低8.04%，炒品中川芎嗪含量降低25. 13%，3 种饮片川芎嗪含量之间有显著差异。生品酒炙或炒后，川芎嗪含量下降，说明川芎 炮制前后川芎中部分川芎嗪分子发生了变化。
, 百拇医药
3.4 根据对病人的辨证诊断选择适宜的中药饮片组方调剂，才会有好的疗效。川芎中的 川芎嗪、挥发油有抗血小板聚集、扩张动脉、改善微循环脑血流、溶栓、止痛等作用，故发 挥 川芎祛风除湿止痛的功效时宜用生品。酒炙时加入的黄酒有活血通络的作用，故发挥川芎活 血止痛的功效时宜用酒炙品，但在酒炙时温度以低为好，尽量减少川芎嗪的损失。
参 考 文 献
1，颜正华.中药学.北京：人民卫生出版社，1991：529
2，成都中医学院主编.中药学.上海：上海科学技术出版社，1978：247
3，赵志春，等.中国中药杂志，1991，16(12)：729
4，蒋芝荣.中草药，1994，25(9)：459
5，国家药政管理局编.全国中药炮制规范.北京：人民卫生出版社，1988：14，42 0
(1999-03-02收稿), 百拇医药
单位：袁伯勇(泰山医学院 泰安 271000)；袁慧(泰山医学院附属医院)；赵铭(泰山医学院第一教学医院)
关键词：
中草药000615 川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort. 的干燥根茎，能 活 血行气、祛风止痛。国内对该中药在心血管系统的作用有较多的研究，临床上使用的川芎有 生品、酒炙品、炒品3 种饮片[1，2]。川芎嗪是川芎中主要有活性的生物碱，制剂 中川芎嗪含量的测定已有报道[3，4]。为了探讨川芎炮制前后川芎嗪的变化，用RP -HPLC法测定了3 种饮片中川芎嗪的含量。
1 试药与仪器
川芎：购于滕州市药材公司，经本院中医教研室秦庆云鉴定为Ligusticum chuanxi ong Hort. 的干燥根茎。洗净处理后备用。
, 百拇医药
川芎炒品、酒炙品：参照文献[1，5]制备。上述各样品均粉碎过40 目筛。
试剂：盐酸川芎嗪对照品由中国药品生物制品检定所提供，试剂均为分析纯；重蒸水。
仪器：岛津LC-6A 高效液相色谱系统；SCL-6A系统控制器，7125型进样阀，LC-6A溶剂 泵，CTO-6A色谱柱箱，SPD-6AV可见-紫外检测器，C-R3A数据处理机。岛津UV-265 型紫外分光光度计。
2 实验方法和结果
2.1 样品液的制备：精密称取样品粉末约0.6 g，置10 mL具塞试管中，加无水乙醇7 mL ，放置12 h以上，超声提取25 min，离心5 min (4 000 r/min)，上清液移到25 mL量瓶中 。按上法将残渣用无水乙醇再提取2 次，上清液转入量瓶中，用无水乙醇定容。精取6 mL样品的提取液置50 mL烧杯中，加1 moL/L的盐酸甲醇溶液适量，混匀，pH=1.2， 置恒温水浴45 ℃蒸干。加1 moL/L盐酸9 mL溶解残渣，过滤。滤液用浓氨水(7.5 moL/L) 调 pH=9～10 后，再用二氯甲烷提取2 次(9 mL、7 mL)。将二氯甲烷提取液置50 mL烧杯中，用 1 moL/L盐酸甲醇液调pH=1.2，置恒温水浴上45 ℃蒸干。精加甲醇5 mL溶解残渣，将溶解 液转入5 mL具塞离心试管中，离心5 min(4 000r/min)，得待测样品液。
, 百拇医药
2.2 色谱条件：岛津Shim-Pack CLC-ODS(150 mm×6 mm，5μm)柱，流动相甲醇-0.1 moL/L醋酸、醋酸钠缓冲液=32∶68(pH4.0，比较实验确定)，流速1.0 mL/min，检测波长2 78 nm，灵敏度0.08AUFS，纸速2 mm/min，柱温室温。
2.3 对照品纯度检查：取对照品甲醇溶液(18.30 μg/mL)4.5 μL，按上色谱条件测峰 面积，除去溶剂峰后，用归一化法计算盐酸川芎嗪的含量为100%(n=5)， 对照品符合该色谱分析的要求。
2.4 标准曲线：称对照品3.66 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇定容为A液(含川芎嗪288.6 μg/mL)。取A液1.25 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇定容，为B液。分别取B液0.25，0.75 ，1.25，1.75，2.25 mL置于5 个10 mL量瓶中，用甲醇定容后混匀，在前述色谱条件下 进样20 μL，得进样量在0.007 22～0.064 9 μg间川芎嗪量(Y)和峰高(X)呈良 好的线性关系，回归方程为：Y=1.080 5×10-3+0.019 829X，r=0.999 8。
, 百拇医药
2.5 回收率及精密度试验：取盐酸川芎嗪甲醇液(A液)1.5 mL，用甲醇稀释到10 mL，取 该液0.3 mL加入已精密称取的川芎生品粉末约0.3 g中，用2.1项的方法制备样品液，进 样20 μL，测定回收率为99.1%，RSD=1.66%(n=5)。
制备炒品样品液，进样20 μL，在2.2项的色谱条件下重复进样8 次，样品中川芎嗪的含 量(μg/g)分别为44.93，44.07，44.07，44.93，44.93，44.93，44.93，44.93， 计算川芎嗪含量的RSD为0.89%。
2.6 检测限：称取酒炙品粉末约0.3 g 4 份，按2.1项方法制备样品液，进样20 μL， 取信噪比为4 时川芎嗪量作为检测限，结果为5.07 ng，样品液中川芎嗪最 低检测浓度为0.255 μg/mL。
2.7 样品分析：分别取3 种饮片样品液进样20 μL，按前述色谱条件进行定量分析，结果 见表1，色谱图见图1，川芎嗪的保留时间为23.318 min。
, http://www.100md.com
3 讨论
3.1 溶剂的极性及pH值对碱性物质的紫外光谱影响比较大。用流动相配制盐酸川芎嗪对照 品溶液(含盐酸川芎嗪 12.81 μg/mL)， 在波长200 nm ～400 nm处扫描，紫外光谱图见图2。λmax=278 nm，故本研究选择278 nm检测川芎嗪。
表1 3 种饮片中川芎嗪的含量(μg/g) 样 品
含 量
x
RSD
(%)
P*
生品
, 百拇医药
60.40
59.60
59.77
59.80
60.28
59.97
0.58
酒炙品
54.30
55.22
55.69
54.81
59.74
, 百拇医药
55.15
1.11
<0.001
炒 品
44.92
44.72
44.23
45.27
45.37
44.90
1.0 2
<0.001
*炒品、酒炙品分别与生品作t检验
, 百拇医药
3.2 分别对生品的第3，4，5次提取液进川芎嗪含量测定，第3 次提取液中川芎嗪含量 在LC-6A检测限以上，第4、第5 次提取液中川芎嗪含量在LC-6A检测限以下。第4、第5 次 提取从每克川芎生品中提出的川芎嗪量占5 次提取总量的百分比 小于4.0%，说明提取3 次生品中96.0%以上的川芎嗪已被提取出。故本法采用样品粉末 加入无水乙醇放置12 h以上后超声提3 次，每次25 min的方法。
A-对照品 B-生品 C-炒品 D-酒炙品 T-川芎嗪
图1 3 种饮片和对照品色谱图
图2 盐酸川芎嗪紫外光谱
3.3 由结果知，和生品相比， 酒炙品川芎嗪含量降低8.04%，炒品中川芎嗪含量降低25. 13%，3 种饮片川芎嗪含量之间有显著差异。生品酒炙或炒后，川芎嗪含量下降，说明川芎 炮制前后川芎中部分川芎嗪分子发生了变化。
, 百拇医药
3.4 根据对病人的辨证诊断选择适宜的中药饮片组方调剂，才会有好的疗效。川芎中的 川芎嗪、挥发油有抗血小板聚集、扩张动脉、改善微循环脑血流、溶栓、止痛等作用，故发 挥 川芎祛风除湿止痛的功效时宜用生品。酒炙时加入的黄酒有活血通络的作用，故发挥川芎活 血止痛的功效时宜用酒炙品，但在酒炙时温度以低为好，尽量减少川芎嗪的损失。
参 考 文 献
1，颜正华.中药学.北京：人民卫生出版社，1991：529
2，成都中医学院主编.中药学.上海：上海科学技术出版社，1978：247
3，赵志春，等.中国中药杂志，1991，16(12)：729
4，蒋芝荣.中草药，1994，25(9)：459
5，国家药政管理局编.全国中药炮制规范.北京：人民卫生出版社，1988：14，42 0
(1999-03-02收稿), 百拇医药