血管内皮生长因子的检测在冠心病患者中的意义
钱孝贤 吴伟康 郑振声 余步云 汤美安
摘 要：目的：为了探讨血管内皮生长因子(VEGF)的检测在冠心病患者中的意义。方法：应用双抗夹心ELISA法检测了55例冠心病(CHD)患者和34例正常对照者的血清VEGF水平。结果：CHD患者血清VEGF水平(498.98±304.50) pg/ml明显高于正常对照组(121.49± 30.29 )pg/ml，P<0.01；其中急性心肌梗塞(AMI)患者组血清VEGF水平(809.21±191.16) pg/ml明显高于心绞痛患者组(292.14±148.56) pg/ml，P<0.01，而且两者均高于正常对照组。结论：提示VEGF可能是反映心肌缺血的敏感指标。
关键词：血管内皮生长因子 急性心肌缺血 心肌梗塞 心绞痛
血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是1989年从培养的牛垂体滤泡星状细胞中分离出的一种多肽，它可促进新生血管的形成，因此受到医学界重视[1]。大量的动物实验证明VEGF可促进缺血组织的血管再生、改善血液供应、缓解症状、在治疗缺血性疾病方面具有较好前景[2，3]。但是，VEGF的临床研究刚刚开始，在冠心病患者中的意义探讨则更少，国外仅有少量病例报道，国内目前少见这方面的研究，本文应用双抗夹心ELISA法检测了55例冠心病(Coronary heart disease,CHD)患者血清VEGF的水平，探讨其在冠心病发病机制中的意义。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 研究对象 CHD患者来自本院的住院病人，共55例，均符合WHO CHD的诊断标准,其中心绞痛患者33例，男18例，女15例，年龄45～70(57±12)岁，病程3～10年；急性心肌梗塞(AMI)患者22例，男14例，女8例，年龄40～65(60±9)岁，病程2～7年。对照组：体检健康者34例，男19例，女15例，年龄28～55(45±8)岁，性别、年龄与疾病组无显著性差异。
1.2 方法
1.2.1 采血方法 心绞痛患者和对照组均于清晨空腹抽取静脉血，AMI患者入院时即刻采血，血标本 在抽血后30 min内低温离心分离血清，分装置于-70℃冰箱中保存待检。
1.2.2 检测方法 VEGF检测试剂购于R&D Systems，采用双抗夹心ELISA法，步骤简述如下：在已包被鼠抗人VEGF单克隆抗体的聚丙乙烯96孔酶标板中，每孔加入100 μl样本稀释液，再分别加入标准品和待检血清100 μl，其中标准品VEGF165含量等倍稀释，浓度为2 000，1 000，500，250，125，62.5，31.5 pg/ml，以稀释液为空白对照，所有标本均设双孔检测。加样后置室温2 h，充分洗涤3次，甩干；每孔分别加入标记辣根过氧化氢酶的抗人VEGF多克隆抗体200 μl，置室温2 h，充分洗涤3次，甩干；分别加入底物100 μl，显色15 min；加入2 mol/L的硫酸50 μl终止反应；在酶标仪上波长为450 nm波段测定各孔的光密度值，以VEGF标准品浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，做直线相关回归，根据待测标本的光密度值在直线上查出相应的VEGF含量。
, 百拇医药
1.2.3 统计方法 样本均数用(X±s)表示，两组之间均数比较用t检验，多组间均数比较用单因素方差分析。
2 结果
CHD、心绞痛和AMI组患者血清VEGF水平均高于正常组， 而且AMI患者组血清VEGF水平高于心绞痛患者组(见表1)。
表1 CHD、心绞痛和AMI患者血清VEGF水平
Tab.1 The serum VEGF levels of CHD, angina and AMI patients
Groups
n
X±s(pg/ml)
, http://www.100md.com
Control
34
121.49± 30.29
CHD
55
498.98±304.501)
Angina
33
292.14±148.562)
AMI
22
809.21±191.161)3)
, 百拇医药
Note: Compared with control，1) P<0.01, 2) P<0.05;compared with angina,3) P<0.01
3 讨论
VEGF是近年来发现的一种促血管生长因子，是分子量为35～45 kD的糖蛋白，由2个分子量为17～22 kD的相同亚单位经过二硫键形成的二聚体[4]。人至少有4种VEGF，分别由121、165、189和206个氨基酸组成，其中VEGF 189和VEGF 206分泌后即与细胞膜、基底膜或细胞外基质中含肝素的糖蛋白结合，测不出游离成分；VEGF 121以游离的形式存在；VEGF 165则以上述2种形式存在，是发挥生物学效应的主要成分[4]。心肌细胞、平滑肌细胞以及一些肿瘤细胞均可分泌VEGF，缺血(缺氧)是刺激VEGF分泌的重要因素[5]。
本研究结果发现CHD患者血清VEGF水平明显高于正常组(P<0.001)，特别是AMI患者血清VEGF明显高于心绞痛患者(P<0.001)，两者血清VEGF水平均高于正常组的水平，提示VEGF可能是反映心肌缺血的敏感指标。有研究发现AMI患者血清VEGF明显增高，当溶栓再通后其水平可恢复正常，从而认为VEGF对缺氧(缺血)的敏感性较高[6]。本研究发现，心肌缺血严重的AMI患者血清VEGF水平明显高于心肌缺血较轻的心绞痛患者，所得结果与上述研究的结论相吻合。
, 百拇医药
由于VEGF的检测方法不太复杂，血标本采集方便，VEGF有可能成为临床上一种新的反映心肌缺血的指标。
①广东省卫生厅科研基金项目(批准文号A1998189)
作者简介：钱孝贤，男，31岁，主治医师，博士生，主要从事心肌缺血发病机制的研究；
吴伟康，男，51岁，教授，博士生导师，主要从事心肌缺血的病理生理研究
作者单位：钱孝贤(中山医科大学第三临床学院心内科 广州 510630)
吴伟康(中山医科大学病理生理学教研室，广州 510630)
郑振声(中山医科大学卫生部辅助循环重点实验室，广州 510630)
, 百拇医药 余步云(中山医科大学第三临床学院心内科 广州 510630)
汤美安(中山医科大学第三临床学院心内科 广州 510630)
参考文献：
[1]Ferrara N, Henzel W J. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells. Biochem Biophys Res Commun， 1989; 161(2): 851
[2]Banai S, Taklitsch M T, Shou M et al. Angiogenic-induced enhancement of collateral blood flow to ischemic myocardium by vascular endothelial growth factor in dogs. Circulation， 1994; 89(5): 2183
, 百拇医药
[3]Bauters C, Asahaha T, Zheng L P et al. Recovery of disturbed endothelium-dependent flow in the collateral-perfused rabbit ischemic hindlimb after administration of vascular endothelial growth factor. Circulation，1995; 91(11): 28023
[4] Ferrara N, Henzel W J, Jakeman L et al. The vascular endothelial growth factor family of polypeptides. J Cell Biochem， 1991; 47: 211
[5] Bunai S, Shweiki D, Pinson A et al. Upregulation of vascular endothelial growth factor expression induced by myocardial ischemia: implications for coronary angiogenesis. Cardiovasc Res， 1994; 28(8): 1176
[6] Seko Y, Imai Y, Suzki S et al. Serum levels of VEGF in patients with acute myocardial infarct undergoing reperfusion therapy. Clin Sci Colch， 1997; 92(5): 453, 百拇医药
摘 要：目的：为了探讨血管内皮生长因子(VEGF)的检测在冠心病患者中的意义。方法：应用双抗夹心ELISA法检测了55例冠心病(CHD)患者和34例正常对照者的血清VEGF水平。结果：CHD患者血清VEGF水平(498.98±304.50) pg/ml明显高于正常对照组(121.49± 30.29 )pg/ml，P<0.01；其中急性心肌梗塞(AMI)患者组血清VEGF水平(809.21±191.16) pg/ml明显高于心绞痛患者组(292.14±148.56) pg/ml，P<0.01，而且两者均高于正常对照组。结论：提示VEGF可能是反映心肌缺血的敏感指标。
关键词：血管内皮生长因子 急性心肌缺血 心肌梗塞 心绞痛
血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是1989年从培养的牛垂体滤泡星状细胞中分离出的一种多肽，它可促进新生血管的形成，因此受到医学界重视[1]。大量的动物实验证明VEGF可促进缺血组织的血管再生、改善血液供应、缓解症状、在治疗缺血性疾病方面具有较好前景[2，3]。但是，VEGF的临床研究刚刚开始，在冠心病患者中的意义探讨则更少，国外仅有少量病例报道，国内目前少见这方面的研究，本文应用双抗夹心ELISA法检测了55例冠心病(Coronary heart disease,CHD)患者血清VEGF的水平，探讨其在冠心病发病机制中的意义。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 研究对象 CHD患者来自本院的住院病人，共55例，均符合WHO CHD的诊断标准,其中心绞痛患者33例，男18例，女15例，年龄45～70(57±12)岁，病程3～10年；急性心肌梗塞(AMI)患者22例，男14例，女8例，年龄40～65(60±9)岁，病程2～7年。对照组：体检健康者34例，男19例，女15例，年龄28～55(45±8)岁，性别、年龄与疾病组无显著性差异。
1.2 方法
1.2.1 采血方法 心绞痛患者和对照组均于清晨空腹抽取静脉血，AMI患者入院时即刻采血，血标本 在抽血后30 min内低温离心分离血清，分装置于-70℃冰箱中保存待检。
1.2.2 检测方法 VEGF检测试剂购于R&D Systems，采用双抗夹心ELISA法，步骤简述如下：在已包被鼠抗人VEGF单克隆抗体的聚丙乙烯96孔酶标板中，每孔加入100 μl样本稀释液，再分别加入标准品和待检血清100 μl，其中标准品VEGF165含量等倍稀释，浓度为2 000，1 000，500，250，125，62.5，31.5 pg/ml，以稀释液为空白对照，所有标本均设双孔检测。加样后置室温2 h，充分洗涤3次，甩干；每孔分别加入标记辣根过氧化氢酶的抗人VEGF多克隆抗体200 μl，置室温2 h，充分洗涤3次，甩干；分别加入底物100 μl，显色15 min；加入2 mol/L的硫酸50 μl终止反应；在酶标仪上波长为450 nm波段测定各孔的光密度值，以VEGF标准品浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，做直线相关回归，根据待测标本的光密度值在直线上查出相应的VEGF含量。
, 百拇医药
1.2.3 统计方法 样本均数用(X±s)表示，两组之间均数比较用t检验，多组间均数比较用单因素方差分析。
2 结果
CHD、心绞痛和AMI组患者血清VEGF水平均高于正常组， 而且AMI患者组血清VEGF水平高于心绞痛患者组(见表1)。
表1 CHD、心绞痛和AMI患者血清VEGF水平
Tab.1 The serum VEGF levels of CHD, angina and AMI patients
Groups
n
X±s(pg/ml)
, http://www.100md.com
Control
34
121.49± 30.29
CHD
55
498.98±304.501)
Angina
33
292.14±148.562)
AMI
22
809.21±191.161)3)
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Note: Compared with control，1) P<0.01, 2) P<0.05;compared with angina,3) P<0.01
3 讨论
VEGF是近年来发现的一种促血管生长因子，是分子量为35～45 kD的糖蛋白，由2个分子量为17～22 kD的相同亚单位经过二硫键形成的二聚体[4]。人至少有4种VEGF，分别由121、165、189和206个氨基酸组成，其中VEGF 189和VEGF 206分泌后即与细胞膜、基底膜或细胞外基质中含肝素的糖蛋白结合，测不出游离成分；VEGF 121以游离的形式存在；VEGF 165则以上述2种形式存在，是发挥生物学效应的主要成分[4]。心肌细胞、平滑肌细胞以及一些肿瘤细胞均可分泌VEGF，缺血(缺氧)是刺激VEGF分泌的重要因素[5]。
本研究结果发现CHD患者血清VEGF水平明显高于正常组(P<0.001)，特别是AMI患者血清VEGF明显高于心绞痛患者(P<0.001)，两者血清VEGF水平均高于正常组的水平，提示VEGF可能是反映心肌缺血的敏感指标。有研究发现AMI患者血清VEGF明显增高，当溶栓再通后其水平可恢复正常，从而认为VEGF对缺氧(缺血)的敏感性较高[6]。本研究发现，心肌缺血严重的AMI患者血清VEGF水平明显高于心肌缺血较轻的心绞痛患者，所得结果与上述研究的结论相吻合。
, 百拇医药
由于VEGF的检测方法不太复杂，血标本采集方便，VEGF有可能成为临床上一种新的反映心肌缺血的指标。
①广东省卫生厅科研基金项目(批准文号A1998189)
作者简介：钱孝贤，男，31岁，主治医师，博士生，主要从事心肌缺血发病机制的研究；
吴伟康，男，51岁，教授，博士生导师，主要从事心肌缺血的病理生理研究
作者单位：钱孝贤(中山医科大学第三临床学院心内科 广州 510630)
吴伟康(中山医科大学病理生理学教研室，广州 510630)
郑振声(中山医科大学卫生部辅助循环重点实验室，广州 510630)
, 百拇医药 余步云(中山医科大学第三临床学院心内科 广州 510630)
汤美安(中山医科大学第三临床学院心内科 广州 510630)
参考文献：
[1]Ferrara N, Henzel W J. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells. Biochem Biophys Res Commun， 1989; 161(2): 851
[2]Banai S, Taklitsch M T, Shou M et al. Angiogenic-induced enhancement of collateral blood flow to ischemic myocardium by vascular endothelial growth factor in dogs. Circulation， 1994; 89(5): 2183
, 百拇医药
[3]Bauters C, Asahaha T, Zheng L P et al. Recovery of disturbed endothelium-dependent flow in the collateral-perfused rabbit ischemic hindlimb after administration of vascular endothelial growth factor. Circulation，1995; 91(11): 28023
[4] Ferrara N, Henzel W J, Jakeman L et al. The vascular endothelial growth factor family of polypeptides. J Cell Biochem， 1991; 47: 211
[5] Bunai S, Shweiki D, Pinson A et al. Upregulation of vascular endothelial growth factor expression induced by myocardial ischemia: implications for coronary angiogenesis. Cardiovasc Res， 1994; 28(8): 1176
[6] Seko Y, Imai Y, Suzki S et al. Serum levels of VEGF in patients with acute myocardial infarct undergoing reperfusion therapy. Clin Sci Colch， 1997; 92(5): 453, 百拇医药