人胰腺癌组织中nm23基因蛋白的表达及其意义
作者：冯一中 顾元龙
单位：冯一中(苏州医学院附属第二医院病理科，苏州，215004)；顾元龙(无锡市第三人民医院)
关键词：胰腺癌；nm23基因；免疫组织化学
苏州医学院学报000709 摘要 目的 探讨nm23-H1 蛋白在胰腺癌发生发展中的作用,为胰腺癌的诊断、预后估计提供依据。方法 对21例胰腺癌手术切除标本和10例非肿瘤性胰腺组织进行nm23-H1单克隆抗体的免疫组化检测，所有检测均采用Envision 2步法。结果 21例胰腺癌中nm23-H1阳性表达率为61.9%(13/21)，高于非肿瘤组织(P<0.05)；高分化腺癌的阳性表达率(100%)同低分化腺癌组(33%)存在显著性差异(P<0.05)。结论 nm23-H1 的表达能反映胰腺癌的某些生物学活性，有助于胰腺癌的预后估计。
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中图法分类号 R735.9
Expression of nm23 Oncoprotein in Tissues of Human Adenocarcinoma of Pancreas
Feng Yizhong,Gu Yuanlong
(Department of Pathology,The Second Hospital Affiliated to Suzhou Medical College,Suzhou，215004)
Abstract Objective Study the effects of nm23-H1 oncoprotein on genesis and development of pancreatic adenocarcinoma and to find out the evidences providing for proof of diagnosis and prognostic evaluation.Methods Twenty one resected tumor tissue samples and 10 non-tumor pancreatic tissues were examined by immunohistochemical defector of monoclonal antibody nm23-H1 with Envision two steps method.Results (1)The positive expression (61.9%) of nm23-H1 in samples of pancreatic adenocarcinoma was higher than the expression rate in non-tumor pancreatic tissues (P<0.05).(2)The difference was very significant between the group of high differential adenocarcinoma (100%) and of low differential (33.3%) (P<0.05).Conclusion The expression of nm23-H1 can reflect the biological activity of pancreatic adenocarcinoma and benefic for prognostic evaluation.
, 百拇医药
Key words adenocarcinoma of pancreas;nm23 gene;immunohistochemistry
nm23属转移抑制基因，从小鼠黑色素瘤K-1735细胞株中分离获得，并与恶性肿瘤转移抑制有关[1]。nm23基因的表达与多种实验性肿瘤及人类恶性肿瘤的转移能力密切相关，在低转移细胞株中的表达程度是高转移细胞株的10倍,其编码产物是二磷酸核苷酸激酶(NDPK)[2]。胰腺癌为临床常见的恶性肿瘤，对其的研究已成为当今国内外肿瘤防治研究中的重要课题。本实验运用免疫组化法对胰腺癌手术标本进行nm23基因产物即nm23-H1表达的研究，以探讨其表达与胰腺癌预后的关系。
1 材料和方法
1.1 标本 手术切除胰腺癌标本21例，其中高分化腺癌6例，中分化腺癌7例，低分化腺癌6例，粘液腺癌2例。临床分期Ⅰ期14例，Ⅱ期3例，Ⅲ、Ⅳ期共4例。男13例，女8例。年龄 30～71岁，平均54.8岁。10例非肿瘤性胰腺组织标本作为对照。常规固定石蜡包埋切片。组织病理学分级按Kloppel 标准[3]。临床分期按国际抗癌协会(UICC)1992年标准。
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1.2 材料 鼠抗人nm23-H1单克隆抗体(Senta Crug公司提供)，Envision/HRP复合物(Dako 公司产品)。
1.3 标记方法 石蜡切片常规脱蜡水化，经甲醇-H2O2封闭内源酶；放入盛有柠檬酸盐缓冲液的容器中，置微波炉内，95℃ 10min，以修复抗原；滴加第一抗体(nm23-H1，1∶100)37℃ 60min；加入第二抗体Envision/HRP 37℃ 60min。各步骤之间用PBS洗涤5min×3次。0.04%DAB-过氧化氢液室温显色约10min，苏木素复染细胞核,脱水，透明封片，镜检。
1.4 阳性标准 免疫组化检测结果出现棕黄色染色颗粒的细胞数作为阳性计数，染色细胞数≤5%为阴性，≥6%为阳性。nm23-H1胞核或胞浆染色均为阳性表达。
, 百拇医药 1.5 统计方法 阳性率在实验组与对照组间的差异显著性检验用确切概率法，阳性率在病理分级、临床分期间的差异显著性检验用秩和检验。
2 结果
胰腺癌中nm23-H1的阳性表达率为61.9%(13/21)，阳性染色颗粒主要位于细胞浆内(见附图)；非肿瘤胰腺组织中nm23-H1阳性表达率为10%(1/10)，两者比较有显著性差异(P<0.05)。
附图 胰腺癌中nm23-H1阳性染色颗粒主要位于胞浆内
nm23-H1在不同分化程度胰腺癌的阳性表达率分别为高分化腺癌100%(6/6)、中分化腺癌71.4%(5/7)和低分化腺癌33.3%(2/6)。其中高分化腺癌与低分化腺癌组间存在显著性差异(P<0.05)。2例粘液腺癌均未见阳性表达。nm23-H1在不同临床分期中的阳性表达率分别为Ⅰ期57.1%(8/14)，Ⅱ期66.7%(2/3)和Ⅲ、Ⅳ期50.6%(2/4)。各临床分期间无显著性差异(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
nm23是目前肿瘤转移抑制基因的最佳代表，定位于17号染色体长臂。人类细胞中存在两种nm23基因(nm23-H1和nm23-H2)，其中nm23-H1与肿瘤转移关系更为密切。单克隆抗体的免疫组化检测表明NDPK主要存在于胞浆，但少量可存在于一部分胞核。nm23NDPK能使GDP还原成GTP，激活G蛋白，调节大量蛋白介导的细胞信号传导反应，影响微管、微丝等细胞骨架蛋白活动，改变细胞粘着力和迁移能力，抑制细胞的转移。
在nm23基因与肿瘤转移及患者预后关系的研究中，发现nm23的阳性表达同恶性肿瘤的浸润和淋巴道转移呈负相关，阳性表达的肿瘤，侵袭性相对较低，淋巴道转移相对较晚。Hennessy等[4]报道乳腺癌中nm23具明显肿瘤抑制作用，且与组织分化、淋巴道转移密切相关。肝细胞癌和卵巢癌的研究结果与此相似。nm23在胰腺癌组织研究的报道不多，李淑德等[5]报道nm23在胰腺癌、慢性胰腺炎、正常胰腺组织中的表达率分别为60%、50%、22%，其中胰腺癌与正常胰腺组织之间差别显著。本研究显示胰腺癌中nm23的阳性表达率为61.9%(13/21)，高于非肿瘤胰腺组织(P<0.05)，与上述研究结果相似。本实验组高分化腺癌、中分化腺癌和低分化腺癌的表达率分别为100%(6/6)、71.4%(5/7)和33.3%(2/6)，高分化腺癌和低分化腺癌的表达存在显著性差异(P<0.05)。表明nm23-H1的表达与胰腺癌的分化程度有关,分化愈好,阳性率愈高,这同别的报道结果一致[6]。本实验结果提示nm23有助于了解胰腺癌的某些生物学行为，也可作为判断胰腺癌分化程度和预后的指标。
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参考文献
1，Steeg PS,Bevilacqua G,Koppel L,et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastasis potential.Natl Cancer Inst,1988，80(3)∶200
2，Okabe-Kado J,Kasukabe T,Honma Y,et al.Identity of a differentiation inhibiting factor for mouse myeloid leukemia cells with nm23/ nucleoside diphosphate kinase.Biochem Biophys Res Commun,1992，182(3)∶987
3，Kloppel G,Heitg FU，eds.Pancreatic pathology.Edinbargh: Churchill Livingstone.1984∶17
, http://www.100md.com
4，Hennessy C，Henry JA，FEB，et al.Expression of the antimetastatic gene nm23 in human breast cancer.An association with good prognosis.J Natl Cancer Inst,1991，83∶281
5，李淑德，许国铭，倪灿荣，等.人胰腺癌组织中 nm23基因表达.第二军医大学学报,1997，18(5)∶421
6，李玉军，姜天福，纪祥瑞，等.胰腺癌nm23基因产物NDPK的表达及其临床意义.实用癌症杂志,1998，13(1)∶9
收稿：2000-04-24, http://www.100md.com
单位：冯一中(苏州医学院附属第二医院病理科，苏州，215004)；顾元龙(无锡市第三人民医院)
关键词：胰腺癌；nm23基因；免疫组织化学
苏州医学院学报000709 摘要 目的 探讨nm23-H1 蛋白在胰腺癌发生发展中的作用,为胰腺癌的诊断、预后估计提供依据。方法 对21例胰腺癌手术切除标本和10例非肿瘤性胰腺组织进行nm23-H1单克隆抗体的免疫组化检测，所有检测均采用Envision 2步法。结果 21例胰腺癌中nm23-H1阳性表达率为61.9%(13/21)，高于非肿瘤组织(P<0.05)；高分化腺癌的阳性表达率(100%)同低分化腺癌组(33%)存在显著性差异(P<0.05)。结论 nm23-H1 的表达能反映胰腺癌的某些生物学活性，有助于胰腺癌的预后估计。
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中图法分类号 R735.9
Expression of nm23 Oncoprotein in Tissues of Human Adenocarcinoma of Pancreas
Feng Yizhong,Gu Yuanlong
(Department of Pathology,The Second Hospital Affiliated to Suzhou Medical College,Suzhou，215004)
Abstract Objective Study the effects of nm23-H1 oncoprotein on genesis and development of pancreatic adenocarcinoma and to find out the evidences providing for proof of diagnosis and prognostic evaluation.Methods Twenty one resected tumor tissue samples and 10 non-tumor pancreatic tissues were examined by immunohistochemical defector of monoclonal antibody nm23-H1 with Envision two steps method.Results (1)The positive expression (61.9%) of nm23-H1 in samples of pancreatic adenocarcinoma was higher than the expression rate in non-tumor pancreatic tissues (P<0.05).(2)The difference was very significant between the group of high differential adenocarcinoma (100%) and of low differential (33.3%) (P<0.05).Conclusion The expression of nm23-H1 can reflect the biological activity of pancreatic adenocarcinoma and benefic for prognostic evaluation.
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Key words adenocarcinoma of pancreas;nm23 gene;immunohistochemistry
nm23属转移抑制基因，从小鼠黑色素瘤K-1735细胞株中分离获得，并与恶性肿瘤转移抑制有关[1]。nm23基因的表达与多种实验性肿瘤及人类恶性肿瘤的转移能力密切相关，在低转移细胞株中的表达程度是高转移细胞株的10倍,其编码产物是二磷酸核苷酸激酶(NDPK)[2]。胰腺癌为临床常见的恶性肿瘤，对其的研究已成为当今国内外肿瘤防治研究中的重要课题。本实验运用免疫组化法对胰腺癌手术标本进行nm23基因产物即nm23-H1表达的研究，以探讨其表达与胰腺癌预后的关系。
1 材料和方法
1.1 标本 手术切除胰腺癌标本21例，其中高分化腺癌6例，中分化腺癌7例，低分化腺癌6例，粘液腺癌2例。临床分期Ⅰ期14例，Ⅱ期3例，Ⅲ、Ⅳ期共4例。男13例，女8例。年龄 30～71岁，平均54.8岁。10例非肿瘤性胰腺组织标本作为对照。常规固定石蜡包埋切片。组织病理学分级按Kloppel 标准[3]。临床分期按国际抗癌协会(UICC)1992年标准。
, http://www.100md.com
1.2 材料 鼠抗人nm23-H1单克隆抗体(Senta Crug公司提供)，Envision/HRP复合物(Dako 公司产品)。
1.3 标记方法 石蜡切片常规脱蜡水化，经甲醇-H2O2封闭内源酶；放入盛有柠檬酸盐缓冲液的容器中，置微波炉内，95℃ 10min，以修复抗原；滴加第一抗体(nm23-H1，1∶100)37℃ 60min；加入第二抗体Envision/HRP 37℃ 60min。各步骤之间用PBS洗涤5min×3次。0.04%DAB-过氧化氢液室温显色约10min，苏木素复染细胞核,脱水，透明封片，镜检。
1.4 阳性标准 免疫组化检测结果出现棕黄色染色颗粒的细胞数作为阳性计数，染色细胞数≤5%为阴性，≥6%为阳性。nm23-H1胞核或胞浆染色均为阳性表达。
, 百拇医药 1.5 统计方法 阳性率在实验组与对照组间的差异显著性检验用确切概率法，阳性率在病理分级、临床分期间的差异显著性检验用秩和检验。
2 结果
胰腺癌中nm23-H1的阳性表达率为61.9%(13/21)，阳性染色颗粒主要位于细胞浆内(见附图)；非肿瘤胰腺组织中nm23-H1阳性表达率为10%(1/10)，两者比较有显著性差异(P<0.05)。
附图 胰腺癌中nm23-H1阳性染色颗粒主要位于胞浆内
nm23-H1在不同分化程度胰腺癌的阳性表达率分别为高分化腺癌100%(6/6)、中分化腺癌71.4%(5/7)和低分化腺癌33.3%(2/6)。其中高分化腺癌与低分化腺癌组间存在显著性差异(P<0.05)。2例粘液腺癌均未见阳性表达。nm23-H1在不同临床分期中的阳性表达率分别为Ⅰ期57.1%(8/14)，Ⅱ期66.7%(2/3)和Ⅲ、Ⅳ期50.6%(2/4)。各临床分期间无显著性差异(P>0.05)。
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3 讨论
nm23是目前肿瘤转移抑制基因的最佳代表，定位于17号染色体长臂。人类细胞中存在两种nm23基因(nm23-H1和nm23-H2)，其中nm23-H1与肿瘤转移关系更为密切。单克隆抗体的免疫组化检测表明NDPK主要存在于胞浆，但少量可存在于一部分胞核。nm23NDPK能使GDP还原成GTP，激活G蛋白，调节大量蛋白介导的细胞信号传导反应，影响微管、微丝等细胞骨架蛋白活动，改变细胞粘着力和迁移能力，抑制细胞的转移。
在nm23基因与肿瘤转移及患者预后关系的研究中，发现nm23的阳性表达同恶性肿瘤的浸润和淋巴道转移呈负相关，阳性表达的肿瘤，侵袭性相对较低，淋巴道转移相对较晚。Hennessy等[4]报道乳腺癌中nm23具明显肿瘤抑制作用，且与组织分化、淋巴道转移密切相关。肝细胞癌和卵巢癌的研究结果与此相似。nm23在胰腺癌组织研究的报道不多，李淑德等[5]报道nm23在胰腺癌、慢性胰腺炎、正常胰腺组织中的表达率分别为60%、50%、22%，其中胰腺癌与正常胰腺组织之间差别显著。本研究显示胰腺癌中nm23的阳性表达率为61.9%(13/21)，高于非肿瘤胰腺组织(P<0.05)，与上述研究结果相似。本实验组高分化腺癌、中分化腺癌和低分化腺癌的表达率分别为100%(6/6)、71.4%(5/7)和33.3%(2/6)，高分化腺癌和低分化腺癌的表达存在显著性差异(P<0.05)。表明nm23-H1的表达与胰腺癌的分化程度有关,分化愈好,阳性率愈高,这同别的报道结果一致[6]。本实验结果提示nm23有助于了解胰腺癌的某些生物学行为，也可作为判断胰腺癌分化程度和预后的指标。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Steeg PS,Bevilacqua G,Koppel L,et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastasis potential.Natl Cancer Inst,1988，80(3)∶200
2，Okabe-Kado J,Kasukabe T,Honma Y,et al.Identity of a differentiation inhibiting factor for mouse myeloid leukemia cells with nm23/ nucleoside diphosphate kinase.Biochem Biophys Res Commun,1992，182(3)∶987
3，Kloppel G,Heitg FU，eds.Pancreatic pathology.Edinbargh: Churchill Livingstone.1984∶17
, http://www.100md.com
4，Hennessy C，Henry JA，FEB，et al.Expression of the antimetastatic gene nm23 in human breast cancer.An association with good prognosis.J Natl Cancer Inst,1991，83∶281
5，李淑德，许国铭，倪灿荣，等.人胰腺癌组织中 nm23基因表达.第二军医大学学报,1997，18(5)∶421
6，李玉军，姜天福，纪祥瑞，等.胰腺癌nm23基因产物NDPK的表达及其临床意义.实用癌症杂志,1998，13(1)∶9
收稿：2000-04-24, http://www.100md.com