2A型血管性血友病的临床诊断
作者：王迎春 张威 程大卫 张敬宇 阮长耿
单位：苏州医学院附属第一医院血栓与止血研究室，江苏省血液研究所，苏州，215006
关键词：2A型血管性血友病；临床特点；诊断
苏州医学院学报000714 摘要 目的 探讨2A型血管性血友病的临床特征和诊断方法。方法 用出血时间(BT)、血浆凝血酶原时间(PT)、全血凝固时间(CT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)、vWF:Ag、FⅧ：C、FⅧC：Ag、瑞斯脱霉素诱导的血小板凝集试验和血浆多聚物分析，对126例有先天性出血倾向的患者进行了研究。结果 确诊为2A型血管性血友病14例。皆有初期止血障碍的出血特点，表现为BT延长，PT、CT正常，APTT轻度延长，vWF:Ag下降，FⅧ：C、FⅧC：Ag轻度下降，瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集明显降低。血浆中缺乏大中分子量的多聚物。结论 BT、CT、PT、APTT、vWF:Ag、FⅧ：C、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验可作为血管性血友病的初筛试验，血浆多聚物分析对确诊有较大的意义。
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中图法分类号 R554.1
Clinical Diagnosis of the Type 2A Von Willebrand Disease
Wang Yingchun,Zhang Wei,Cheng Dawei,et al
(Thrombosis and Hemostasis Research Unit,The First Hospital Affiliated to Suzhou Medical College,Jiangsu Institute of Hematology,Suzhou,215006)
Abstract Objective To study the clinical character and diagnosis of type 2A von Willebrand disease (vWD).Methods One hundred and twenty six patients with congenital hemorrhage disease were studied with bleeding time (BT),prothrombin time (PT),clotting time (CT),activated partial thromboplastin time (APTT),vWF:Ag,FⅧ:C,FⅧC:Ag,ristocetin induced platelet aggregation and vWF multimers analysis in plasma.Results Fourteen patients were diagnosed as the type 2 vWD.The common characters of abnormal initial stage hemostasis existed in these patients.They presented prolonged BT,natural PT and CT,slightly prolonged APTT,reduced vWF:Ag,FⅧ:C and FⅧC:Ag,absented high and intermediate molecular weight forms of vWF multimers in plasma and markedly reduced platelet aggregation in response to ristocetin.Conclusions BT,CT,PT,APTT,vWF:Ag,FⅧ:C and platelet aggregation in response to ristocetin is considered of the initial test to diagnosed the type 2A vWD.The vWF multimes analysis has more significance to diagnose this type.
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Key words type 2A von Willebrand disease;clinical character;diagnosis
血管性血友病(vWD)是一组高度异质性的先天性、遗传性出血性疾病。是由于血浆vWF质或量的异常而致。该病的发病率为3～4/10万，是最常见的遗传性出血性疾病之一[1]。对该病国内尚无准确的统计资料。由于vWD存在高度的异质性，分类一直较混乱，1994年国际血栓与止血委员会提出了统一的分型标准[2]，把vWD分成3种类型，1型和3型是vWF质的减少。1型最多，占vWD的70%[3]。3型是重型，血浆中几乎无vWF抗原，表现为严重的粘膜出血或内脏出血，呈常染色体隐性遗传。2型vWD是由于vWF质的异常而致，根据临床表型的不同分为2A、2B、2N、2M 4种亚型。2A型血管性血友病是最常见的vWF质异常的类型，约占vWD的10%～15%[4]，且具有特征性的分子病理机制，对该亚型的研究有助于了解中国人群2A型vWD患者的分子病理机制，进一步了解vWF蛋白的精细功能阈。我们对具有先天性出血倾向的患者进行了筛选，根据新的诊断标准，对vWD进行了明确的分型和分类。
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1 资料和方法
1.1 病例的收集 根据1994年国际血栓与止血委员会vWD的诊断和分型标准，对126例具有先天性出血倾向的本院门诊患者进行筛选。
1.2 方法
1.2.1 出血时间测定(BT) 采用出血时间测定器(International Technidyne Corporation)法。
1.2.2 PT、CT、APTT测定 抽取外周静脉血，用3.8%的枸橼酸三钠按1∶9抗凝，常规方法检测。
1.2.3 vWF:Ag测定[5] 采用本室研制的ELISA药盒检测。
1.2.4 凝血因子FⅧ活性测定(FⅧ：C) 采用一期法检测。
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1.2.5 FⅧ C：Ag测定 采用Stago公司测定试剂盒，按操作说明书进行。
1.2.6 血小板聚集试验 采用比浊法检测血小板聚集，在TYXN-96多功能智能血液凝集仪(上海通用机电技术研究所)上进行。抽取4.5ml外周血，以0.13mol/L的枸橼酸三钠抗凝，1000r/min离心10min，取上层PRP，记数血小板(100～200)×109/L，在比浊管中加入200μl PRP和搅拌子，温育3min后加入诱导剂，诱导剂包括2μmol/L的ADP和1.25g/L的瑞斯脱霉素，在血凝仪上检测血小板聚集率。
1.2.7 抗体的125Ⅰ标记 采用氯胺T法。按下列顺序依次加入抗体SZ-29 10～30μl (约20μg)，0.1mol/L、pH 7.5的PB 10μl，125I 18.5MBq，氯胺T 10μl (5mg/ml in 0.01mol/L、pH8.0的PB中)；混匀后室温放置1min，加入偏重亚硫酸钠20μl终止反应；室温放置1min，加入0.5% BSA 100μl,反应液过Sephadex G-25柱，用0.01mol/L、pH7.4的PBS洗脱，收集蛋白峰，10%三氯醋酸沉淀法测定标记率。
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1.2.8 血浆多聚物分析 参照Zaverio[6]的方法，采用非连续缓冲体系的琼脂糖凝胶，分离胶为1.5%SDS-琼脂糖，缓冲体系为：0.375mol/L Tris,0.1% SDS，pH8.8。积层胶为0.8% SDS-琼脂糖凝胶，缓冲体系为：0.125mol/L Tris,0.1% SDS，pH6.8。取109cm×92cm的gelbond膜(FMC公司)，固定于玻璃支持物上，电泳缓冲液(0.384mol/L甘氨酸，0.1%SDS，pH8.0)。0.13mol/L枸橼酸三钠抗凝的血浆标本与稀释缓冲液(0.001mol/L Tris,0.1mmol EDTA-Na2,2% SDS,0.002%溴酚兰)按1∶5稀释。上样前56℃温育30min。每个加样孔(10mm×3.6mm×1.3mm)上样40μl，以25mA恒流40min，使指示剂出孔，然后以60V恒压电泳16h。电泳结束后，予10%乙酸、25%异丙醇固定4h，等时漂洗。125I-SZ-29(1，110，1000cpm/ml)25℃温育过夜，0.15mmol/L NaCl，0.1% Triton-100等时漂洗，于Bio-Rad凝胶干燥仪干燥，放射自显影。
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2 结果
126例具有先天性出血倾向的患者中，符合2A型vWD临床表型者14例，其中男6例，女8例。年龄5～43岁。主要表现为鼻衄(100%)、牙龈出血(80%)和外伤后出血不止(42.85%)。出血时间>20min占20%，16～20min占33.3%，10～15min占46.7%。
2.1 部分出凝血检查结果 APTT 49.72±10.04s，CT 7.32±1.24s，PT 12.6±2.68s，vWF:Ag (39.74±10.4)%,FⅧ：C (32.67±12.3)%，FⅧC：Ag (36.28±16.7)%，瑞斯脱霉素(1.25g/L)诱导血小板聚集率(16.07±9.01)%，ADP(2μmol/L)诱导血小板聚集率(62.28±6.78)%。
APTT值均较正常对照延长>10s，CT、PT正常，vWF:Ag、FⅧ：C、FⅧC：Ag降低。14例患者1.25g/L瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集率明显降低，2μmol/L ADP诱导的血小板聚集率正常。
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2.2 血浆多聚物分析[7] 正常血浆中的vWF以多聚体的形式存在，分子量为500～10000kd[9]。2A型血管性血友病典型的特征是血浆中缺乏大、中分子量的多聚物。14例 2A型vWD患者血浆多聚物分析，大中分子量的多聚物均消失(见附图)。
附图 血浆vWF多聚物分析(N，正常人血浆)
3 讨论
vWF在初期止血过程中起着重要的作用，血管损伤后，vWF与内皮下胶原相结合，同时与血小板上的糖蛋白受体结合，导致血小板粘附，聚集活化。此外，vWF是FⅧ的载体，起着稳定FⅧ的作用。vWD是由于血浆中vWF的质或量的缺陷而致。vWD存在高度的异质性。1994年国际血栓与止血委员会根据vWD的临床表现、病理生理、分子致病机制及治疗特点，对vWD提出了新的诊断和分型标准。2A型vWD包括以往分类的ⅡA、ⅡC、ⅡD、ⅡE、ⅡF、ⅡG、ⅡH等。大部分呈常染色体显性遗传，主要临床表现为出血时间延长，vWF：Ag、FⅧ：C下降，vWF与血小板之间的相互作用降低，瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集率降低，瑞斯脱霉素辅因子试验降低，血浆中缺乏大中分子量的多聚物。基因缺陷主要位于28号外显子编码vWF的A2区域[11]。
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我们从126例有先天性出血倾向的患者中筛选出14例具有2A型vWD临床表型者，均有初期止血障碍的出血特点，主要表现为鼻衄(100%)、牙龈出血(80%)和外伤后出血不止(42.85%)。女性月经量增多者占女性患者的62.5%。2例就诊时有轻度的缺铁性贫血。14例均未发现肌肉、关节及内脏出血。因此，对自幼有粘膜出血，成年后月经量明显增多伴有缺铁性贫血的女性要注意鉴别诊断。
这组患者表现为，PT、CT正常，APTT轻度延长，vWF：Ag下降，FⅧ：C、FⅧC：Ag轻度下降，反映vWF与血小板相互作用的瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验明显降低。符合vWD的实验诊断。我们认为，BT、CT、PT、APTT、vWF:Ag、FⅧ：C、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验可作为初筛试验，初筛试验符合vWD者进一步作血浆多聚物分析，从而确定分型。
多聚物分析对确诊有较大的意义，1型vWD血浆中vWF:Ag量减少，但是血浆中多聚物形态正常。3型vWD血浆多聚物完全消失，是vWD的重型。2A型vWD血浆缺乏大中分子量的多聚物；2B型vWD血浆中缺乏大分子量的多聚物，vWF与血小板相互作用亢进，在低浓度瑞斯脱霉素诱导下，血小板聚集增强；2N型vWD血浆多聚物正常，vWF与FⅧ的结合试验明显降低。2M型vWD的血浆多聚物正常，vWF与GpIb的结合功能下降。通过多聚物分析和瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验或瑞斯脱霉素辅因子试验能区分2型vWD的亚型。
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2A型vWD的基因突变大多丛集在vWF基因28号外显子，28号外显子编码vWF重要功能阈A1和A2区。对2A型vWD进行正确的诊断和分型有助于进一步研究其分子病理机制，从而对相关家系进行直接基因诊断，并利用直接基因诊断的方法进行遗传咨询和产前诊断。
参考文献
1，Rodeghiero F,Castaman G,Dini E.Epidemiological investigation of the prevalence of von Willebrand disease.Blood,1987,69∶451
2，Sadler JE,Grainnick HR.Commentary A new classfication for von Willebrand disease.Blood,1994,84∶676
3，Holmberg L,Nilsson LM.von Willebrand's disease.Eur J Haematol,1992,48∶127
, http://www.100md.com
4，Ginsburg D,Bowie EJW.Molecular genetics of von Willebrand disease.Blood,1992,79∶2507
5，奚晓东，阮长耿，李佩霞，等.抗血管性假血友病因子单克隆抗体ELISA的建立及其临床应用.中华医学检验杂志，1988，11(5)∶272
6，Zaverio M,Ruggeri,Theodore S.The complex multimeric composition of factor Ⅷ/von Willebrand factor.Blood,1981,(57)∶1140
7，Tianik K,Kumar S,Takio K,et al.Amino acid sequence of human von Willebrand factor.Biochem,1986,25∶3137
, 百拇医药
8，Mohri H,Fujimura Y,Shima M,et al.Structure of the von Willebrand factor domain interacting with glycoprotein Ib.J Biol Chem,1988,263∶17901
9，Beacham DA,Wise RJ,Turei SM,et al.Selective inactivation of the Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS) binding site in von Willebrand factor by site directed mutagenesis.J Biol Chem,1992,267∶3409
10，Vlot AJ,Koppelman SJ,Meijers JCM,et al.Kinetics of factor FⅧ von Willebrand factor association.Blood,1996,87∶1809
11，Ginsburg D,Sadler JE.Von Willebrand disease:A database of point mutations,insertions and deletions.Thromb Haemost,1993,69∶177
收稿：2000-03-08, 百拇医药
单位：苏州医学院附属第一医院血栓与止血研究室，江苏省血液研究所，苏州，215006
关键词：2A型血管性血友病；临床特点；诊断
苏州医学院学报000714 摘要 目的 探讨2A型血管性血友病的临床特征和诊断方法。方法 用出血时间(BT)、血浆凝血酶原时间(PT)、全血凝固时间(CT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)、vWF:Ag、FⅧ：C、FⅧC：Ag、瑞斯脱霉素诱导的血小板凝集试验和血浆多聚物分析，对126例有先天性出血倾向的患者进行了研究。结果 确诊为2A型血管性血友病14例。皆有初期止血障碍的出血特点，表现为BT延长，PT、CT正常，APTT轻度延长，vWF:Ag下降，FⅧ：C、FⅧC：Ag轻度下降，瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集明显降低。血浆中缺乏大中分子量的多聚物。结论 BT、CT、PT、APTT、vWF:Ag、FⅧ：C、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验可作为血管性血友病的初筛试验，血浆多聚物分析对确诊有较大的意义。
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中图法分类号 R554.1
Clinical Diagnosis of the Type 2A Von Willebrand Disease
Wang Yingchun,Zhang Wei,Cheng Dawei,et al
(Thrombosis and Hemostasis Research Unit,The First Hospital Affiliated to Suzhou Medical College,Jiangsu Institute of Hematology,Suzhou,215006)
Abstract Objective To study the clinical character and diagnosis of type 2A von Willebrand disease (vWD).Methods One hundred and twenty six patients with congenital hemorrhage disease were studied with bleeding time (BT),prothrombin time (PT),clotting time (CT),activated partial thromboplastin time (APTT),vWF:Ag,FⅧ:C,FⅧC:Ag,ristocetin induced platelet aggregation and vWF multimers analysis in plasma.Results Fourteen patients were diagnosed as the type 2 vWD.The common characters of abnormal initial stage hemostasis existed in these patients.They presented prolonged BT,natural PT and CT,slightly prolonged APTT,reduced vWF:Ag,FⅧ:C and FⅧC:Ag,absented high and intermediate molecular weight forms of vWF multimers in plasma and markedly reduced platelet aggregation in response to ristocetin.Conclusions BT,CT,PT,APTT,vWF:Ag,FⅧ:C and platelet aggregation in response to ristocetin is considered of the initial test to diagnosed the type 2A vWD.The vWF multimes analysis has more significance to diagnose this type.
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Key words type 2A von Willebrand disease;clinical character;diagnosis
血管性血友病(vWD)是一组高度异质性的先天性、遗传性出血性疾病。是由于血浆vWF质或量的异常而致。该病的发病率为3～4/10万，是最常见的遗传性出血性疾病之一[1]。对该病国内尚无准确的统计资料。由于vWD存在高度的异质性，分类一直较混乱，1994年国际血栓与止血委员会提出了统一的分型标准[2]，把vWD分成3种类型，1型和3型是vWF质的减少。1型最多，占vWD的70%[3]。3型是重型，血浆中几乎无vWF抗原，表现为严重的粘膜出血或内脏出血，呈常染色体隐性遗传。2型vWD是由于vWF质的异常而致，根据临床表型的不同分为2A、2B、2N、2M 4种亚型。2A型血管性血友病是最常见的vWF质异常的类型，约占vWD的10%～15%[4]，且具有特征性的分子病理机制，对该亚型的研究有助于了解中国人群2A型vWD患者的分子病理机制，进一步了解vWF蛋白的精细功能阈。我们对具有先天性出血倾向的患者进行了筛选，根据新的诊断标准，对vWD进行了明确的分型和分类。
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1 资料和方法
1.1 病例的收集 根据1994年国际血栓与止血委员会vWD的诊断和分型标准，对126例具有先天性出血倾向的本院门诊患者进行筛选。
1.2 方法
1.2.1 出血时间测定(BT) 采用出血时间测定器(International Technidyne Corporation)法。
1.2.2 PT、CT、APTT测定 抽取外周静脉血，用3.8%的枸橼酸三钠按1∶9抗凝，常规方法检测。
1.2.3 vWF:Ag测定[5] 采用本室研制的ELISA药盒检测。
1.2.4 凝血因子FⅧ活性测定(FⅧ：C) 采用一期法检测。
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1.2.5 FⅧ C：Ag测定 采用Stago公司测定试剂盒，按操作说明书进行。
1.2.6 血小板聚集试验 采用比浊法检测血小板聚集，在TYXN-96多功能智能血液凝集仪(上海通用机电技术研究所)上进行。抽取4.5ml外周血，以0.13mol/L的枸橼酸三钠抗凝，1000r/min离心10min，取上层PRP，记数血小板(100～200)×109/L，在比浊管中加入200μl PRP和搅拌子，温育3min后加入诱导剂，诱导剂包括2μmol/L的ADP和1.25g/L的瑞斯脱霉素，在血凝仪上检测血小板聚集率。
1.2.7 抗体的125Ⅰ标记 采用氯胺T法。按下列顺序依次加入抗体SZ-29 10～30μl (约20μg)，0.1mol/L、pH 7.5的PB 10μl，125I 18.5MBq，氯胺T 10μl (5mg/ml in 0.01mol/L、pH8.0的PB中)；混匀后室温放置1min，加入偏重亚硫酸钠20μl终止反应；室温放置1min，加入0.5% BSA 100μl,反应液过Sephadex G-25柱，用0.01mol/L、pH7.4的PBS洗脱，收集蛋白峰，10%三氯醋酸沉淀法测定标记率。
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1.2.8 血浆多聚物分析 参照Zaverio[6]的方法，采用非连续缓冲体系的琼脂糖凝胶，分离胶为1.5%SDS-琼脂糖，缓冲体系为：0.375mol/L Tris,0.1% SDS，pH8.8。积层胶为0.8% SDS-琼脂糖凝胶，缓冲体系为：0.125mol/L Tris,0.1% SDS，pH6.8。取109cm×92cm的gelbond膜(FMC公司)，固定于玻璃支持物上，电泳缓冲液(0.384mol/L甘氨酸，0.1%SDS，pH8.0)。0.13mol/L枸橼酸三钠抗凝的血浆标本与稀释缓冲液(0.001mol/L Tris,0.1mmol EDTA-Na2,2% SDS,0.002%溴酚兰)按1∶5稀释。上样前56℃温育30min。每个加样孔(10mm×3.6mm×1.3mm)上样40μl，以25mA恒流40min，使指示剂出孔，然后以60V恒压电泳16h。电泳结束后，予10%乙酸、25%异丙醇固定4h，等时漂洗。125I-SZ-29(1，110，1000cpm/ml)25℃温育过夜，0.15mmol/L NaCl，0.1% Triton-100等时漂洗，于Bio-Rad凝胶干燥仪干燥，放射自显影。
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2 结果
126例具有先天性出血倾向的患者中，符合2A型vWD临床表型者14例，其中男6例，女8例。年龄5～43岁。主要表现为鼻衄(100%)、牙龈出血(80%)和外伤后出血不止(42.85%)。出血时间>20min占20%，16～20min占33.3%，10～15min占46.7%。
2.1 部分出凝血检查结果 APTT 49.72±10.04s，CT 7.32±1.24s，PT 12.6±2.68s，vWF:Ag (39.74±10.4)%,FⅧ：C (32.67±12.3)%，FⅧC：Ag (36.28±16.7)%，瑞斯脱霉素(1.25g/L)诱导血小板聚集率(16.07±9.01)%，ADP(2μmol/L)诱导血小板聚集率(62.28±6.78)%。
APTT值均较正常对照延长>10s，CT、PT正常，vWF:Ag、FⅧ：C、FⅧC：Ag降低。14例患者1.25g/L瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集率明显降低，2μmol/L ADP诱导的血小板聚集率正常。
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2.2 血浆多聚物分析[7] 正常血浆中的vWF以多聚体的形式存在，分子量为500～10000kd[9]。2A型血管性血友病典型的特征是血浆中缺乏大、中分子量的多聚物。14例 2A型vWD患者血浆多聚物分析，大中分子量的多聚物均消失(见附图)。
附图 血浆vWF多聚物分析(N，正常人血浆)
3 讨论
vWF在初期止血过程中起着重要的作用，血管损伤后，vWF与内皮下胶原相结合，同时与血小板上的糖蛋白受体结合，导致血小板粘附，聚集活化。此外，vWF是FⅧ的载体，起着稳定FⅧ的作用。vWD是由于血浆中vWF的质或量的缺陷而致。vWD存在高度的异质性。1994年国际血栓与止血委员会根据vWD的临床表现、病理生理、分子致病机制及治疗特点，对vWD提出了新的诊断和分型标准。2A型vWD包括以往分类的ⅡA、ⅡC、ⅡD、ⅡE、ⅡF、ⅡG、ⅡH等。大部分呈常染色体显性遗传，主要临床表现为出血时间延长，vWF：Ag、FⅧ：C下降，vWF与血小板之间的相互作用降低，瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集率降低，瑞斯脱霉素辅因子试验降低，血浆中缺乏大中分子量的多聚物。基因缺陷主要位于28号外显子编码vWF的A2区域[11]。
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我们从126例有先天性出血倾向的患者中筛选出14例具有2A型vWD临床表型者，均有初期止血障碍的出血特点，主要表现为鼻衄(100%)、牙龈出血(80%)和外伤后出血不止(42.85%)。女性月经量增多者占女性患者的62.5%。2例就诊时有轻度的缺铁性贫血。14例均未发现肌肉、关节及内脏出血。因此，对自幼有粘膜出血，成年后月经量明显增多伴有缺铁性贫血的女性要注意鉴别诊断。
这组患者表现为，PT、CT正常，APTT轻度延长，vWF：Ag下降，FⅧ：C、FⅧC：Ag轻度下降，反映vWF与血小板相互作用的瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验明显降低。符合vWD的实验诊断。我们认为，BT、CT、PT、APTT、vWF:Ag、FⅧ：C、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验可作为初筛试验，初筛试验符合vWD者进一步作血浆多聚物分析，从而确定分型。
多聚物分析对确诊有较大的意义，1型vWD血浆中vWF:Ag量减少，但是血浆中多聚物形态正常。3型vWD血浆多聚物完全消失，是vWD的重型。2A型vWD血浆缺乏大中分子量的多聚物；2B型vWD血浆中缺乏大分子量的多聚物，vWF与血小板相互作用亢进，在低浓度瑞斯脱霉素诱导下，血小板聚集增强；2N型vWD血浆多聚物正常，vWF与FⅧ的结合试验明显降低。2M型vWD的血浆多聚物正常，vWF与GpIb的结合功能下降。通过多聚物分析和瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验或瑞斯脱霉素辅因子试验能区分2型vWD的亚型。
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2A型vWD的基因突变大多丛集在vWF基因28号外显子，28号外显子编码vWF重要功能阈A1和A2区。对2A型vWD进行正确的诊断和分型有助于进一步研究其分子病理机制，从而对相关家系进行直接基因诊断，并利用直接基因诊断的方法进行遗传咨询和产前诊断。
参考文献
1，Rodeghiero F,Castaman G,Dini E.Epidemiological investigation of the prevalence of von Willebrand disease.Blood,1987,69∶451
2，Sadler JE,Grainnick HR.Commentary A new classfication for von Willebrand disease.Blood,1994,84∶676
3，Holmberg L,Nilsson LM.von Willebrand's disease.Eur J Haematol,1992,48∶127
, http://www.100md.com
4，Ginsburg D,Bowie EJW.Molecular genetics of von Willebrand disease.Blood,1992,79∶2507
5，奚晓东，阮长耿，李佩霞，等.抗血管性假血友病因子单克隆抗体ELISA的建立及其临床应用.中华医学检验杂志，1988，11(5)∶272
6，Zaverio M,Ruggeri,Theodore S.The complex multimeric composition of factor Ⅷ/von Willebrand factor.Blood,1981,(57)∶1140
7，Tianik K,Kumar S,Takio K,et al.Amino acid sequence of human von Willebrand factor.Biochem,1986,25∶3137
, 百拇医药
8，Mohri H,Fujimura Y,Shima M,et al.Structure of the von Willebrand factor domain interacting with glycoprotein Ib.J Biol Chem,1988,263∶17901
9，Beacham DA,Wise RJ,Turei SM,et al.Selective inactivation of the Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS) binding site in von Willebrand factor by site directed mutagenesis.J Biol Chem,1992,267∶3409
10，Vlot AJ,Koppelman SJ,Meijers JCM,et al.Kinetics of factor FⅧ von Willebrand factor association.Blood,1996,87∶1809
11，Ginsburg D,Sadler JE.Von Willebrand disease:A database of point mutations,insertions and deletions.Thromb Haemost,1993,69∶177
收稿：2000-03-08, 百拇医药