卡介苗接种后结核菌素纯蛋白衍生物试验与T淋巴细胞亚群的关系
作者：林丽星 金玉 尤苓
单位：林丽星(730000 兰州医学院第一附属医院儿科)；金玉(730000 兰州医学院第一附属医院儿科)；尤苓(730000 兰州医学院第一附属医院儿科)
关键词：
中华儿科杂志000812 近年来，某些地区的结核病有上升趋势，这对小儿的健康成长造成极大的威胁。因此卡介苗(bacille calmette-guerin, BCG)的预防接种工作显得非常重要。通过多年来临床观察发现，部分婴儿接种BCG后结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative, PPD)仍为阴性，为了解BCG接种后PPD试验未阳转与细胞免疫的关系，我们对179例婴儿做了T淋巴细胞(简称T细胞)亚群测定，并进行了对照观察。
对象和方法
, 百拇医药
对象:1997年8月～1999年5月，对出生后1周以内的新生儿接种BCG，于3个月后在儿保门诊行PPD试验，共检测3 113例，PPD阳性2 438例。随机选择179例，其中PPD阴性者114例作为观察组，PPD阳性65例为对照组。两组间年龄、体重、喂养方式及性别差异均无显著性。均为健康儿，男100例，女79例，足月儿148例，早产儿31例。
方法：(1)接种方法：BCG接种两组采用同一批制剂，剂量为0.05 ml(0.05 mg)，于左肩皮内注射。PPD由兰州生物制品研究所提供，PPD试验在小儿左前臂内侧中下三分之一处皮内注射，每人用量0.1 ml(5 IU)，72 h观察局部硬结，并记录硬结平均直径。判断标准：PPD试验阳性：局部红肿，硬结平均直径≥5 mm。PPD试验阴性：局部无红肿或红肿硬结平均直径<5 mm[1]。(2)T细胞亚群测定：T细胞亚群试剂盒由北京邦定生物医学公司提供，采用单克隆抗体(简称单抗)，碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)法检测，CD3、CD4、CD8分别是总T、T辅助/诱导细胞、T抑制细胞/细胞毒细胞作用指标。取静脉血1.5 ml加入肝素处理的试管中摇匀，取分离好的单个核细胞沉淀少许制成涂片，然后滴加固定液，1～2 min后PBS淋洗，依次加入T亚群单抗、羊抗鼠二抗、APAAP复合物，置室温30 min反应，然后加碱性磷酸酶底物显色，苏木素复染。测定工作由我院血液实验室专人操作。(3)统计学处理：T细胞亚群CD3、CD4、CD8及CD4/CD8数据用均数±标准差(±s)表示，两组间的比较采用t检验。
, 百拇医药
结果
PPD试验阳转和未阳转婴儿T细胞亚群改变及对照观察结果见表1。结果显示，观察组CD3、CD4均值均低于对照组，CD8均值高于对照组，因标准差数值较大，故两组间比较差异无显著性，但CD4/CD8比值明显低于对照组，经统计学处理，两组间差异有显著性(P<0.05)。
表1 179例婴儿T细胞亚群的改变(±s) 组别
例数
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
观察组
, 百拇医药
114
60±11
35±9
27±7
1.4±0.4
对照组
65
62±11
37±9
25±6
1.5±0.5
t值
1.288 8
, 百拇医药
1.317 1
1.598 9
2.333 9
P值
>0.05
>0.05
>0.05
<0.05
讨论
世界各地广泛应用BCG预防结核病已有半个多世纪的历史，它的主要作用是通过对T细胞的致敏，产生细胞介导的传染免疫。致敏T细胞在抗原的特异刺激下，分化、增殖并合成，释放出一系列淋巴因子，由于淋巴因子的综合协调作用，从而发挥细胞免疫作用。通过近两年儿保门诊对婴儿PPD检测，发现PPD阳转率仍较低，仅78.31%(2 438/3 113)。我们曾对BCG接种后结核菌素试验未阳转的婴儿测查了E-玫瑰花结试验，结果E-玫瑰花环形成率有不同程度的降低[2]。为进一步探讨PPD反应与细胞免疫的关系，我们采用单抗APAAP法测定T细胞亚群，以了解人体细胞免疫功能，此法比传统的T细胞脂酶、E-玫瑰花结更具有高度特异性、灵敏性、阳性结果可靠等优点。
, http://www.100md.com
T细胞是机体免疫系统内功能最重要的一大细胞群，在正常体内T细胞亚群相互作用，维持着机体正常的免疫功能。CD4/CD8比值已成为监测人体细胞免疫功能、反应机体免疫状态的重要指标。本研究结果发现，PPD未阳转者CD4/CD8比值明显低于对照组(PPD阳性组)(P<0.05)。考虑BCG接种后PPD试验未阳转与婴儿细胞免疫功能低下有一定的关系，为此我们对68例PPD试验未阳转并伴细胞免疫功能低下者，用卡介苗提取液(唯尔本)行免疫刺激治疗，结果PPD阳转率提高到84%。但仍有部分婴儿PPD未阳转，且细胞免疫功能正常，故PPD试验也不能完全反映免疫功能。本研究还发现，早产儿T细胞亚群各项指标均低于足月儿，且PPD阴性率高(77%)，这与早产儿发育不成熟、特异性和非特异免疫功能均低下有关。关于结核菌素试验阴性率高的问题，国外学者认为是由于非典型或环境中的分枝杆菌的存在引起交叉反应而致[3]。国内报道BCG初种时间与PPD反应有关[4]，故PPD试验未阳转与许多因素有关，还有待进一步探讨。为提高PPD阳转率，对细胞免疫功能低下的婴儿有必要进行免疫刺激疗法，并建议推荐BCG接种时间，初次接种最好在出生后3个月左右，此时小儿免疫功能已逐渐发育成熟。
, http://www.100md.com
参考文献
1，左启华，主编.儿科学.北京：人民卫生出版社，1993.427-430.
2，尤苓，林丽星.卡介苗接种与细胞免疫的关系.实用儿科临床杂志，1995，10:97-98.
3，Vijayalakshmi V,Debi PS, Murthy KJR, et al.Cell mediated immune responses in BCG vaccinated children.Indian Pediatr ,1993,30:899-903.
4，史宝俊. 卡介苗初种时间选择对新生儿免疫效果的影响.中华儿童保健杂志，1997,5:205.
(收稿日期：1999-08-02), 百拇医药
单位：林丽星(730000 兰州医学院第一附属医院儿科)；金玉(730000 兰州医学院第一附属医院儿科)；尤苓(730000 兰州医学院第一附属医院儿科)
关键词：
中华儿科杂志000812 近年来，某些地区的结核病有上升趋势，这对小儿的健康成长造成极大的威胁。因此卡介苗(bacille calmette-guerin, BCG)的预防接种工作显得非常重要。通过多年来临床观察发现，部分婴儿接种BCG后结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative, PPD)仍为阴性，为了解BCG接种后PPD试验未阳转与细胞免疫的关系，我们对179例婴儿做了T淋巴细胞(简称T细胞)亚群测定，并进行了对照观察。
对象和方法
, 百拇医药
对象:1997年8月～1999年5月，对出生后1周以内的新生儿接种BCG，于3个月后在儿保门诊行PPD试验，共检测3 113例，PPD阳性2 438例。随机选择179例，其中PPD阴性者114例作为观察组，PPD阳性65例为对照组。两组间年龄、体重、喂养方式及性别差异均无显著性。均为健康儿，男100例，女79例，足月儿148例，早产儿31例。
方法：(1)接种方法：BCG接种两组采用同一批制剂，剂量为0.05 ml(0.05 mg)，于左肩皮内注射。PPD由兰州生物制品研究所提供，PPD试验在小儿左前臂内侧中下三分之一处皮内注射，每人用量0.1 ml(5 IU)，72 h观察局部硬结，并记录硬结平均直径。判断标准：PPD试验阳性：局部红肿，硬结平均直径≥5 mm。PPD试验阴性：局部无红肿或红肿硬结平均直径<5 mm[1]。(2)T细胞亚群测定：T细胞亚群试剂盒由北京邦定生物医学公司提供，采用单克隆抗体(简称单抗)，碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)法检测，CD3、CD4、CD8分别是总T、T辅助/诱导细胞、T抑制细胞/细胞毒细胞作用指标。取静脉血1.5 ml加入肝素处理的试管中摇匀，取分离好的单个核细胞沉淀少许制成涂片，然后滴加固定液，1～2 min后PBS淋洗，依次加入T亚群单抗、羊抗鼠二抗、APAAP复合物，置室温30 min反应，然后加碱性磷酸酶底物显色，苏木素复染。测定工作由我院血液实验室专人操作。(3)统计学处理：T细胞亚群CD3、CD4、CD8及CD4/CD8数据用均数±标准差(±s)表示，两组间的比较采用t检验。
, 百拇医药
结果
PPD试验阳转和未阳转婴儿T细胞亚群改变及对照观察结果见表1。结果显示，观察组CD3、CD4均值均低于对照组，CD8均值高于对照组，因标准差数值较大，故两组间比较差异无显著性，但CD4/CD8比值明显低于对照组，经统计学处理，两组间差异有显著性(P<0.05)。
表1 179例婴儿T细胞亚群的改变(±s) 组别
例数
CD3(%)
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
观察组
, 百拇医药
114
60±11
35±9
27±7
1.4±0.4
对照组
65
62±11
37±9
25±6
1.5±0.5
t值
1.288 8
, 百拇医药
1.317 1
1.598 9
2.333 9
P值
>0.05
>0.05
>0.05
<0.05
讨论
世界各地广泛应用BCG预防结核病已有半个多世纪的历史，它的主要作用是通过对T细胞的致敏，产生细胞介导的传染免疫。致敏T细胞在抗原的特异刺激下，分化、增殖并合成，释放出一系列淋巴因子，由于淋巴因子的综合协调作用，从而发挥细胞免疫作用。通过近两年儿保门诊对婴儿PPD检测，发现PPD阳转率仍较低，仅78.31%(2 438/3 113)。我们曾对BCG接种后结核菌素试验未阳转的婴儿测查了E-玫瑰花结试验，结果E-玫瑰花环形成率有不同程度的降低[2]。为进一步探讨PPD反应与细胞免疫的关系，我们采用单抗APAAP法测定T细胞亚群，以了解人体细胞免疫功能，此法比传统的T细胞脂酶、E-玫瑰花结更具有高度特异性、灵敏性、阳性结果可靠等优点。
, http://www.100md.com
T细胞是机体免疫系统内功能最重要的一大细胞群，在正常体内T细胞亚群相互作用，维持着机体正常的免疫功能。CD4/CD8比值已成为监测人体细胞免疫功能、反应机体免疫状态的重要指标。本研究结果发现，PPD未阳转者CD4/CD8比值明显低于对照组(PPD阳性组)(P<0.05)。考虑BCG接种后PPD试验未阳转与婴儿细胞免疫功能低下有一定的关系，为此我们对68例PPD试验未阳转并伴细胞免疫功能低下者，用卡介苗提取液(唯尔本)行免疫刺激治疗，结果PPD阳转率提高到84%。但仍有部分婴儿PPD未阳转，且细胞免疫功能正常，故PPD试验也不能完全反映免疫功能。本研究还发现，早产儿T细胞亚群各项指标均低于足月儿，且PPD阴性率高(77%)，这与早产儿发育不成熟、特异性和非特异免疫功能均低下有关。关于结核菌素试验阴性率高的问题，国外学者认为是由于非典型或环境中的分枝杆菌的存在引起交叉反应而致[3]。国内报道BCG初种时间与PPD反应有关[4]，故PPD试验未阳转与许多因素有关，还有待进一步探讨。为提高PPD阳转率，对细胞免疫功能低下的婴儿有必要进行免疫刺激疗法，并建议推荐BCG接种时间，初次接种最好在出生后3个月左右，此时小儿免疫功能已逐渐发育成熟。
, http://www.100md.com
参考文献
1，左启华，主编.儿科学.北京：人民卫生出版社，1993.427-430.
2，尤苓，林丽星.卡介苗接种与细胞免疫的关系.实用儿科临床杂志，1995，10:97-98.
3，Vijayalakshmi V,Debi PS, Murthy KJR, et al.Cell mediated immune responses in BCG vaccinated children.Indian Pediatr ,1993,30:899-903.
4，史宝俊. 卡介苗初种时间选择对新生儿免疫效果的影响.中华儿童保健杂志，1997,5:205.
(收稿日期：1999-08-02), 百拇医药