载脂蛋白E基因型与脑叶出血的关系
作者：程庆璋 董万利
单位：程庆璋(苏州市第四人民医院神经内科，苏州，215001)；董万利(苏州医学院附属一院神经内科)
关键词：载脂蛋白(apoE)；基因型；脑叶出血
苏州医学院学报000920 摘要 目的 探讨载脂蛋白E(apoE)基因型与脑叶出血的关系。方法 用PCR技术检测26例脑叶出血apoE的基因型，并与30名健康同年龄对照组和30例基底节脑出血组比较。结果 脑叶出血组ε4等位基因频率明显高于健康对照组(P<0.05)，且脑叶出血组E3/3基因型有下降趋势；而基底节出血组apoE基因型与ε4等位基因频率和健康对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论 ε4等位基因有较高的脑叶出血风险，而与非脑叶出血无关。
中图法分类号 R743.33
, 百拇医药
The Relationship between Apolipoprotein E Genotype and Lobar Intracerebral Hemorrhage
Cheng Qingzhang, Dong Wanli1
(Dept.Of Neurology,Suzhou 4th Hospital,Suzhou,215001;Dept.Of Neurology,The First Hospital Affiliated to Suzhou Medical College)
Abstract Objective To explore the relationship between apolipoprotein E (apoE) genotype and lobar intracerebral hemorrhage (ICH).Method The polymerase chain reaction (PCR) technique was used to detect apoE genotype in 26 patients with lobar ICH,30 matched controls and 30 matched patients with basal ganglia ICH.Results The frequency of allele epsilon 4 (ε4) was 0.214 in the lobar ICH group,which was significantly higher than that of 0.08 in the normal control group (P<0.05).There was a tendency to a lower frequency of genotype E3/3 in the lobar ICH group.We found no significant diffrences in apoE genotype and the frequency of ε4 allele between basal ganglia ICH group and control group.Conclusion It suggests that allele ε4 indicates a higher risk of lobar ICH and has no relationship with non lobar ICH.
, http://www.100md.com
Key words apolipoprotein E；genotype；lobar intracerebral hemorrhage
载脂蛋白E(apoE)为34kd糖基化蛋白质，是迄今为止唯一一种与神经系统关系密切的载脂蛋白，在神经系统疾病中起着重要的生物学作用。人类存在由3个等显位基因ε2、ε3、ε4编码的apoE基因型E2、E3、E4，区别仅为一个氨基酸的变化[1]。证据表明，apoE的遗传多态性(特别是ε4等位基因)与动脉硬化、心脑血管病、Alzheimer's病密切相关[2，3]。ApoE与脑血管淀粉样变(CAA)有关，而CAA是构成脑叶出血的一个常见原因。目前apoE基因型与脑叶出血相关性尚存争议[4]。本文采用PCR技术研究脑叶出血患者apoE的基因型，旨在探讨其在脑叶出血中的意义。
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1 材料和方法
1.1 研究对象
1.1.1 脑叶出血组 本院和苏医附一院神经内科住院的脑叶出血患者分别为18例和8例，共26例，其中男19例，女7例，平均年龄68.1±9.4岁。皆符合第二届全国脑血管会议的诊断标准[5]，均经CT或MRI证实并排除肿瘤及出血性疾病。其中额叶出血6例，顶叶出血9例，枕叶出血4例，颞叶出血7例。有或曾经有高血压病史14例。
1.1.2 健康对照组 选择>60岁体检健康者30名，男20名，女10名，平均年龄65.9±4.8岁，均无高血压、脑血管病及内分泌疾病史。1.1.3 基底节出血组 选自本院高血压动脉硬化性脑出血中最常见类型基底节区脑出血住院患者30例，男16例，女14例，平均年龄59.4±6.1岁。皆符合第二届全国脑血管会议的诊断标准，均经CT或MRI证实。其中壳核出血16例，丘脑出血9例，内囊出血5例。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 apoE基因多态性检测 参照Richard[8]方法，抗凝血离心后移取白细胞层，采用酚氯仿乙醇沉淀法提取基因组DNA，PCR扩增含apoE两个多态性位点DNA片段(292bp)。引物序列为：P15-AACAACTGACCCCGGTGGCG-3’和P25’-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3’。扩增产物用限制性HhaI酶切，10%非变性聚丙酰胺凝胶电泳分离酶切产物，与标准分子量参照物对照，在紫外灯下观察条带，判定apoE基因型。
1.2.2 统计方法 组间基因型频率和等位基因频率的差异用x2检验。
1.3 结果 脑叶出血组和健康对照组、基底节出血组apoE基因型频率和等位基因频率比较见附表。
, http://www.100md.com 附表 apoE基因型频率与等位基因频率(%) 组别
n
AopE基因型频率
apoE等位基因频率
E2/2
E2/3
E2/4
E3/3
E3/4
E4/4
ε2
ε3
, 百拇医药
ε4
脑叶出血组
26
0.035
0.107
0.075
0.535*
0.142
0.107
0.125
0.66
0.214*
, 百拇医药
对照组
30
0
0.133
0.033
0.7
0.133
0
0.08
0.83
0.08
基底节出血组
30
, 百拇医药
0
0.166
0.033
0.63Δ
0.166
0
0.10
0.80
0.10Δ
与健康对照组比较，*P<0.05，ΔP>0.05
2 讨论
众所周知，apoE是Alzheimer's病(AD)的重要易感因素。ε4等位基因在AD患者中呈高频分布，且apoEε4与AD之间存在剂量依赖效应。据统计，具有一个或两个ε4拷贝，个体患病危险性分别上升至40%和91%[3，7]。主要是因为apoE特别是apoE4与具有神经毒性β样淀粉蛋白Aβ结合，使之成为稳定的能够抵抗水解的复合物影响Aβ的清除，同样病理改变也发生在脑血管壁称之为脑血管淀粉样变(CAA)。这既然是AD病理改变的一个特征，也是老年性脑叶出血的一个常见原因[4]。而CAA所致脑出血占卒中10%，其临床特点多为脑叶出血。Greenberg[8]曾尸解93例报告，其中中至重度CAA中，apoEε4阳性者比阴性高2.9倍。15例CAA脑出血中，apoEε4频率为0.4，明显高于对照组，认为apoEε4是CAA及CAA脑出血危险因素。
, http://www.100md.com
本研究通过PCR扩增技术对26例脑叶出血进行基因分析，并与正常老年对照组相比较，ε4等位基因频率明显增高，而E3/3基因型有下降趋势，揭示结果与理论推测相同。在最常见的高血压动脉硬化性脑出血类型基底节区出血组中，其apoE基因型和ε4基因频率与健康对照组相似，无显著性差别。提示ε4等位基因有较高脑叶出血风险，而与非脑叶出血无关。另外ε2基因频率各组两两比较，未见明显差异，与Carcia报道[4]相一致。
老年人的脑叶出血，国内报道好发在顶额叶，本实验选择脑叶出血患者额顶叶占58%。在26例中，有或曾经有高血压病史仅占14例。因此老年人脑叶出血如果没有其他原因应考虑CAA的可能性。
另外，O’Donnell[9]认为，apoE基因型与脑叶出血复发有关，他认为有ε2或ε4基因的脑叶出血患者2年内复发频率远高于含ε3基因型。我们认为，apoE作为神经系统应答损伤和修复的因素，对包括脑出血在内各种脑损伤是以其亚型特异性方式起着重要影响[10]。因此，apoE基因分型可以预测脑叶出血复发的风险。 参考文献
, http://www.100md.com
1，Mahley RW.Apolipoprotein E:cholesterol transport protein with expanding role in cell biology.Science.1988,240∶622
2，Davignon J.Apolipoprotein E polymorphism and atherosclerosis.In:Born GVR,Schwartz CJ,eds.New Horizons in Coronary Heart Disease.London,England:Current Science,1993∶51～521
3，Strittmatter WJ,Saunders AM,Schmechel D,et al.Apolipoprotein E:high-avidity binding to β-amyloid and increased frequency of type 4 allele in late-onset familial Alzheimer disease.Proc Natl Acad Aci USA,1993,30∶1977
, 百拇医药
4，Carcia C,Pinho e Melo T,Rocha L,et al.Cerebral hemorrhage and apoE.J Neurol.1999,246(9)∶830
5，王新德.各类脑血管病诊断要点.中华神经精神科杂志，1988，21∶60
6，Richard P,Tomas G,Zulueta MP,et al.Common and rare genotypes of human apolipoprotein E determind by specific restriction profiles of polymerase chain reaction-amphlified DNA.Clin Chem.1994,40∶24
7，Corder EH,Sauders AM,Strittmatter WJ,et al.Gene dose of apolipoprotein E type 4 allele and the risk of Alzheimer's disease in late-onset families.Science,1993，261∶921
, 百拇医药
8，Greenberg SM,Rebeck GW,Vonsattel JP,et al.Apolipoprotein E ε4 and cerebral hemorrhage associated with amyloid angiopathy.Ann Neurol,1995,38∶254
9，O'Donnell HC,Rosand J,Knudsen KA,et al.Apolipoprotein E genetype and the risk of recurrent lobar intracerebral hemorrhage.N Engl J Med,2000,342(4)∶240
10，Sheng HX,Laskowitz DT,Mackensen GB,et al.Apolipo-
protein E deficiency worsens outcome from global cerebral ischemia in the mouse.Stroke,1999,30∶1118
2000年4月29日收稿, 百拇医药
单位：程庆璋(苏州市第四人民医院神经内科，苏州，215001)；董万利(苏州医学院附属一院神经内科)
关键词：载脂蛋白(apoE)；基因型；脑叶出血
苏州医学院学报000920 摘要 目的 探讨载脂蛋白E(apoE)基因型与脑叶出血的关系。方法 用PCR技术检测26例脑叶出血apoE的基因型，并与30名健康同年龄对照组和30例基底节脑出血组比较。结果 脑叶出血组ε4等位基因频率明显高于健康对照组(P<0.05)，且脑叶出血组E3/3基因型有下降趋势；而基底节出血组apoE基因型与ε4等位基因频率和健康对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论 ε4等位基因有较高的脑叶出血风险，而与非脑叶出血无关。
中图法分类号 R743.33
, 百拇医药
The Relationship between Apolipoprotein E Genotype and Lobar Intracerebral Hemorrhage
Cheng Qingzhang, Dong Wanli1
(Dept.Of Neurology,Suzhou 4th Hospital,Suzhou,215001;Dept.Of Neurology,The First Hospital Affiliated to Suzhou Medical College)
Abstract Objective To explore the relationship between apolipoprotein E (apoE) genotype and lobar intracerebral hemorrhage (ICH).Method The polymerase chain reaction (PCR) technique was used to detect apoE genotype in 26 patients with lobar ICH,30 matched controls and 30 matched patients with basal ganglia ICH.Results The frequency of allele epsilon 4 (ε4) was 0.214 in the lobar ICH group,which was significantly higher than that of 0.08 in the normal control group (P<0.05).There was a tendency to a lower frequency of genotype E3/3 in the lobar ICH group.We found no significant diffrences in apoE genotype and the frequency of ε4 allele between basal ganglia ICH group and control group.Conclusion It suggests that allele ε4 indicates a higher risk of lobar ICH and has no relationship with non lobar ICH.
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Key words apolipoprotein E；genotype；lobar intracerebral hemorrhage
载脂蛋白E(apoE)为34kd糖基化蛋白质，是迄今为止唯一一种与神经系统关系密切的载脂蛋白，在神经系统疾病中起着重要的生物学作用。人类存在由3个等显位基因ε2、ε3、ε4编码的apoE基因型E2、E3、E4，区别仅为一个氨基酸的变化[1]。证据表明，apoE的遗传多态性(特别是ε4等位基因)与动脉硬化、心脑血管病、Alzheimer's病密切相关[2，3]。ApoE与脑血管淀粉样变(CAA)有关，而CAA是构成脑叶出血的一个常见原因。目前apoE基因型与脑叶出血相关性尚存争议[4]。本文采用PCR技术研究脑叶出血患者apoE的基因型，旨在探讨其在脑叶出血中的意义。
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1 材料和方法
1.1 研究对象
1.1.1 脑叶出血组 本院和苏医附一院神经内科住院的脑叶出血患者分别为18例和8例，共26例，其中男19例，女7例，平均年龄68.1±9.4岁。皆符合第二届全国脑血管会议的诊断标准[5]，均经CT或MRI证实并排除肿瘤及出血性疾病。其中额叶出血6例，顶叶出血9例，枕叶出血4例，颞叶出血7例。有或曾经有高血压病史14例。
1.1.2 健康对照组 选择>60岁体检健康者30名，男20名，女10名，平均年龄65.9±4.8岁，均无高血压、脑血管病及内分泌疾病史。1.1.3 基底节出血组 选自本院高血压动脉硬化性脑出血中最常见类型基底节区脑出血住院患者30例，男16例，女14例，平均年龄59.4±6.1岁。皆符合第二届全国脑血管会议的诊断标准，均经CT或MRI证实。其中壳核出血16例，丘脑出血9例，内囊出血5例。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 apoE基因多态性检测 参照Richard[8]方法，抗凝血离心后移取白细胞层，采用酚氯仿乙醇沉淀法提取基因组DNA，PCR扩增含apoE两个多态性位点DNA片段(292bp)。引物序列为：P15-AACAACTGACCCCGGTGGCG-3’和P25’-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3’。扩增产物用限制性HhaI酶切，10%非变性聚丙酰胺凝胶电泳分离酶切产物，与标准分子量参照物对照，在紫外灯下观察条带，判定apoE基因型。
1.2.2 统计方法 组间基因型频率和等位基因频率的差异用x2检验。
1.3 结果 脑叶出血组和健康对照组、基底节出血组apoE基因型频率和等位基因频率比较见附表。
, http://www.100md.com 附表 apoE基因型频率与等位基因频率(%) 组别
n
AopE基因型频率
apoE等位基因频率
E2/2
E2/3
E2/4
E3/3
E3/4
E4/4
ε2
ε3
, 百拇医药
ε4
脑叶出血组
26
0.035
0.107
0.075
0.535*
0.142
0.107
0.125
0.66
0.214*
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对照组
30
0
0.133
0.033
0.7
0.133
0
0.08
0.83
0.08
基底节出血组
30
, 百拇医药
0
0.166
0.033
0.63Δ
0.166
0
0.10
0.80
0.10Δ
与健康对照组比较，*P<0.05，ΔP>0.05
2 讨论
众所周知，apoE是Alzheimer's病(AD)的重要易感因素。ε4等位基因在AD患者中呈高频分布，且apoEε4与AD之间存在剂量依赖效应。据统计，具有一个或两个ε4拷贝，个体患病危险性分别上升至40%和91%[3，7]。主要是因为apoE特别是apoE4与具有神经毒性β样淀粉蛋白Aβ结合，使之成为稳定的能够抵抗水解的复合物影响Aβ的清除，同样病理改变也发生在脑血管壁称之为脑血管淀粉样变(CAA)。这既然是AD病理改变的一个特征，也是老年性脑叶出血的一个常见原因[4]。而CAA所致脑出血占卒中10%，其临床特点多为脑叶出血。Greenberg[8]曾尸解93例报告，其中中至重度CAA中，apoEε4阳性者比阴性高2.9倍。15例CAA脑出血中，apoEε4频率为0.4，明显高于对照组，认为apoEε4是CAA及CAA脑出血危险因素。
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本研究通过PCR扩增技术对26例脑叶出血进行基因分析，并与正常老年对照组相比较，ε4等位基因频率明显增高，而E3/3基因型有下降趋势，揭示结果与理论推测相同。在最常见的高血压动脉硬化性脑出血类型基底节区出血组中，其apoE基因型和ε4基因频率与健康对照组相似，无显著性差别。提示ε4等位基因有较高脑叶出血风险，而与非脑叶出血无关。另外ε2基因频率各组两两比较，未见明显差异，与Carcia报道[4]相一致。
老年人的脑叶出血，国内报道好发在顶额叶，本实验选择脑叶出血患者额顶叶占58%。在26例中，有或曾经有高血压病史仅占14例。因此老年人脑叶出血如果没有其他原因应考虑CAA的可能性。
另外，O’Donnell[9]认为，apoE基因型与脑叶出血复发有关，他认为有ε2或ε4基因的脑叶出血患者2年内复发频率远高于含ε3基因型。我们认为，apoE作为神经系统应答损伤和修复的因素，对包括脑出血在内各种脑损伤是以其亚型特异性方式起着重要影响[10]。因此，apoE基因分型可以预测脑叶出血复发的风险。 参考文献
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1，Mahley RW.Apolipoprotein E:cholesterol transport protein with expanding role in cell biology.Science.1988,240∶622
2，Davignon J.Apolipoprotein E polymorphism and atherosclerosis.In:Born GVR,Schwartz CJ,eds.New Horizons in Coronary Heart Disease.London,England:Current Science,1993∶51～521
3，Strittmatter WJ,Saunders AM,Schmechel D,et al.Apolipoprotein E:high-avidity binding to β-amyloid and increased frequency of type 4 allele in late-onset familial Alzheimer disease.Proc Natl Acad Aci USA,1993,30∶1977
, 百拇医药
4，Carcia C,Pinho e Melo T,Rocha L,et al.Cerebral hemorrhage and apoE.J Neurol.1999,246(9)∶830
5，王新德.各类脑血管病诊断要点.中华神经精神科杂志，1988，21∶60
6，Richard P,Tomas G,Zulueta MP,et al.Common and rare genotypes of human apolipoprotein E determind by specific restriction profiles of polymerase chain reaction-amphlified DNA.Clin Chem.1994,40∶24
7，Corder EH,Sauders AM,Strittmatter WJ,et al.Gene dose of apolipoprotein E type 4 allele and the risk of Alzheimer's disease in late-onset families.Science,1993，261∶921
, 百拇医药
8，Greenberg SM,Rebeck GW,Vonsattel JP,et al.Apolipoprotein E ε4 and cerebral hemorrhage associated with amyloid angiopathy.Ann Neurol,1995,38∶254
9，O'Donnell HC,Rosand J,Knudsen KA,et al.Apolipoprotein E genetype and the risk of recurrent lobar intracerebral hemorrhage.N Engl J Med,2000,342(4)∶240
10，Sheng HX,Laskowitz DT,Mackensen GB,et al.Apolipo-
protein E deficiency worsens outcome from global cerebral ischemia in the mouse.Stroke,1999,30∶1118
2000年4月29日收稿, 百拇医药