慢性乙型肝炎患者干扰素治疗前后细胞免疫状态的变化及其意义
作者：吴兴柳 朱学俊
单位：泰州市人民医院南院传染病科，江苏泰州，225300
关键词：慢性乙型肝炎；细胞免疫；干扰素；CD4+；CD8+
摘要 目的 探讨细胞免疫在慢性乙型肝炎病毒 摘要 目的 探讨细胞免疫在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染中的作用和干扰素治疗对细胞免疫的影响。方法 25例慢性乙型肝炎(CHB)患者经干扰素(6MIU/次，肌注，隔日1次)治疗6个月后，测定血清HBV标志物变化及外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞。结果 干扰素治疗前和干扰素治疗无反应组(n=16)外周血CD4+T细胞与正常人比显著降低(P<0.01)，而CD8+显著升高(P<0.01)；CD3+在干扰素治疗前后与正常人相比，无显著差异(P>0.05)。干扰素治疗有反应组(n=9)治疗后外周血CD4+、CD8+恢复至正常水平(P<0.001)，而无反应组未恢复(P>0.05)。治疗后9例有效，近期有效率为36%。治疗前后肝功能无明显变化(P>0.05)。结论 细胞免疫在HBV感染发病机制和病毒清除过程中起重要作用。
, 百拇医药
中图法分类号 R512.6204
The Cellular Immune Status of Patients with CHB before and after α-Interferon Treatment——the Immunalogical Change and Its Clinical Significance
Wu Xingliu, Zhu Xuejun
(The Infectious Disease Department of South Part in Tai Zhou People's Hospital,Jiangshu Taizhou,225300)
Abstract Objective To explore the action of cellular immunity in chronic HBV infection and the effect of interferon.Method The result of peripheral blood CD3+、CD4+/CD8+ T cell,HBV-M,HBV-DNA,and hepatic function test of 25 patients with CHB were monitored.These patients started to be hospitalized in our hospital from Sep 1998 and were treated by alpha interferon for 6 months (a-2b IFN 6MIU intramuscular,every two days).Result Before alpha IFN administration and in the IFN-NR group (n=16),the peripheral blood CD4+T level in the patients are markedly decreased than that in the normal people (P<0.01).The peripheral blood、CD8+ T level increased (P<0.01).Before and after treatment with alpha IFN,through the comparison between CD3+ T-lymphocytes in the patients and that in normal people it was found that there was no difference between them.In the IFN-R group (n=9),the peripheral blood CD4+T and CD8+T restored to the normal level after treatment and there was significant difference in CD4+T and CD8+T level,CD4+T and CD8+T between pre-treatment and post-treatment (P<0.001),but there was no significant difference between the IFN group and the nomal group.HBV-DNA of 9 cases has transformed after treatment.The short-term cure rate was 36%.There was no obvious change of hepatic function before and after treatment (PALT>0.05，PTsb>0.05).Conclusion These suggest that cellular immunity play a critical role in pathogenesis of chronic HBV infection and in the course of clean up of HBV Alpha interferon is a useful medicine of controlling the development of CHB.
, 百拇医药
Key words Hepatitis B,chronic;CD4+T lymphocytes;CD8+T lymphocytes;pathogenesis;Alpha interferon;treatment
慢性HBV感染可并发慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌。细胞免疫参与乙型病毒性肝炎的发病机制，对HBV的病毒特异性CD4+和CD8+T细胞反应与病毒清除有关[1]。为探讨慢性乙型肝炎(CHB)干扰素治疗的疗效及其与细胞免疫的关系。本文总结了我院1998年9月以来收治的25例经干扰素治疗的CHB患者的HBV标志物变化和CD3+、CD4+、CD8+T细胞的测定情况，结果报告如下。
, http://www.100md.com
1 临床资料
1.1 一般资料 25例CHB皆符合1995年5月北京第5次全国传染病寄生虫病学术会议讨论修订的病毒性肝炎预防方案(试行)中的诊断标准[2]。其中男22例，女3例。年龄18～42岁。平均37.52岁。病程0.9～4.5年，平均2.5年。
1.2 治疗与检测方法 予干扰素治疗前后均检查肝功能、血清乙肝表面标志物(HBV-M)，抗HAV、抗HCV、抗HDV、抗HEV、HBV-DNA及外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞。治疗采用国产a-2b干扰素，每次6M IU，隔日1次肌肉注射，疗程6个月，治疗期间每两周复查1次肝功能。HBV-DNA用PCR法测定，血清病毒标志用ELISA方法测定，CD3+、CD4+、CD8+T细胞用致敏血球法。CD3Ab、CD4Ab、CD8Ab购自武汉生物制品研究所。正常值来源于武汉生物制品研究所试剂盒中所附。
, 百拇医药
1.3 疗效判定 1个疗程后HBV-DNA或(和)HBsAg、HBeAg转阴为有效，否则视为无效。
1.4 结果 治疗1个疗程后，9例有效，HBV-DNA转阴，其中伴HBsAg转阴2例，HBeAg转阴5例，HBsAb转阳1例。治疗前后CD3+、CD4+、CD8+T细胞及肝功能情况见附表。
附表 干扰素治疗前后CD3+、CD4+、CD8+T细胞和肝功能的测定情况(
±s)
, 百拇医药
n
CD3+T(%)
CD4+T(%)
CD8+T(%)
ALT(IU/L)
Tb(ummol/L)
正常值
66.0±9.8
43.8±9.0
31.3±7
治疗前
, http://www.100md.com
25
65.57±8.45
34.66±4.82
39.03±4.36
77.89±36.46
107.09±58.42
P值
>0.05
<0.05
<0.05
IFN-R
治疗前
, 百拇医药
9
65.26±9.11
35.10±5.21
40.17±6.78
80.79±42.15
84.33±52.18
治疗后
9
67.01±9.75
44.07±8.97
30.55±5.52
78.27±38.75
, 百拇医药
76.57±49.22
P值
>0.05
<0.001
<0.001
>0.05
>0.05
IFN-NR
治疗前
16
66.14±10.28
34.57±5.10
, http://www.100md.com 38.91±4.74
76.94±37.67
110.22±65.66
治疗后
16
65.69±9.97
35.76±4.78
39.15±5.07
70.11±43.56
111.76±64.96
P值
>0.05
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>0.05
>0.05
>0.05
>0.05
2 讨论
干扰素是治疗慢性HBV感染的主要药物之一[3]。α-干扰素对40%的成年慢性HBV感染者有效[1，3]。本组25例CHB患者经国产α-2b干扰素治疗1个疗程后9例，HBV-DNA转阴，同时伴HBsAg转阴2例，HBeAg转阴5例和HBsAb转阳1例。近期有效率36%，与文献〔3，8〕报道相似。
大量的证据认为，细胞免疫机制是乙型肝炎感染的发病机制之一。CD8+T细胞和CD4+T细胞对病毒抗原的反应是乙型肝炎中引起肝细胞损害的重要机制[4]。对HBV病毒特异性的CD4+和CD8+T细胞反应与病毒清除有关。本组资料显示，在干扰素治疗前后干扰素治疗无反应组(IFN-NR)外周血CD4+T细胞比正常人显著降低(P<0.01)，而CD8+T细胞比正常人显著升高(P<0.01)；干扰素治疗有反应组(IFN-R)，治疗后随着外周血CD4+T、CD8+T细胞恢复到正常水平，伴有HBV-DNA的阴转，治疗前后CD4+T、CD8+T有显著差异(P<0.001)，而无反应组未见(P>0.05)。说明CD8+T细胞增高可能与慢性乙型肝炎肝细胞损伤直接相关，CD4+T细胞降低，不能诱导有效的CD8+T细胞和CTL[5]，不能有效地杀伤HBV，使HBV持续复制，引起肝细胞慢性炎症。随着外周血CD4+T、CD8+T恢复到正常，HBV被清除，HBV-DNA转阴。这也证明了细胞免疫在慢性乙型肝炎病毒感染的发病机制和机体清除病毒感染的过程中起着关键的作用。CD3+T细胞是总的T细胞，在干扰素治疗前后与正常值相比无显著差异(P>0.05)，说明CD4+T的降低是由于CD8+T升高的结果，这意味着在清除病毒过程中活化的免疫反应被感染阻止[6]。
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α-干扰素具有广泛的抗病毒作用。它的抗病毒作用的机制可能与细胞内寡核苷酸的产生有关，这种寡核苷酸在病毒RNAs存在下能激活核糖核酸酶。而且，α-干扰素也有免疫调节作用，对抑制病毒复制更重要。干扰素能增加细胞表面I类抗原的表达，提高淋巴细胞对感染细胞的免疫识别和反应。此外，干扰素能诱导慢性感染患者产生一种对HBV的CTL反应[7]。
本组16例(占64%)对干扰素治疗无反应者CD4+、CD8+T细胞治疗前后无明显变化(P>0.5)。CD4+T细胞降低，表明Th细胞少，功能低下，不能诱导有效的CTL反应，而Th细胞及CTL是HBV清除关键[5]，因此干扰素治疗不能中断这部分患者的免疫耐受，导致治疗失败。干扰素抗体的产生也是导致干扰素治疗失败的原因之一。还有，在组织培养中，大量HBV的POL基因产物可降低IFN信号传导通路活动，慢性HBV感染患者干扰素治疗失败可能与POL蛋白的过度表达有关[9]。参考文献
, 百拇医药
1，Im EH,Lee BS,Sung JK,et al.T cell subsets in chronic hepatitis B and the effect of prednisolone withdrawal and interferon alpha-2b.Korean J Intern Med,1999,14(1)∶1
2，病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志，1995，13∶241
3，Main J,McCarron B,Thomas HC.Treatment of chronic viral hepatitis.Antivir Chem Chemother,1998,9(6)∶449
4，Tsai SL,Chang Keng I,Hsueh Tsa.T cell mechanism in the Immunopathogenesis of viral hepatitis B and C.J Gastroenterol Hepatol,1997,12(9-11)∶S27
, 百拇医药
5，Lohr HF,KrugS,HerrW,et al.Quantitative and functional analysis of core-specific T-helper cell and CTL activities in acute and chronic hepatitis B.Liver,1998,18(6)∶405
6，Choong ML,Ton SH,Cheong SK.The cellular immune status of HbsAg-positive carriers in malaysia.Asian Pac J Allergy Immno,1996,14(1)∶19
7，Rehermann B,Lan D,Hoofnagle JH,et al.Cytotoxic T lymphocyte responsiveness after resolution of chronic hepatitis B virus infection.J Clin Invest,1996,97(7)∶1655
8，姚桢编著.分子乙型肝炎病毒相关病学.北京∶中国医药科技出版社，1998∶138～144
9，傅青春，陈成伟.干扰素在宿主防御机制中的作用(综述).肝脏，1998，3(2)∶29
2000年1月30日收稿, 百拇医药
单位：泰州市人民医院南院传染病科，江苏泰州，225300
关键词：慢性乙型肝炎；细胞免疫；干扰素；CD4+；CD8+
摘要 目的 探讨细胞免疫在慢性乙型肝炎病毒 摘要 目的 探讨细胞免疫在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染中的作用和干扰素治疗对细胞免疫的影响。方法 25例慢性乙型肝炎(CHB)患者经干扰素(6MIU/次，肌注，隔日1次)治疗6个月后，测定血清HBV标志物变化及外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞。结果 干扰素治疗前和干扰素治疗无反应组(n=16)外周血CD4+T细胞与正常人比显著降低(P<0.01)，而CD8+显著升高(P<0.01)；CD3+在干扰素治疗前后与正常人相比，无显著差异(P>0.05)。干扰素治疗有反应组(n=9)治疗后外周血CD4+、CD8+恢复至正常水平(P<0.001)，而无反应组未恢复(P>0.05)。治疗后9例有效，近期有效率为36%。治疗前后肝功能无明显变化(P>0.05)。结论 细胞免疫在HBV感染发病机制和病毒清除过程中起重要作用。
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中图法分类号 R512.6204
The Cellular Immune Status of Patients with CHB before and after α-Interferon Treatment——the Immunalogical Change and Its Clinical Significance
Wu Xingliu, Zhu Xuejun
(The Infectious Disease Department of South Part in Tai Zhou People's Hospital,Jiangshu Taizhou,225300)
Abstract Objective To explore the action of cellular immunity in chronic HBV infection and the effect of interferon.Method The result of peripheral blood CD3+、CD4+/CD8+ T cell,HBV-M,HBV-DNA,and hepatic function test of 25 patients with CHB were monitored.These patients started to be hospitalized in our hospital from Sep 1998 and were treated by alpha interferon for 6 months (a-2b IFN 6MIU intramuscular,every two days).Result Before alpha IFN administration and in the IFN-NR group (n=16),the peripheral blood CD4+T level in the patients are markedly decreased than that in the normal people (P<0.01).The peripheral blood、CD8+ T level increased (P<0.01).Before and after treatment with alpha IFN,through the comparison between CD3+ T-lymphocytes in the patients and that in normal people it was found that there was no difference between them.In the IFN-R group (n=9),the peripheral blood CD4+T and CD8+T restored to the normal level after treatment and there was significant difference in CD4+T and CD8+T level,CD4+T and CD8+T between pre-treatment and post-treatment (P<0.001),but there was no significant difference between the IFN group and the nomal group.HBV-DNA of 9 cases has transformed after treatment.The short-term cure rate was 36%.There was no obvious change of hepatic function before and after treatment (PALT>0.05，PTsb>0.05).Conclusion These suggest that cellular immunity play a critical role in pathogenesis of chronic HBV infection and in the course of clean up of HBV Alpha interferon is a useful medicine of controlling the development of CHB.
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Key words Hepatitis B,chronic;CD4+T lymphocytes;CD8+T lymphocytes;pathogenesis;Alpha interferon;treatment
慢性HBV感染可并发慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌。细胞免疫参与乙型病毒性肝炎的发病机制，对HBV的病毒特异性CD4+和CD8+T细胞反应与病毒清除有关[1]。为探讨慢性乙型肝炎(CHB)干扰素治疗的疗效及其与细胞免疫的关系。本文总结了我院1998年9月以来收治的25例经干扰素治疗的CHB患者的HBV标志物变化和CD3+、CD4+、CD8+T细胞的测定情况，结果报告如下。
, http://www.100md.com
1 临床资料
1.1 一般资料 25例CHB皆符合1995年5月北京第5次全国传染病寄生虫病学术会议讨论修订的病毒性肝炎预防方案(试行)中的诊断标准[2]。其中男22例，女3例。年龄18～42岁。平均37.52岁。病程0.9～4.5年，平均2.5年。
1.2 治疗与检测方法 予干扰素治疗前后均检查肝功能、血清乙肝表面标志物(HBV-M)，抗HAV、抗HCV、抗HDV、抗HEV、HBV-DNA及外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞。治疗采用国产a-2b干扰素，每次6M IU，隔日1次肌肉注射，疗程6个月，治疗期间每两周复查1次肝功能。HBV-DNA用PCR法测定，血清病毒标志用ELISA方法测定，CD3+、CD4+、CD8+T细胞用致敏血球法。CD3Ab、CD4Ab、CD8Ab购自武汉生物制品研究所。正常值来源于武汉生物制品研究所试剂盒中所附。
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1.3 疗效判定 1个疗程后HBV-DNA或(和)HBsAg、HBeAg转阴为有效，否则视为无效。
1.4 结果 治疗1个疗程后，9例有效，HBV-DNA转阴，其中伴HBsAg转阴2例，HBeAg转阴5例，HBsAb转阳1例。治疗前后CD3+、CD4+、CD8+T细胞及肝功能情况见附表。
附表 干扰素治疗前后CD3+、CD4+、CD8+T细胞和肝功能的测定情况(
±s), 百拇医药
n
CD3+T(%)
CD4+T(%)
CD8+T(%)
ALT(IU/L)
Tb(ummol/L)
正常值
66.0±9.8
43.8±9.0
31.3±7
治疗前
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25
65.57±8.45
34.66±4.82
39.03±4.36
77.89±36.46
107.09±58.42
P值
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<0.05
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IFN-R
治疗前
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65.26±9.11
35.10±5.21
40.17±6.78
80.79±42.15
84.33±52.18
治疗后
9
67.01±9.75
44.07±8.97
30.55±5.52
78.27±38.75
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76.57±49.22
P值
>0.05
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IFN-NR
治疗前
16
66.14±10.28
34.57±5.10
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76.94±37.67
110.22±65.66
治疗后
16
65.69±9.97
35.76±4.78
39.15±5.07
70.11±43.56
111.76±64.96
P值
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2 讨论
干扰素是治疗慢性HBV感染的主要药物之一[3]。α-干扰素对40%的成年慢性HBV感染者有效[1，3]。本组25例CHB患者经国产α-2b干扰素治疗1个疗程后9例，HBV-DNA转阴，同时伴HBsAg转阴2例，HBeAg转阴5例和HBsAb转阳1例。近期有效率36%，与文献〔3，8〕报道相似。
大量的证据认为，细胞免疫机制是乙型肝炎感染的发病机制之一。CD8+T细胞和CD4+T细胞对病毒抗原的反应是乙型肝炎中引起肝细胞损害的重要机制[4]。对HBV病毒特异性的CD4+和CD8+T细胞反应与病毒清除有关。本组资料显示，在干扰素治疗前后干扰素治疗无反应组(IFN-NR)外周血CD4+T细胞比正常人显著降低(P<0.01)，而CD8+T细胞比正常人显著升高(P<0.01)；干扰素治疗有反应组(IFN-R)，治疗后随着外周血CD4+T、CD8+T细胞恢复到正常水平，伴有HBV-DNA的阴转，治疗前后CD4+T、CD8+T有显著差异(P<0.001)，而无反应组未见(P>0.05)。说明CD8+T细胞增高可能与慢性乙型肝炎肝细胞损伤直接相关，CD4+T细胞降低，不能诱导有效的CD8+T细胞和CTL[5]，不能有效地杀伤HBV，使HBV持续复制，引起肝细胞慢性炎症。随着外周血CD4+T、CD8+T恢复到正常，HBV被清除，HBV-DNA转阴。这也证明了细胞免疫在慢性乙型肝炎病毒感染的发病机制和机体清除病毒感染的过程中起着关键的作用。CD3+T细胞是总的T细胞，在干扰素治疗前后与正常值相比无显著差异(P>0.05)，说明CD4+T的降低是由于CD8+T升高的结果，这意味着在清除病毒过程中活化的免疫反应被感染阻止[6]。
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α-干扰素具有广泛的抗病毒作用。它的抗病毒作用的机制可能与细胞内寡核苷酸的产生有关，这种寡核苷酸在病毒RNAs存在下能激活核糖核酸酶。而且，α-干扰素也有免疫调节作用，对抑制病毒复制更重要。干扰素能增加细胞表面I类抗原的表达，提高淋巴细胞对感染细胞的免疫识别和反应。此外，干扰素能诱导慢性感染患者产生一种对HBV的CTL反应[7]。
本组16例(占64%)对干扰素治疗无反应者CD4+、CD8+T细胞治疗前后无明显变化(P>0.5)。CD4+T细胞降低，表明Th细胞少，功能低下，不能诱导有效的CTL反应，而Th细胞及CTL是HBV清除关键[5]，因此干扰素治疗不能中断这部分患者的免疫耐受，导致治疗失败。干扰素抗体的产生也是导致干扰素治疗失败的原因之一。还有，在组织培养中，大量HBV的POL基因产物可降低IFN信号传导通路活动，慢性HBV感染患者干扰素治疗失败可能与POL蛋白的过度表达有关[9]。参考文献
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1，Im EH,Lee BS,Sung JK,et al.T cell subsets in chronic hepatitis B and the effect of prednisolone withdrawal and interferon alpha-2b.Korean J Intern Med,1999,14(1)∶1
2，病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志，1995，13∶241
3，Main J,McCarron B,Thomas HC.Treatment of chronic viral hepatitis.Antivir Chem Chemother,1998,9(6)∶449
4，Tsai SL,Chang Keng I,Hsueh Tsa.T cell mechanism in the Immunopathogenesis of viral hepatitis B and C.J Gastroenterol Hepatol,1997,12(9-11)∶S27
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5，Lohr HF,KrugS,HerrW,et al.Quantitative and functional analysis of core-specific T-helper cell and CTL activities in acute and chronic hepatitis B.Liver,1998,18(6)∶405
6，Choong ML,Ton SH,Cheong SK.The cellular immune status of HbsAg-positive carriers in malaysia.Asian Pac J Allergy Immno,1996,14(1)∶19
7，Rehermann B,Lan D,Hoofnagle JH,et al.Cytotoxic T lymphocyte responsiveness after resolution of chronic hepatitis B virus infection.J Clin Invest,1996,97(7)∶1655
8，姚桢编著.分子乙型肝炎病毒相关病学.北京∶中国医药科技出版社，1998∶138～144
9，傅青春，陈成伟.干扰素在宿主防御机制中的作用(综述).肝脏，1998，3(2)∶29
2000年1月30日收稿, 百拇医药