热休克蛋白70和P53在人类乳腺癌中的表达及意义
作者：董亮 沈丹 冯一中
单位：苏州大学病理学教研室，苏州，215007
关键词：乳腺癌；HSP70；P53；免疫组化
苏州医学院学报000909 摘要 目的 探讨HSP70和P53在乳腺癌中所起的作用及其在临床诊断中的应用价值。方法 运用超敏免疫组织化学技术(SP法)检测HSP70和抑癌基因P53蛋白在52例乳腺癌中的表达情况。结果 HSP70的阳性率为35%(18/52)，其表达与乳腺癌的病理学级别有关(P<0.05)。P53的过度表达率为36.5%(19/52)，其表达与乳腺癌的病理学级别有关(P<0.05)。在52例乳腺癌中，P53的过度表达和HSP70的表达具有一定的相关性(P<0.05)。结论 HSP70和P53在乳腺癌中的相关性提示HSP70可能参与P53的代谢；HSP70和P53表达程度与肿瘤的恶性程度有关。
, http://www.100md.com
中图法分类号 R737.902
Expression of Heat Shock Protein 70 and P53 in Human Primary Breast Cancer and It's Significance
Dong Liang, Shen Dan, Feng Yizhong
(Department of Pathology,Suzhou University,Suzhou,215007)
Abstract Purpose The expression of heat shock protein 70(HSP70)、P53 tumor suppressor genes protein was studied and its relations to the pathogenesis of the human breast cancer.Methods Fifty two specimens of primary breast cancer,2 of fibroadenoma and 2 of normal breast tissue were studied with SP immunohistochemical techniques.Results The positivity rate of HSP70 was 35%(18/52),and the expression of HSP70 was in accordance with the increase of histological grades,with significant difference (P<0.05).The rate of overexpression of P53 protein was 36.5%(19/52),and was in accordance with the increasing grade of breast cancer malignancy,showing significant difference (P<0.05).In 52 cases of primary breast cancer,there was statistically significant correlation between the expression of HSP70 and overpression of P53 protein (P<0.05).Conclusions The results suggest HSP70 and P53 play a role in oncogenesis and progression of breast cancer in some degree.HSP70 may be involved in the metabolism of P53.The detection of these gene proteins may be helpful in determing the histological grades and prognosis of breast cancer.
, 百拇医药
Key words breast cancer;HSP70;P53;immunohistochemitry
热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)是在热诱导下合成的一组具有高度保守性的蛋白质，与肿瘤的发生增殖及分化有关[1]。其蛋白种类繁多，HSP70是热休克蛋白家族中的一员。有研究[2]发现，多种肿瘤中有HSP70的表达。并且还发现HSP70与抑癌基因P53关系密切[3]。目前国内有关乳腺癌中HSP70与P53的研究尚少见。现将研究结果报道于下。
1 材料与方法
1.1 病例 选用苏医附一院、附二院普外科1998～1999年间临床资料完备的乳腺癌手术标本52例，均为女性患者。其中，浸润性导管癌43例，导管内癌、腺样囊性癌、浸润性小叶癌、粘液癌、未分类癌各1例，乳头状癌、髓样癌各2例，按照病理学分级，Ⅰ级16例，Ⅱ级24例，Ⅲ级12例；年龄33～77岁，平均年龄50.2岁。另外，以5例乳腺腺瘤和5例正常乳腺作对照。
, 百拇医药
1.2 方法 标本以10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，分别作HE和SP免疫组化法染色，已知阳性片作阳性对照。HSP70以细胞中细胞浆或细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞，切片中阳性细胞>10%为阳性。P53的过度表达参照Bames等提出的基于3个参数的半定量计数方法，即染色强度、阳性细胞数和两者记分的乘积，进行判断，依次分为阴性、弱阳性、阳性、强阳性。构成比及率的差别用x2检验。
2 结果
2.1 HSP70与P53的表达 见附表。HSP70与P53阳性细胞在乳腺癌的组织中均散在或小片状分布，HSP70阳性颗粒位于胞核或胞浆中，P53阳性颗粒主要分布于细胞核。在正常乳腺组织和乳腺腺癌组织中，HSP70与P53表达均为阴性。
2.2 HSP70表达和P53过度表达的关系 52例乳腺癌中，HSP70阳性的18例中，P53阳性10例，阴性8例；而HSP70阴性的34例中，P53阳性9例，阴性25例。两者相比有显著性差异(P<0.05)。 附表 52例乳腺癌中HSP70和P53的表达
, http://www.100md.com
n
HSP70
P值
P53
P值
阳性
阴性
阳性
阴性
年龄
≥50岁
27
6
21
, 百拇医药
>0.05
12
15
>0.05
<50岁
25
12
13
7
18
肿瘤分级
Ⅰ
16
, 百拇医药 3
13
4
12
Ⅱ
24
7
17
<0.05
8
16
<0.05
Ⅲ
12
, http://www.100md.com
8
4
7
5
肿瘤分类
浸润性导管癌
43
15
28
>0.05
15
28
>0.05
, http://www.100md.com 其他类型*
9
3
6
4
5
*包括导管内癌、腺样囊性癌、浸润性小叶癌、粘液癌、未分为癌各1例，乳头状癌、髓样癌各2例
3 讨论
有研究[4]表明，HSP70与恶性肿瘤的关系密切，参与控制肿瘤细胞的增生和凋亡。本实验运用免疫组织化学方法研究乳腺癌中的HSP70的表达，HSP70阳性率为35%，与国外的报道[5]相近。同时我们的实验数据显示HSP70与肿瘤病理学分级呈正相关，随着乳腺癌分化程度的降低，HSP70的阳性率明显升高，提示HSP70与乳腺癌的恶性程度有关。同样，Lazaris[6]等也发现，HSP70与乳腺癌的低分化有关。由此可见，HSP70在乳腺癌的发生发展中扮演了一定的角色。HSP70可以发挥其分子伴侣作用，防止异常蛋白积聚产生异常折叠，维持细胞的自稳态，使细胞维持增生状态免于凋亡。
, 百拇医药
本实验发现，52例乳腺癌中P53过度表达率36.5%，与其他报道[7]的结果相近。另外，本研究结果还显示，P53的过度表达与乳腺癌的分级有关，并且有统计学意义(P<0.05)。说明随着肿瘤恶性程度的增加，突变型P53在肿瘤细胞中积累也逐渐增多。突变型P53可以通过显性抑制效应使野生型P53失活[8]。本实验结果提示突变型P53是细胞恶变的指标，P53在乳腺癌的发生发展中起一定的作用。
HSP70和P53都被认为在肿瘤的发生、发展中起一定的作用。HSP70的基因表达调控机制十分复杂。Agoff[3]的研究表明，野生型P53可以通过与CCAAT结合因子(CBF)来抑制HSP70的基因转录。突变型P53可改变野生型P53-CBF结合体，从而使HSP70基因的转录不受抑制。突变型P53能被HSP70蛋白选择性结合成稳定的复合物，使核内P53蛋白转运到细胞浆中，丧失控制细胞增殖的负调控能力[9]。此外，突变型P53与野生型P53相比较，结构上发生一定改变，便无法激活HSP70内在的ATP酶活性，这样就使突变型P53不能转变为野生型P53。于是，HSP70与P53就会在细胞内积累下来[10]。我们的实验结果显示，HSP70与P53在乳腺癌中的表达呈正相关，并且两者都与乳腺癌的病理组织学分级有关，随着乳腺癌恶性程度的增高而HSP70和P53的阳性率也提高。提示HSP70可能通过参与P53的代谢而在肿瘤的发生和发展中起作用。
, http://www.100md.com
董亮，硕士研究生；沈丹，导师
参考文献
1，Koyasu S,Nishida E,Kadoeaki T,et al.Two mammalian heat shock proteins,HSP90 and HSP100,are actin-binding proteins.Pro Natl Acad Sci USA,1986,83∶8054
2，内藤善哉，乔炎，浅野五郎.热休克蛋白在乳腺癌中的作用.中华病理学杂志.1998，27∶35
3，Agoff NS,Hou J,Linzer DIH,et al.Regulation of the human HSP70 promoter by P53.Science,1993,259∶84
4，Wei YQ,Zhao X,Kariya Y,et al.Inhibition of proliferation and induction of apoptosis by abrogation of heat shock protein (HSP) 70 expression in tumor cells.Cancer Immunol Immunother,1995,40(2)∶73
, 百拇医药
5，Vargas,Rioig LM,Fanelli MA,et al.Heat shock proteins and cell proliferation in human breast cancer biopsy samples.Cancer Detect Prev,1997,21(5)∶441
6，Lazaris Ach,Chatzigianni EB,Panoussopoulos D,et al.Prolifetating cell nuclear antigen and heat shock protein 70 immunolocolization in invasive ductal breast cancer not otherwise specified.Breast Res Treat,1997,43(1)∶43
7，Ostrowski JL,Sawan A,Henry L,et al.P53 expession in human breast cancer related to survival and prognostic factors:An immunohistochemical study.J pathol,1991,164∶75
, 百拇医药
8，Rotter V,Prokoimer M.P53 and human malignancies.Adv Cancer Res,1991,57∶257
9，Finlay CA,Hinds PW,Tan TH,et al.Activating mutations for transformation by P53 produce a gene product that forms an hsc70-P53 complex with an altered half-life.Mol Cell Biol,1988,8(2)∶531
10，Hainaut P,Milner J.Interaction of heat shock protein 70 with P53 translated in vitro:evidence for interaction with dimeric P53 and for a role in the regulation of P53 conformation.EMBOJ,1992,11(10)∶3513
2000年6月30日收稿, http://www.100md.com
单位：苏州大学病理学教研室，苏州，215007
关键词：乳腺癌；HSP70；P53；免疫组化
苏州医学院学报000909 摘要 目的 探讨HSP70和P53在乳腺癌中所起的作用及其在临床诊断中的应用价值。方法 运用超敏免疫组织化学技术(SP法)检测HSP70和抑癌基因P53蛋白在52例乳腺癌中的表达情况。结果 HSP70的阳性率为35%(18/52)，其表达与乳腺癌的病理学级别有关(P<0.05)。P53的过度表达率为36.5%(19/52)，其表达与乳腺癌的病理学级别有关(P<0.05)。在52例乳腺癌中，P53的过度表达和HSP70的表达具有一定的相关性(P<0.05)。结论 HSP70和P53在乳腺癌中的相关性提示HSP70可能参与P53的代谢；HSP70和P53表达程度与肿瘤的恶性程度有关。
, http://www.100md.com
中图法分类号 R737.902
Expression of Heat Shock Protein 70 and P53 in Human Primary Breast Cancer and It's Significance
Dong Liang, Shen Dan, Feng Yizhong
(Department of Pathology,Suzhou University,Suzhou,215007)
Abstract Purpose The expression of heat shock protein 70(HSP70)、P53 tumor suppressor genes protein was studied and its relations to the pathogenesis of the human breast cancer.Methods Fifty two specimens of primary breast cancer,2 of fibroadenoma and 2 of normal breast tissue were studied with SP immunohistochemical techniques.Results The positivity rate of HSP70 was 35%(18/52),and the expression of HSP70 was in accordance with the increase of histological grades,with significant difference (P<0.05).The rate of overexpression of P53 protein was 36.5%(19/52),and was in accordance with the increasing grade of breast cancer malignancy,showing significant difference (P<0.05).In 52 cases of primary breast cancer,there was statistically significant correlation between the expression of HSP70 and overpression of P53 protein (P<0.05).Conclusions The results suggest HSP70 and P53 play a role in oncogenesis and progression of breast cancer in some degree.HSP70 may be involved in the metabolism of P53.The detection of these gene proteins may be helpful in determing the histological grades and prognosis of breast cancer.
, 百拇医药
Key words breast cancer;HSP70;P53;immunohistochemitry
热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)是在热诱导下合成的一组具有高度保守性的蛋白质，与肿瘤的发生增殖及分化有关[1]。其蛋白种类繁多，HSP70是热休克蛋白家族中的一员。有研究[2]发现，多种肿瘤中有HSP70的表达。并且还发现HSP70与抑癌基因P53关系密切[3]。目前国内有关乳腺癌中HSP70与P53的研究尚少见。现将研究结果报道于下。
1 材料与方法
1.1 病例 选用苏医附一院、附二院普外科1998～1999年间临床资料完备的乳腺癌手术标本52例，均为女性患者。其中，浸润性导管癌43例，导管内癌、腺样囊性癌、浸润性小叶癌、粘液癌、未分类癌各1例，乳头状癌、髓样癌各2例，按照病理学分级，Ⅰ级16例，Ⅱ级24例，Ⅲ级12例；年龄33～77岁，平均年龄50.2岁。另外，以5例乳腺腺瘤和5例正常乳腺作对照。
, 百拇医药
1.2 方法 标本以10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，分别作HE和SP免疫组化法染色，已知阳性片作阳性对照。HSP70以细胞中细胞浆或细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞，切片中阳性细胞>10%为阳性。P53的过度表达参照Bames等提出的基于3个参数的半定量计数方法，即染色强度、阳性细胞数和两者记分的乘积，进行判断，依次分为阴性、弱阳性、阳性、强阳性。构成比及率的差别用x2检验。
2 结果
2.1 HSP70与P53的表达 见附表。HSP70与P53阳性细胞在乳腺癌的组织中均散在或小片状分布，HSP70阳性颗粒位于胞核或胞浆中，P53阳性颗粒主要分布于细胞核。在正常乳腺组织和乳腺腺癌组织中，HSP70与P53表达均为阴性。
2.2 HSP70表达和P53过度表达的关系 52例乳腺癌中，HSP70阳性的18例中，P53阳性10例，阴性8例；而HSP70阴性的34例中，P53阳性9例，阴性25例。两者相比有显著性差异(P<0.05)。 附表 52例乳腺癌中HSP70和P53的表达
, http://www.100md.com
n
HSP70
P值
P53
P值
阳性
阴性
阳性
阴性
年龄
≥50岁
27
6
21
, 百拇医药
>0.05
12
15
>0.05
<50岁
25
12
13
7
18
肿瘤分级
Ⅰ
16
, 百拇医药 3
13
4
12
Ⅱ
24
7
17
<0.05
8
16
<0.05
Ⅲ
12
, http://www.100md.com
8
4
7
5
肿瘤分类
浸润性导管癌
43
15
28
>0.05
15
28
>0.05
, http://www.100md.com 其他类型*
9
3
6
4
5
*包括导管内癌、腺样囊性癌、浸润性小叶癌、粘液癌、未分为癌各1例，乳头状癌、髓样癌各2例
3 讨论
有研究[4]表明，HSP70与恶性肿瘤的关系密切，参与控制肿瘤细胞的增生和凋亡。本实验运用免疫组织化学方法研究乳腺癌中的HSP70的表达，HSP70阳性率为35%，与国外的报道[5]相近。同时我们的实验数据显示HSP70与肿瘤病理学分级呈正相关，随着乳腺癌分化程度的降低，HSP70的阳性率明显升高，提示HSP70与乳腺癌的恶性程度有关。同样，Lazaris[6]等也发现，HSP70与乳腺癌的低分化有关。由此可见，HSP70在乳腺癌的发生发展中扮演了一定的角色。HSP70可以发挥其分子伴侣作用，防止异常蛋白积聚产生异常折叠，维持细胞的自稳态，使细胞维持增生状态免于凋亡。
, 百拇医药
本实验发现，52例乳腺癌中P53过度表达率36.5%，与其他报道[7]的结果相近。另外，本研究结果还显示，P53的过度表达与乳腺癌的分级有关，并且有统计学意义(P<0.05)。说明随着肿瘤恶性程度的增加，突变型P53在肿瘤细胞中积累也逐渐增多。突变型P53可以通过显性抑制效应使野生型P53失活[8]。本实验结果提示突变型P53是细胞恶变的指标，P53在乳腺癌的发生发展中起一定的作用。
HSP70和P53都被认为在肿瘤的发生、发展中起一定的作用。HSP70的基因表达调控机制十分复杂。Agoff[3]的研究表明，野生型P53可以通过与CCAAT结合因子(CBF)来抑制HSP70的基因转录。突变型P53可改变野生型P53-CBF结合体，从而使HSP70基因的转录不受抑制。突变型P53能被HSP70蛋白选择性结合成稳定的复合物，使核内P53蛋白转运到细胞浆中，丧失控制细胞增殖的负调控能力[9]。此外，突变型P53与野生型P53相比较，结构上发生一定改变，便无法激活HSP70内在的ATP酶活性，这样就使突变型P53不能转变为野生型P53。于是，HSP70与P53就会在细胞内积累下来[10]。我们的实验结果显示，HSP70与P53在乳腺癌中的表达呈正相关，并且两者都与乳腺癌的病理组织学分级有关，随着乳腺癌恶性程度的增高而HSP70和P53的阳性率也提高。提示HSP70可能通过参与P53的代谢而在肿瘤的发生和发展中起作用。
, http://www.100md.com
董亮，硕士研究生；沈丹，导师
参考文献
1，Koyasu S,Nishida E,Kadoeaki T,et al.Two mammalian heat shock proteins,HSP90 and HSP100,are actin-binding proteins.Pro Natl Acad Sci USA,1986,83∶8054
2，内藤善哉，乔炎，浅野五郎.热休克蛋白在乳腺癌中的作用.中华病理学杂志.1998，27∶35
3，Agoff NS,Hou J,Linzer DIH,et al.Regulation of the human HSP70 promoter by P53.Science,1993,259∶84
4，Wei YQ,Zhao X,Kariya Y,et al.Inhibition of proliferation and induction of apoptosis by abrogation of heat shock protein (HSP) 70 expression in tumor cells.Cancer Immunol Immunother,1995,40(2)∶73
, 百拇医药
5，Vargas,Rioig LM,Fanelli MA,et al.Heat shock proteins and cell proliferation in human breast cancer biopsy samples.Cancer Detect Prev,1997,21(5)∶441
6，Lazaris Ach,Chatzigianni EB,Panoussopoulos D,et al.Prolifetating cell nuclear antigen and heat shock protein 70 immunolocolization in invasive ductal breast cancer not otherwise specified.Breast Res Treat,1997,43(1)∶43
7，Ostrowski JL,Sawan A,Henry L,et al.P53 expession in human breast cancer related to survival and prognostic factors:An immunohistochemical study.J pathol,1991,164∶75
, 百拇医药
8，Rotter V,Prokoimer M.P53 and human malignancies.Adv Cancer Res,1991,57∶257
9，Finlay CA,Hinds PW,Tan TH,et al.Activating mutations for transformation by P53 produce a gene product that forms an hsc70-P53 complex with an altered half-life.Mol Cell Biol,1988,8(2)∶531
10，Hainaut P,Milner J.Interaction of heat shock protein 70 with P53 translated in vitro:evidence for interaction with dimeric P53 and for a role in the regulation of P53 conformation.EMBOJ,1992,11(10)∶3513
2000年6月30日收稿, http://www.100md.com