鼻咽癌患者鼻咽组织和血清中EBV检测
作者：利显民 杨成章 陈佩君 苏治联 宋源
单位：利显民(深圳市宝安人民医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518101)；杨成章(同济医科大学附属协和医院耳鼻咽喉科)；陈佩君(深圳市宝安人民医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518101)；苏治联(深圳市宝安人民医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518101)；宋源(深圳市宝安人民医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518101)
关键词：鼻咽癌；爱泼斯坦-巴尔病毒；聚合酶链反应
临床耳鼻咽喉科杂志000906 摘要 目的：比较血清爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)抗体滴定度测定与癌组织EBV基因组检测对鼻咽癌(NPC)的诊断价值。方法：146例患者采用双盲法测定血清EBV-VCA-IgA、EBV-EA-IgA和活检组织EBV-DNA(PCR)。全组病例按活检病理检查结果分为：NPC组，非NPC组(对照组)。结果：NPC组中EBV-DNA(PCR)，EBV-VCA-IgA和EBV-EA-IgA 的阳性率分别为90.8%，75.0%和26.3%；对照组上述检测的阳性率分别为2.9%，38.6%和2.9%。其差别均有显著性意义(P<0.005)。结论：EBV-DNA(PCR)检测对NPC的诊断具有灵敏度高和特异性强的特点。
, 百拇医药
Assay of Epstein-Barr virus in nasopharyngeal tissues and serum
of patients with nasopharyngeal carcinoma
LI Xian-min CHEN Pei-jun SU Zhi-lian SONG Yuan
(Department of Otolaryngology,Baoan People's Hospital,Shenzhen 518101)
YANG Cheng-zhang
(Department of Otolaryngology,Union Hospital of Tongji Medical University)
, 百拇医药
Abstract Objective: Epstein-Barr virus(EBV) is associated with nasopharyngeal carcinoma(NPC).Determination of EBV-VCA-IgA,EBV-EA-IgA in serum and assay of EBV DNA (PCR) in biopsy tissue has been used for diagnosis of NPC.This paper evaluated the value of the three determinations for diagnosis of NPC.Method:146 patients were investigated.For each patient determination of EBV-VCA-IgA,EBV-EA-IgA in serum and EBV-DNA (PCR) in biopsy tissue were performed with double-blind studies,of 146 patients,76 were NPC and 70 non nasopharyngeal carcinoma as control,identifiedwith histopathological examination.The differences of the determinations between NPC and control were compared statistically with χ2-test.Result:Of 76 NPC,the positive rates of EBV-DNA (PCR),EBV-VCA-IgA and EBV-EA-IgA were 90.8%,75.0% and 26.3% respectivelly.For 70 control cases,the positive rates 2.9%,38.6% and 2.9% respectivelly (P<0.005).Conclusion:Our results suggested that assay of EBV-DNA (PCR) has better sensitivity and specificity than EBV-VCA-IgA and EBV-EA-IgA for diagnosis of NPC.
, 百拇医药
Key words Nasopharyngeal carcinoma Epstein-Barr virus Polymerase chain reaction
鼻咽癌(NPC)患者血清中爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)抗体滴定度增高，推测NPC与EBV感染有关〔1〕；测定血清EBV-VCA-IgA和EBV-EA-IgA滴定度作为NPC辅助诊断指标，亦见于文献报道。我国大多数人在幼年时期感染了EBV，因此血清EBV抗体测定对NPC 诊断的特异性不高，可能出现假阳性。采用聚合酶链反应(PCR) 技术，在NPC癌组织中可检测到EBV基因组存在，近年来已将这一发现应用于NPC诊断的临床实践〔2，3〕。本文目的是比较血清EBV抗体滴定度测定与癌组织EBV基因组检测对NPC 的诊断价值。
1 资料与方法
1.1 临床资料
, http://www.100md.com
征集来自四川和广东的患者，每例患者双盲法同时进行血清EBV-VCA-IgA(以下称VCA-IgA)， EBV-EA-IgA(以下称EA-IgA)及其它临床检查。活检标本一份送病理检查，另一份送EBV-DNA(PCR法)检测。 全组被测对象共146例，按活检病理检查结果分类(表1)：鼻咽癌组76例，男53例，女23例，年龄16～74岁；非鼻咽癌组(对照组)70例，男42例，女28例，年龄23～71岁。
表1 鼻咽癌组及对照组活检病理检查结果 鼻咽癌组
对照组
病理诊断
例数
病理诊断
例数
低分化鳞癌
, 百拇医药
73
鼻咽慢性炎症
32
泡状核细胞型
3
鼻咽肉芽肿性炎症
4
颈淋巴结核
5
腺样囊性癌
3
咽部溃疡
3
, 百拇医药
正常鳞状上皮
21
1.2 方法
血清EBV抗体滴定度检测：静脉取血，立即分离血清，4～8℃保存，1周内完成测定。VCA-IgA及EA-IgA测定采用免疫酶法EBV-IgA 检测试剂盒(卫生部上海生物制品研究所出品)，并按试剂盒使用说明书进行操作。
EBV-DNA检测：活检标本，-20℃保存。 采用华美生物工程公司经销的EBV-DNA-PCR试剂盒并按使用说明书操作。DNA扩增采用美国PE公司TC480型DNA扩增仪。
2 结果
鼻咽癌组及对照组血清EBV抗体滴定度和组织EBV-DNA 检测结果见表2。
, http://www.100md.com 表2 鼻咽癌组及对照组血清EBV抗体滴定度和组织EBV-DNA检测结果 分组
阳性
阴性
合计
阳性率/%
鼻咽癌组
EBV-DNA(PCR)
69
7
76
90.8
EBV-VCA-IgA
, http://www.100md.com
57
19
76
75.0
EBV-EA-IgA
20
56
76
26.3
对照组
EBV-DNA(PCR)
2
68
, 百拇医药
70
2.9
EBV-VCA-IgA
27
43
70
38.6
EBV-EA-IgA
2
68
70
2.9
血清VCA-IgA≥1∶10，EA-IgA≥1∶5者为阳性，低于上述数值者为阴性。表2可见，鼻咽癌组以EBV-DNA阳性率最高，VCA-IgA次之，EA-IgA 阳性率最低，差异有显著性意义(P<0.005)。对照组以VCA-IgA阳性率最高，而EBV-DNA和EA-IgA阳性率最低，其差异有显著性意义(P<0.005)。
, 百拇医药
3 讨论
目前临床用于检测EBV的方法有：血清EBV抗体滴定度测定和采用分子生物学技术检测EBV-DNA基因组。
血清EBV抗体滴定度测定的指标是VCA-IgA和EA-IgA。曾毅〔1〕发现，NPC患者在诊断确定前8～30个月， 血清中已有VCA-IgA存在。在流行病学中，可用血清VCA-IgA滴定度测定的指标筛选被查人群中NPC患者。 此项测定用于NPC临床诊断方面，亦有参考价值，但可能出现假阳性。Sham〔2〕于1988年对我国广东省年龄为30～59岁的67 819例健康者进行调查，结果发现VCA-IgA升高者有6 102例(9.0%)。VCA-IgA阳性人群中，活检证实为NPC者48例， 仅为阳性人群的0.8%。可见VCA-IgA对NPC 诊断的特异性较差。EA-IgA对NPC特异性较好，但阳性率低〔1〕。
, 百拇医药 分子生物学技术的发展，促进了EBV-DNA基因组检测的临床应用。Yeung等〔4〕对45例组织病理学证实为NPC和12例证实为非NPC的活检组织标本用原位杂交法检测EBV基因组，结果发现：45例NPC标本中100%检测到EBV基因存在，而12例非NPC标本中均未检测到EBV基因组。NPC 标本的癌旁组织或外观正常的上皮，很少检测到病毒基因。Choi等〔5〕用Southern印渍杂交和PCR法对 36 例组织病理证实的NPC进行检测，结果发现均有EBV基因。Chao等〔3〕用针对EBV-DNA的EBERs作为探针，采用原位杂交法对21例NPC和150例对照病例进行观察，结果发现：21例NPC癌组织 100%检测到EBERs表达。150例对照组中的20例正常组织，13例良性肿瘤和10例反应性淋巴病变组织，全部为EBERs表达阴性；其余107例中，除1例胃癌，2例非霍奇金淋巴瘤和1例霍奇金淋巴瘤检测到EBERs阳性表达外，其它非NPC恶性肿瘤均为EBERs表达阴性。Tsai等〔6〕对107例 NPC患者和61例非癌症患者的鼻咽组织，用PCR法检测EBV-DNA，结果发现：此种检测方法对NPC的灵敏度为91%(NPC组的阳性率)；特异性为89%(对照组的阴性率)。
, http://www.100md.com
本组病例检测结果与文献资料一致。NPC癌组织中，EBV-DNA的阳性率高(90.8%)，而对照组EBV-DNA的阴性率高(97.1%)，亦即假阳性率低(2.9%)。血清EBV抗体测定,NPC组VCA-IgA阳性率亦较高(75.0%)，但对照组的假阳性率高(38.5%)。NPC组EA-IgA的阳性率低(26.3%)，而对照组的阴性率高(97.1%)，即假阳性率低(2.9%)。综上所述，EBV-DNA检测对NPC的诊断具有比血清EBV抗体滴定灵敏度高(NPC阳性率高)和特异性强(对照组阴性率高)的特点。
参考文献
1，曾毅.鼻咽癌的检测和早期诊断.中华耳鼻咽喉科杂志，1987，22：145～147
2，Sham T S T, Wei W I, Zong Y S, et al.Detection of subclinical nasopharyngeal carcinoma by fibreoptic endoscopy and multiple biopsy.Lancet, 1990,335：371～374
, 百拇医药
3，Chao T Y,Chow K C,Chang J Y,et al.Expression of Epstein-Barr virus encoded RNAs as a marker for metastatic undifferentiated nasopharyngeal carcinoma.Cancer,1996,78：24～29
4，Yeung W M,Zong Y S,Chiu C T,et al.Epstein-Barr virus carrige by nasopharyngeal carcinoma in situ.Int J Cancer,1993，53：746～750
5，Choi P H K,Suen M W M,Huang D P,et al.Nasopharyngeal carcinoma:Genetic changes,Epstein-Barr virus infection of both. Cancer,1993,72:2873～2878
6，Tsai S T,Jin Y T,Mann R B,et al.Epstein-Barr virus detection in nasopharyngeal tissues of patients with suspected nasopharyngeal carcinoma.Cancer,1998,82:1449～1453
(收稿 1999-12-10), 百拇医药
单位：利显民(深圳市宝安人民医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518101)；杨成章(同济医科大学附属协和医院耳鼻咽喉科)；陈佩君(深圳市宝安人民医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518101)；苏治联(深圳市宝安人民医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518101)；宋源(深圳市宝安人民医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518101)
关键词：鼻咽癌；爱泼斯坦-巴尔病毒；聚合酶链反应
临床耳鼻咽喉科杂志000906 摘要 目的：比较血清爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)抗体滴定度测定与癌组织EBV基因组检测对鼻咽癌(NPC)的诊断价值。方法：146例患者采用双盲法测定血清EBV-VCA-IgA、EBV-EA-IgA和活检组织EBV-DNA(PCR)。全组病例按活检病理检查结果分为：NPC组，非NPC组(对照组)。结果：NPC组中EBV-DNA(PCR)，EBV-VCA-IgA和EBV-EA-IgA 的阳性率分别为90.8%，75.0%和26.3%；对照组上述检测的阳性率分别为2.9%，38.6%和2.9%。其差别均有显著性意义(P<0.005)。结论：EBV-DNA(PCR)检测对NPC的诊断具有灵敏度高和特异性强的特点。
, 百拇医药
Assay of Epstein-Barr virus in nasopharyngeal tissues and serum
of patients with nasopharyngeal carcinoma
LI Xian-min CHEN Pei-jun SU Zhi-lian SONG Yuan
(Department of Otolaryngology,Baoan People's Hospital,Shenzhen 518101)
YANG Cheng-zhang
(Department of Otolaryngology,Union Hospital of Tongji Medical University)
, 百拇医药
Abstract Objective: Epstein-Barr virus(EBV) is associated with nasopharyngeal carcinoma(NPC).Determination of EBV-VCA-IgA,EBV-EA-IgA in serum and assay of EBV DNA (PCR) in biopsy tissue has been used for diagnosis of NPC.This paper evaluated the value of the three determinations for diagnosis of NPC.Method:146 patients were investigated.For each patient determination of EBV-VCA-IgA,EBV-EA-IgA in serum and EBV-DNA (PCR) in biopsy tissue were performed with double-blind studies,of 146 patients,76 were NPC and 70 non nasopharyngeal carcinoma as control,identifiedwith histopathological examination.The differences of the determinations between NPC and control were compared statistically with χ2-test.Result:Of 76 NPC,the positive rates of EBV-DNA (PCR),EBV-VCA-IgA and EBV-EA-IgA were 90.8%,75.0% and 26.3% respectivelly.For 70 control cases,the positive rates 2.9%,38.6% and 2.9% respectivelly (P<0.005).Conclusion:Our results suggested that assay of EBV-DNA (PCR) has better sensitivity and specificity than EBV-VCA-IgA and EBV-EA-IgA for diagnosis of NPC.
, 百拇医药
Key words Nasopharyngeal carcinoma Epstein-Barr virus Polymerase chain reaction
鼻咽癌(NPC)患者血清中爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)抗体滴定度增高，推测NPC与EBV感染有关〔1〕；测定血清EBV-VCA-IgA和EBV-EA-IgA滴定度作为NPC辅助诊断指标，亦见于文献报道。我国大多数人在幼年时期感染了EBV，因此血清EBV抗体测定对NPC 诊断的特异性不高，可能出现假阳性。采用聚合酶链反应(PCR) 技术，在NPC癌组织中可检测到EBV基因组存在，近年来已将这一发现应用于NPC诊断的临床实践〔2，3〕。本文目的是比较血清EBV抗体滴定度测定与癌组织EBV基因组检测对NPC 的诊断价值。
1 资料与方法
1.1 临床资料
, http://www.100md.com
征集来自四川和广东的患者，每例患者双盲法同时进行血清EBV-VCA-IgA(以下称VCA-IgA)， EBV-EA-IgA(以下称EA-IgA)及其它临床检查。活检标本一份送病理检查，另一份送EBV-DNA(PCR法)检测。 全组被测对象共146例，按活检病理检查结果分类(表1)：鼻咽癌组76例，男53例，女23例，年龄16～74岁；非鼻咽癌组(对照组)70例，男42例，女28例，年龄23～71岁。
表1 鼻咽癌组及对照组活检病理检查结果 鼻咽癌组
对照组
病理诊断
例数
病理诊断
例数
低分化鳞癌
, 百拇医药
73
鼻咽慢性炎症
32
泡状核细胞型
3
鼻咽肉芽肿性炎症
4
颈淋巴结核
5
腺样囊性癌
3
咽部溃疡
3
, 百拇医药
正常鳞状上皮
21
1.2 方法
血清EBV抗体滴定度检测：静脉取血，立即分离血清，4～8℃保存，1周内完成测定。VCA-IgA及EA-IgA测定采用免疫酶法EBV-IgA 检测试剂盒(卫生部上海生物制品研究所出品)，并按试剂盒使用说明书进行操作。
EBV-DNA检测：活检标本，-20℃保存。 采用华美生物工程公司经销的EBV-DNA-PCR试剂盒并按使用说明书操作。DNA扩增采用美国PE公司TC480型DNA扩增仪。
2 结果
鼻咽癌组及对照组血清EBV抗体滴定度和组织EBV-DNA 检测结果见表2。
, http://www.100md.com 表2 鼻咽癌组及对照组血清EBV抗体滴定度和组织EBV-DNA检测结果 分组
阳性
阴性
合计
阳性率/%
鼻咽癌组
EBV-DNA(PCR)
69
7
76
90.8
EBV-VCA-IgA
, http://www.100md.com
57
19
76
75.0
EBV-EA-IgA
20
56
76
26.3
对照组
EBV-DNA(PCR)
2
68
, 百拇医药
70
2.9
EBV-VCA-IgA
27
43
70
38.6
EBV-EA-IgA
2
68
70
2.9
血清VCA-IgA≥1∶10，EA-IgA≥1∶5者为阳性，低于上述数值者为阴性。表2可见，鼻咽癌组以EBV-DNA阳性率最高，VCA-IgA次之，EA-IgA 阳性率最低，差异有显著性意义(P<0.005)。对照组以VCA-IgA阳性率最高，而EBV-DNA和EA-IgA阳性率最低，其差异有显著性意义(P<0.005)。
, 百拇医药
3 讨论
目前临床用于检测EBV的方法有：血清EBV抗体滴定度测定和采用分子生物学技术检测EBV-DNA基因组。
血清EBV抗体滴定度测定的指标是VCA-IgA和EA-IgA。曾毅〔1〕发现，NPC患者在诊断确定前8～30个月， 血清中已有VCA-IgA存在。在流行病学中，可用血清VCA-IgA滴定度测定的指标筛选被查人群中NPC患者。 此项测定用于NPC临床诊断方面，亦有参考价值，但可能出现假阳性。Sham〔2〕于1988年对我国广东省年龄为30～59岁的67 819例健康者进行调查，结果发现VCA-IgA升高者有6 102例(9.0%)。VCA-IgA阳性人群中，活检证实为NPC者48例， 仅为阳性人群的0.8%。可见VCA-IgA对NPC 诊断的特异性较差。EA-IgA对NPC特异性较好，但阳性率低〔1〕。
, 百拇医药 分子生物学技术的发展，促进了EBV-DNA基因组检测的临床应用。Yeung等〔4〕对45例组织病理学证实为NPC和12例证实为非NPC的活检组织标本用原位杂交法检测EBV基因组，结果发现：45例NPC标本中100%检测到EBV基因存在，而12例非NPC标本中均未检测到EBV基因组。NPC 标本的癌旁组织或外观正常的上皮，很少检测到病毒基因。Choi等〔5〕用Southern印渍杂交和PCR法对 36 例组织病理证实的NPC进行检测，结果发现均有EBV基因。Chao等〔3〕用针对EBV-DNA的EBERs作为探针，采用原位杂交法对21例NPC和150例对照病例进行观察，结果发现：21例NPC癌组织 100%检测到EBERs表达。150例对照组中的20例正常组织，13例良性肿瘤和10例反应性淋巴病变组织，全部为EBERs表达阴性；其余107例中，除1例胃癌，2例非霍奇金淋巴瘤和1例霍奇金淋巴瘤检测到EBERs阳性表达外，其它非NPC恶性肿瘤均为EBERs表达阴性。Tsai等〔6〕对107例 NPC患者和61例非癌症患者的鼻咽组织，用PCR法检测EBV-DNA，结果发现：此种检测方法对NPC的灵敏度为91%(NPC组的阳性率)；特异性为89%(对照组的阴性率)。
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本组病例检测结果与文献资料一致。NPC癌组织中，EBV-DNA的阳性率高(90.8%)，而对照组EBV-DNA的阴性率高(97.1%)，亦即假阳性率低(2.9%)。血清EBV抗体测定,NPC组VCA-IgA阳性率亦较高(75.0%)，但对照组的假阳性率高(38.5%)。NPC组EA-IgA的阳性率低(26.3%)，而对照组的阴性率高(97.1%)，即假阳性率低(2.9%)。综上所述，EBV-DNA检测对NPC的诊断具有比血清EBV抗体滴定灵敏度高(NPC阳性率高)和特异性强(对照组阴性率高)的特点。
参考文献
1，曾毅.鼻咽癌的检测和早期诊断.中华耳鼻咽喉科杂志，1987，22：145～147
2，Sham T S T, Wei W I, Zong Y S, et al.Detection of subclinical nasopharyngeal carcinoma by fibreoptic endoscopy and multiple biopsy.Lancet, 1990,335：371～374
, 百拇医药
3，Chao T Y,Chow K C,Chang J Y,et al.Expression of Epstein-Barr virus encoded RNAs as a marker for metastatic undifferentiated nasopharyngeal carcinoma.Cancer,1996,78：24～29
4，Yeung W M,Zong Y S,Chiu C T,et al.Epstein-Barr virus carrige by nasopharyngeal carcinoma in situ.Int J Cancer,1993，53：746～750
5，Choi P H K,Suen M W M,Huang D P,et al.Nasopharyngeal carcinoma:Genetic changes,Epstein-Barr virus infection of both. Cancer,1993,72:2873～2878
6，Tsai S T,Jin Y T,Mann R B,et al.Epstein-Barr virus detection in nasopharyngeal tissues of patients with suspected nasopharyngeal carcinoma.Cancer,1998,82:1449～1453
(收稿 1999-12-10), 百拇医药