己糖激酶法校正谷丙转氨酶测定系数
康辉 白艳平 刘允桂
摘 要 目的：用己糖激酶法校正谷丙转氨酶(ALT)活性测定系数(K factor)。方法：应用日立-7150全自动生化分析仪及上海长征生化试剂，在ALT的测定程度下，通过葡萄糖浓度与还原型辅酶Ⅰ(NADH)吸光度的变化关系，计算ALT的K factor。结果：在ALT项目上测定K factor为1883，比理论K factor为1746高7.85%。结论：测定K factor比计算K factor更为准确。
关键词：己糖激酶 谷丙转氨酶 酶活性测定系数
全国检验科全自动生化分析仪几十种、近千台，应用试剂种类近百家，如何保证各个检验科结果的一致性，是实验室标准化的根本任务。对于酶活性测定来说，不同分析仪的酶活性测定系数是保证酶活性测定结果一致的关键。
酶活性单位是指在底物浓度、pH值、温度及其它条件相对恒定的情况下，酶在1 min内催化1 μmol底物完全转化的量称为1个酶国际单位(IU)[1]。底物的转化可以通过吸光度变化来表达，假定吸光度为A、摩尔消光系数为ε(l.mol-1.cm-1)、底物浓度为C、光径为l(cm)，则根据朗伯-比尔定律：
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A = ε.c.l ①
则单位时间内底物浓度的变化量为：
②
设定Vs为样品量(μl)、Vr为试剂量(μl)，则样品中酶活性[2]：
③
在生化分析仪上，将公式③中与ΔA/min相乘的部分称为酶活性测定系数(K factor)，表示为：
④
, 百拇医药
所以，在生化分析仪中计算机通过测定单位时间内吸光度的变化量(ΔA/min)，再与K factor相乘，即刻得到酶活性值，操作简便、快捷。所以，K factor的准确与否，直接影响酶活性测定值的准确度。因此各个实验室酶活性结果的一致性取决于K factor计算的准确度。
1 材料与方法
1.1 仪器 日立-7150全自动生化分析仪
1.2 试剂 上海长征试剂公司葡萄糖(Glu)试剂(己糖激酶法)；北京化工试剂所葡萄糖标准液(5.55 mmol/L)。
1.3 方法 试验程序如表1。
表1 ALT程序
Tab.1 ALT parameter
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项 目
日常工程序
测定K factor程序
项目名称
ALT
ALT(K factor)
测光方式
Rate-A
1-Point
测光时间
1～3 min
10 min
, 百拇医药
样品用量
25 μl
25 μl
试剂用量
250 μl
250 μl
主波长
340 nm
340 nm
副波长
405 nm
405 nm
在测定K factor程序中，样品为不同浓度的葡萄糖标准液，试剂为己糖激酶法的葡萄糖试剂；为得到原始吸光度，将程序[Monitor Job]的[3.Calibration List]中ALT项目调整：S1ABS为0、K为10 000。
, 百拇医药
因为己糖激酶法样品与试剂比为1∶150，而ALT测定的样品与试剂比为1∶10，故将5.55 mmol/L葡萄糖标准液稀释为0.37 mmol/L、0.555 mmol/L、1.11 mmol/L 3种浓度分别测定5次。
1.4计算
设定Glu标准液浓度为Cs、吸光度为As；空白吸光度为Ab，则由公式①代入：
⑤
将公式⑤代入④公式：
⑥
由公式⑥可见，显色物替代法计算的K factor，与ε、Vs、Vr、l不直接相关，通过Cs、As、Ab就可以计算K factor。
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2 结果
将每份标准液的5次吸光度计算平均值，代入公式⑥得到3个实测K factor，计算K factor均值，见表2[3]。
表2 ALT酶K factor计算表
Tab.2 ALT K factor calculator
序号
吸光度(×10-4)
Blank
0.37 mmol/L
0.555 mmol/L
1.11 mmol/L
, http://www.100md.com
1
239
2233
3151
6149
2
236
2234
3112
6173
3
237
2224
, http://www.100md.com
3141
6148
4
239
2229
3152
6138
5
239
2227
3142
6137
平均值
, http://www.100md.com
238
2229
3140
6149
As-Ab
1991
2902
5911
K factor
1858
1913
1878
K factor均值
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1883
3 讨论
计算K factor有如下几种方法：(1)物理化学测量法：分别测量Vs、Vr、l及ε后，按公式④计算K factor，但专门测定ε的设备昂贵且操作复杂，一般实验室不能进行。(2)理论计算值：是目前国内最常用的方法。抛开影响ε的因素，按显色物质固有的ε与Vs、Vr、l代入公式④，得到理论K factor。(3)应用宝灵曼公司推出的全项目校正液，通过仪器校正后得到K factor。(4)应用反应显色物替代法实际测定K factor[4]。
所谓反应显色物替代法是指利用酶联反应终末显色物的浓度变化来计算K factor。例如：ALT酶联反应终末显色物为还原型辅酶I(NADH)，那么可以用纯品已知浓度的NADH溶液，按照ALT的程序加入比色杯内，测定吸光度的变化，从而推算ALT 的K factor。但是，NADH本身极易氧化，纯品难得，故很难完成校正。然而，通过显色物替代反应——己糖激酶法，应用已知Glu浓度与终末显色物NADH的变化关系也可以计算出ALT的K factor。
, 百拇医药
表2计算结果显示：ALT测定K factor为1883。理论K factor为1764，前者较后者高7.85%。根据我室参加RANDOX国际质评结果及全国室间质控报告，应用测定K factor计算的ALT酶活性值比理论K factor的测定值更准确、更接近靶值。所以应用测定K factor可以帮助实验室调整测定ALT的准确性；同时更利于协调不同仪器上测定ALT的准确性，增强仪器间结果的可比性，为实验室标准化奠定基础。
康辉(中国医科大学第一临床学院检验科，沈阳 110001)
白艳平(沈阳市武警总队医院检验科)
刘允桂(中国医科大学第一临床学院检验科，沈阳 110001)
参考文献
1，朱忠勇主编.实用医学检验学.北京：人民军医出版社，1992.325～326
2，石田浩二.酵素活性测定の实测K ファクタによる检量.检查と技术，1993，21(5)：223～227
3，大贯经一. 装置定数法による实测K值の求めかた.检查と技术，1991，19(9)：767～769
4，石田浩二. 自动分析装置における酵素活性の检量系数の算出法.检查と技术，1988，16(4)：325～329, 百拇医药
摘 要 目的：用己糖激酶法校正谷丙转氨酶(ALT)活性测定系数(K factor)。方法：应用日立-7150全自动生化分析仪及上海长征生化试剂，在ALT的测定程度下，通过葡萄糖浓度与还原型辅酶Ⅰ(NADH)吸光度的变化关系，计算ALT的K factor。结果：在ALT项目上测定K factor为1883，比理论K factor为1746高7.85%。结论：测定K factor比计算K factor更为准确。
关键词：己糖激酶 谷丙转氨酶 酶活性测定系数
全国检验科全自动生化分析仪几十种、近千台，应用试剂种类近百家，如何保证各个检验科结果的一致性，是实验室标准化的根本任务。对于酶活性测定来说，不同分析仪的酶活性测定系数是保证酶活性测定结果一致的关键。
酶活性单位是指在底物浓度、pH值、温度及其它条件相对恒定的情况下，酶在1 min内催化1 μmol底物完全转化的量称为1个酶国际单位(IU)[1]。底物的转化可以通过吸光度变化来表达，假定吸光度为A、摩尔消光系数为ε(l.mol-1.cm-1)、底物浓度为C、光径为l(cm)，则根据朗伯-比尔定律：
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A = ε.c.l ①
则单位时间内底物浓度的变化量为：
②设定Vs为样品量(μl)、Vr为试剂量(μl)，则样品中酶活性[2]：
③在生化分析仪上，将公式③中与ΔA/min相乘的部分称为酶活性测定系数(K factor)，表示为：
④, 百拇医药
所以，在生化分析仪中计算机通过测定单位时间内吸光度的变化量(ΔA/min)，再与K factor相乘，即刻得到酶活性值，操作简便、快捷。所以，K factor的准确与否，直接影响酶活性测定值的准确度。因此各个实验室酶活性结果的一致性取决于K factor计算的准确度。
1 材料与方法
1.1 仪器 日立-7150全自动生化分析仪
1.2 试剂 上海长征试剂公司葡萄糖(Glu)试剂(己糖激酶法)；北京化工试剂所葡萄糖标准液(5.55 mmol/L)。
1.3 方法 试验程序如表1。
表1 ALT程序
Tab.1 ALT parameter
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项 目
日常工程序
测定K factor程序
项目名称
ALT
ALT(K factor)
测光方式
Rate-A
1-Point
测光时间
1～3 min
10 min
, 百拇医药
样品用量
25 μl
25 μl
试剂用量
250 μl
250 μl
主波长
340 nm
340 nm
副波长
405 nm
405 nm
在测定K factor程序中，样品为不同浓度的葡萄糖标准液，试剂为己糖激酶法的葡萄糖试剂；为得到原始吸光度，将程序[Monitor Job]的[3.Calibration List]中ALT项目调整：S1ABS为0、K为10 000。
, 百拇医药
因为己糖激酶法样品与试剂比为1∶150，而ALT测定的样品与试剂比为1∶10，故将5.55 mmol/L葡萄糖标准液稀释为0.37 mmol/L、0.555 mmol/L、1.11 mmol/L 3种浓度分别测定5次。
1.4计算
设定Glu标准液浓度为Cs、吸光度为As；空白吸光度为Ab，则由公式①代入：
⑤将公式⑤代入④公式：
⑥由公式⑥可见，显色物替代法计算的K factor，与ε、Vs、Vr、l不直接相关，通过Cs、As、Ab就可以计算K factor。
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2 结果
将每份标准液的5次吸光度计算平均值，代入公式⑥得到3个实测K factor，计算K factor均值，见表2[3]。
表2 ALT酶K factor计算表
Tab.2 ALT K factor calculator
序号
吸光度(×10-4)
Blank
0.37 mmol/L
0.555 mmol/L
1.11 mmol/L
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1
239
2233
3151
6149
2
236
2234
3112
6173
3
237
2224
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3141
6148
4
239
2229
3152
6138
5
239
2227
3142
6137
平均值
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238
2229
3140
6149
As-Ab
1991
2902
5911
K factor
1858
1913
1878
K factor均值
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1883
3 讨论
计算K factor有如下几种方法：(1)物理化学测量法：分别测量Vs、Vr、l及ε后，按公式④计算K factor，但专门测定ε的设备昂贵且操作复杂，一般实验室不能进行。(2)理论计算值：是目前国内最常用的方法。抛开影响ε的因素，按显色物质固有的ε与Vs、Vr、l代入公式④，得到理论K factor。(3)应用宝灵曼公司推出的全项目校正液，通过仪器校正后得到K factor。(4)应用反应显色物替代法实际测定K factor[4]。
所谓反应显色物替代法是指利用酶联反应终末显色物的浓度变化来计算K factor。例如：ALT酶联反应终末显色物为还原型辅酶I(NADH)，那么可以用纯品已知浓度的NADH溶液，按照ALT的程序加入比色杯内，测定吸光度的变化，从而推算ALT 的K factor。但是，NADH本身极易氧化，纯品难得，故很难完成校正。然而，通过显色物替代反应——己糖激酶法，应用已知Glu浓度与终末显色物NADH的变化关系也可以计算出ALT的K factor。
, 百拇医药
表2计算结果显示：ALT测定K factor为1883。理论K factor为1764，前者较后者高7.85%。根据我室参加RANDOX国际质评结果及全国室间质控报告，应用测定K factor计算的ALT酶活性值比理论K factor的测定值更准确、更接近靶值。所以应用测定K factor可以帮助实验室调整测定ALT的准确性；同时更利于协调不同仪器上测定ALT的准确性，增强仪器间结果的可比性，为实验室标准化奠定基础。
康辉(中国医科大学第一临床学院检验科，沈阳 110001)
白艳平(沈阳市武警总队医院检验科)
刘允桂(中国医科大学第一临床学院检验科，沈阳 110001)
参考文献
1，朱忠勇主编.实用医学检验学.北京：人民军医出版社，1992.325～326
2，石田浩二.酵素活性测定の实测K ファクタによる检量.检查と技术，1993，21(5)：223～227
3，大贯经一. 装置定数法による实测K值の求めかた.检查と技术，1991，19(9)：767～769
4，石田浩二. 自动分析装置における酵素活性の检量系数の算出法.检查と技术，1988，16(4)：325～329, 百拇医药