实验性面神经麻痹次级突触间隙扫描电镜观察
任重 石阳 谷贺
摘 要 目的：探讨面神经麻痹面肌运动点的兴奋性与运动终板次级突触间隙的关系。方法：制作面神经麻痹模型，应用盐酸消化法制作口轮匝肌扫描电镜标本进行观察。结果：压榨10 s组次级突触间隙隙沟数量比对照侧减少而变浅。压榨30 s组次级突触间隙隙沟明显减少和平坦。结论：运动点失神经支配程度表明次级突触间隙病变程度，也表明面神经受损伤程度。
关键词：面神经麻痹 次级突触间隙 病理学
次级突触间隙(secondary synaptic space, SSS)是神经肌结合部运动终板肌膜上的构造，SSS上的乙酰胆硷受体接受乙酰胆硷分子，引起肌膜上电位发生，表现出运动点的兴奋性。面神经受损伤时，运动点的兴奋性下降。可能与SSS也发生病理变化有关。我们制作了面神经不同损伤程度的面神经麻痹实验模型，应用扫描电镜观察口轮匝肌SSS的病理变化，报道如下。
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1 材料与方法
1.1 面神经麻痹实验模型制作
使用550～900 g的豚鼠，用戊巴比妥30 mg/kg
腹腔内注射麻醉后，仰卧位固定，0.5%利多卡因局部追加麻醉，在手术显微镜下切开颞骨骨泡，用钻石钻磨开，显露面神经的水平段和垂直段，在镫骨肌支上约2 mm处面神经上置200 μm直径的钨制双极刺激电极，用定电压刺激装置(SANEI 3F36)以0.1 ms脉冲宽度的矩形波的最大刺激阈值，单发刺激面神经。将直径200 μm的双极钨针电极直接刺入口轮匝肌，导出的动作电位通过增幅仪(SANEI 180)、平均加算装置(SANEI 7SO6)及X-Y记录仪描记。
首先描记20只豚鼠面神经压榨前口轮匝肌神经电图(ENoG)的最大振幅动作电位，并记录刺激阈值。然后用压强7.84×106 Pa微型持针器压榨镫骨肌支下约2 mm处的面神经。压榨持续时间10 s组10只，30 s组10只，每只非实验侧作为正常对照侧。在行扫描电镜标本制作前分别用压榨前刺激阈值测试每只豚鼠口轮匝肌动作电位。
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1.2 扫描电镜标本制作
应用盐酸组织消化法[1]将压榨实验后30 d和60 d的10 s组、30 s组各5只豚鼠经3%戊二醛灌流固定后，分别摘除实验侧和对照侧口轮匝肌，再经2%锇酸固定。然后在8 mol/L HCl 60℃环境下经约30 min处理去掉结缔组织，经脱水、浸透、干燥、喷金供扫描电镜观察。
2 结果
2.1 ENoG振幅比值
扫描电镜标本制作前ENoG振幅与对照侧振幅平均百分比值：面神经压榨后30 d 10 s组5只平均振幅比值23.8%，30 s组5只平均8.2%；60 d 10 s组5只平均45.6%，30 s组5只平均8.3%。
2.2 SSS观察
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对照侧SSS隙沟数量多而深(图1)。压榨面神经后第30 d 10 s组SSS隙沟数量(图2)比对照侧SSS隙沟数量少而浅；30 s组SSS(图3)隙沟数量比对侧SSS隙沟数量明显减少而且平滑，也比10 s组SSS隙沟数量少和平滑。
压榨面神经第60 d 10 s组SSS(图4)隙沟比对侧SSS隙沟数量虽然仍然少而浅，但比30 d 10 s组SSS隙沟的数量有所增加。而60 d 30 s组隙沟仍然比对侧SSS隙沟的数量明显减少和平滑，与30 d 30 s组SSS无明显改变。
图1 正常豚鼠口轮匝肌次级突触间隙，隙沟多而深 × 2 000
Fig. 1 There were many deep grooves in the second synaptic space of musculus orbicularis oris of normal guinea pigs × 2 000
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图2 压榨10 s 30 d组豚鼠口轮匝肌次级突触间隙，隙沟较正常侧明显减少 × 2 000
Fig. 2 There were much less grooves in the second synaptic space of musculus oricularis oris of guinea pigs in the 30 d group compressed for 10 s ×2 000
图3 压榨30 s 30 d组豚鼠口轮匝肌次级突触间隙，隙沟明显减少而又平滑 × 2 000
Fig. 3 There were much less grooves in the second synaptic space of musculus oricularis oris of guinea pigs in the 30 d group compressed for 30 s and the grooves were smooth × 2 000
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图4 压榨10 s 60 d组豚鼠口轮匝肌次级突触间隙较10 s 30 d组隙沟增加且加深 × 2 000
Fig. 4 There were more grooves in the second synaptic space of musculus oricularis oris of guinea pigs in the 60 d group compressed for 10 s than those in the 30 d group compressed for 10 s and the grooves were deeper × 2 000
3 讨论
强度-时间(strength-duration, S-D)曲线阈值测试是测试运动点的兴奋性，根据阈值测试结果判断失神经支配程度，按照失神经支配程度来进行预后诊断，制定治疗方案。运动点的失神经支配程度取决于运动终板的状况。SSS面积大表明乙酰胆硷受体多，能多量接受乙酰胆硷分子，引起肌膜上大电位发生，显示运动点兴奋性高。本文结果显示面神经受损伤程度重，SSS隙沟数量减少并平坦，也就是面积减少，乙酰胆硷受体也减少，不能多量接受乙酰胆硷分子，运动点的兴奋性下降。因此，运动点S-D曲线阈值测试结果可以直接反映面神经受损伤程度，是预后诊断的重要检查方法[2]。
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用各种持续矩形波刺激神经末梢分布于肌肉中的部分(即运动点)，把引起肌挛缩的最小电流值当作时程函数，即可得到S-D曲线[3]。在正常肌肉中，神经支配较肌纤维本身兴奋性阈值低，当兴奋性传至运动神经末端的运动终板时，SSS接受乙酰胆硷分子，引起肌膜上电位发生，使肌肉收缩。在运动终板以前的失神经支配，只需提高方形脉冲电刺激的持续时间和电流量，即可引起肌收缩。当面神经出现重度失神经支配时，只能依靠刺激肌纤维本身兴奋性发生反应，故必须有持续的刺激才能引起收缩。这就说明面神经重度失神经支配，神经末端运动终板SSS也不能多量接受乙酰胆硷分子引起肌膜上电位发生，而兴奋性减低。本实验30 s组的SSS隙沟很少，几乎平滑，表明SSS内含有乙酰胆硷受体量很少，故运动点的兴奋性很低，需刺激肌纤维本身才能发生兴奋性反应。因此，S-D曲线阈值测试，即可以了解面神经失神经支配程度，又可以了解运动点的受伤性。根据运动点失神经支配程度可以判断面神经麻痹预后，又可以了解麻痹恢复过程。本实验10 s 60 d组的SSS比30 d组SSS的病变有所恢复，运动点的兴奋性也会提高。同时60 d的ENoG振幅比30 d的ENoG振幅明显增大。说明面神经的兴奋性和运动点的兴奋性有所恢复。也表明面神经和运动终板SSS是一有密切联系的整体体系。面神经失神经支配程度重，运动点失神经支配程度也重。也就是说通过运动点的失神经支配程度测试可以了解面神经损伤程度，进行预后判断[4]。
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国家自然科学基金资助项目，39670779
任重(中国医科大学第一临床学院耳鼻咽喉科，沈阳 110001)
石阳(中国医科大学第一临床学院耳鼻咽喉科，沈阳 110001)
谷贺(中国医科大学第一临床学院耳鼻咽喉科，沈阳 110001)
参考文献
1，Desaki J, Uehara Y. The overall morphology of neuromuscular junctions as revealed by scanning electron microscopy. J Neurocytol, 1981,10:101—104
2，久木元延生，相矶研一，鹤町昌之, 他.口轮筋S-D曲线を用いた颜面神经麻痹の预后诊断.Japan Society of Facial Nerve Research, 1987,7:31_34
3，柳原尚明，西村宏子.颜面神经麻痹における电气诊断法の意义—その1.耳鼻咽喉科临床，1963，62：561—566
4，岸 拓三.强さ*时间曲线と神经兴奋性检查の相关について.耳鼻咽喉科临床，1981，27：228—235, 百拇医药
摘 要 目的：探讨面神经麻痹面肌运动点的兴奋性与运动终板次级突触间隙的关系。方法：制作面神经麻痹模型，应用盐酸消化法制作口轮匝肌扫描电镜标本进行观察。结果：压榨10 s组次级突触间隙隙沟数量比对照侧减少而变浅。压榨30 s组次级突触间隙隙沟明显减少和平坦。结论：运动点失神经支配程度表明次级突触间隙病变程度，也表明面神经受损伤程度。
关键词：面神经麻痹 次级突触间隙 病理学
次级突触间隙(secondary synaptic space, SSS)是神经肌结合部运动终板肌膜上的构造，SSS上的乙酰胆硷受体接受乙酰胆硷分子，引起肌膜上电位发生，表现出运动点的兴奋性。面神经受损伤时，运动点的兴奋性下降。可能与SSS也发生病理变化有关。我们制作了面神经不同损伤程度的面神经麻痹实验模型，应用扫描电镜观察口轮匝肌SSS的病理变化，报道如下。
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1 材料与方法
1.1 面神经麻痹实验模型制作
使用550～900 g的豚鼠，用戊巴比妥30 mg/kg
腹腔内注射麻醉后，仰卧位固定，0.5%利多卡因局部追加麻醉，在手术显微镜下切开颞骨骨泡，用钻石钻磨开，显露面神经的水平段和垂直段，在镫骨肌支上约2 mm处面神经上置200 μm直径的钨制双极刺激电极，用定电压刺激装置(SANEI 3F36)以0.1 ms脉冲宽度的矩形波的最大刺激阈值，单发刺激面神经。将直径200 μm的双极钨针电极直接刺入口轮匝肌，导出的动作电位通过增幅仪(SANEI 180)、平均加算装置(SANEI 7SO6)及X-Y记录仪描记。
首先描记20只豚鼠面神经压榨前口轮匝肌神经电图(ENoG)的最大振幅动作电位，并记录刺激阈值。然后用压强7.84×106 Pa微型持针器压榨镫骨肌支下约2 mm处的面神经。压榨持续时间10 s组10只，30 s组10只，每只非实验侧作为正常对照侧。在行扫描电镜标本制作前分别用压榨前刺激阈值测试每只豚鼠口轮匝肌动作电位。
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1.2 扫描电镜标本制作
应用盐酸组织消化法[1]将压榨实验后30 d和60 d的10 s组、30 s组各5只豚鼠经3%戊二醛灌流固定后，分别摘除实验侧和对照侧口轮匝肌，再经2%锇酸固定。然后在8 mol/L HCl 60℃环境下经约30 min处理去掉结缔组织，经脱水、浸透、干燥、喷金供扫描电镜观察。
2 结果
2.1 ENoG振幅比值
扫描电镜标本制作前ENoG振幅与对照侧振幅平均百分比值：面神经压榨后30 d 10 s组5只平均振幅比值23.8%，30 s组5只平均8.2%；60 d 10 s组5只平均45.6%，30 s组5只平均8.3%。
2.2 SSS观察
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对照侧SSS隙沟数量多而深(图1)。压榨面神经后第30 d 10 s组SSS隙沟数量(图2)比对照侧SSS隙沟数量少而浅；30 s组SSS(图3)隙沟数量比对侧SSS隙沟数量明显减少而且平滑，也比10 s组SSS隙沟数量少和平滑。
压榨面神经第60 d 10 s组SSS(图4)隙沟比对侧SSS隙沟数量虽然仍然少而浅，但比30 d 10 s组SSS隙沟的数量有所增加。而60 d 30 s组隙沟仍然比对侧SSS隙沟的数量明显减少和平滑，与30 d 30 s组SSS无明显改变。
图1 正常豚鼠口轮匝肌次级突触间隙，隙沟多而深 × 2 000
Fig. 1 There were many deep grooves in the second synaptic space of musculus orbicularis oris of normal guinea pigs × 2 000
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图2 压榨10 s 30 d组豚鼠口轮匝肌次级突触间隙，隙沟较正常侧明显减少 × 2 000
Fig. 2 There were much less grooves in the second synaptic space of musculus oricularis oris of guinea pigs in the 30 d group compressed for 10 s ×2 000
图3 压榨30 s 30 d组豚鼠口轮匝肌次级突触间隙，隙沟明显减少而又平滑 × 2 000
Fig. 3 There were much less grooves in the second synaptic space of musculus oricularis oris of guinea pigs in the 30 d group compressed for 30 s and the grooves were smooth × 2 000
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图4 压榨10 s 60 d组豚鼠口轮匝肌次级突触间隙较10 s 30 d组隙沟增加且加深 × 2 000
Fig. 4 There were more grooves in the second synaptic space of musculus oricularis oris of guinea pigs in the 60 d group compressed for 10 s than those in the 30 d group compressed for 10 s and the grooves were deeper × 2 000
3 讨论
强度-时间(strength-duration, S-D)曲线阈值测试是测试运动点的兴奋性，根据阈值测试结果判断失神经支配程度，按照失神经支配程度来进行预后诊断，制定治疗方案。运动点的失神经支配程度取决于运动终板的状况。SSS面积大表明乙酰胆硷受体多，能多量接受乙酰胆硷分子，引起肌膜上大电位发生，显示运动点兴奋性高。本文结果显示面神经受损伤程度重，SSS隙沟数量减少并平坦，也就是面积减少，乙酰胆硷受体也减少，不能多量接受乙酰胆硷分子，运动点的兴奋性下降。因此，运动点S-D曲线阈值测试结果可以直接反映面神经受损伤程度，是预后诊断的重要检查方法[2]。
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用各种持续矩形波刺激神经末梢分布于肌肉中的部分(即运动点)，把引起肌挛缩的最小电流值当作时程函数，即可得到S-D曲线[3]。在正常肌肉中，神经支配较肌纤维本身兴奋性阈值低，当兴奋性传至运动神经末端的运动终板时，SSS接受乙酰胆硷分子，引起肌膜上电位发生，使肌肉收缩。在运动终板以前的失神经支配，只需提高方形脉冲电刺激的持续时间和电流量，即可引起肌收缩。当面神经出现重度失神经支配时，只能依靠刺激肌纤维本身兴奋性发生反应，故必须有持续的刺激才能引起收缩。这就说明面神经重度失神经支配，神经末端运动终板SSS也不能多量接受乙酰胆硷分子引起肌膜上电位发生，而兴奋性减低。本实验30 s组的SSS隙沟很少，几乎平滑，表明SSS内含有乙酰胆硷受体量很少，故运动点的兴奋性很低，需刺激肌纤维本身才能发生兴奋性反应。因此，S-D曲线阈值测试，即可以了解面神经失神经支配程度，又可以了解运动点的受伤性。根据运动点失神经支配程度可以判断面神经麻痹预后，又可以了解麻痹恢复过程。本实验10 s 60 d组的SSS比30 d组SSS的病变有所恢复，运动点的兴奋性也会提高。同时60 d的ENoG振幅比30 d的ENoG振幅明显增大。说明面神经的兴奋性和运动点的兴奋性有所恢复。也表明面神经和运动终板SSS是一有密切联系的整体体系。面神经失神经支配程度重，运动点失神经支配程度也重。也就是说通过运动点的失神经支配程度测试可以了解面神经损伤程度，进行预后判断[4]。
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国家自然科学基金资助项目，39670779
任重(中国医科大学第一临床学院耳鼻咽喉科，沈阳 110001)
石阳(中国医科大学第一临床学院耳鼻咽喉科，沈阳 110001)
谷贺(中国医科大学第一临床学院耳鼻咽喉科，沈阳 110001)
参考文献
1，Desaki J, Uehara Y. The overall morphology of neuromuscular junctions as revealed by scanning electron microscopy. J Neurocytol, 1981,10:101—104
2，久木元延生，相矶研一，鹤町昌之, 他.口轮筋S-D曲线を用いた颜面神经麻痹の预后诊断.Japan Society of Facial Nerve Research, 1987,7:31_34
3，柳原尚明，西村宏子.颜面神经麻痹における电气诊断法の意义—その1.耳鼻咽喉科临床，1963，62：561—566
4，岸 拓三.强さ*时间曲线と神经兴奋性检查の相关について.耳鼻咽喉科临床，1981，27：228—235, 百拇医药