重组人红细胞生成素对维持性血液透析患者抗感染免疫功能的影响
免疫功能的影响
董群 田亚非
摘 要 目的 探讨重组人红细胞生成素(r-HuEPO)对维持性血液透析(MHD)患者抗感染免疫功能的影响。方法 选取17例MHD患者于静脉注射r-HuEPO前和注射后取血清检测白介素2(IL-2)、可溶性白介素2受体(sIL-2R)、白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子( (TNF-α)的含量和测血液中T淋巴细胞亚群的比例。另取13例未注射r-HuEPO治疗的MHD患者作为对照。结果 r-HuEPO可提高MHD患者血清IL-2的含量、CD+4 T细胞的比例、CD4/CD8的比值；降低血清sIL-2R、IL-1和TNF-α的含量。但对CD+8细胞比例、血清IL-6的含量没有明显的影响。结论 r-HuEPO在改善贫血的同时可通过改变血清中细胞因子的含量、血中T细胞亚群的比例来增强机体的抗感染免疫功能。
, 百拇医药
关键词：重组人红细胞生成素 维持性血液透析 细胞因子 T细胞亚群
重组人红细胞生成素(r-HuEPO)与人天然红细胞生成素具有相同的氨基酸序列和促进骨髓中红系祖细胞的增殖和分化的效应[1]。现已有报道显示r-HuEPO能通过提高红细胞数目和改善红细胞免疫粘附功能，使机体免疫功能得以改善[2]。也有研究表明给维持性血液透析(MHD)患者注射r-HuEPO后，可降低感染发生率，并使感染人数明显减少[3]。其抗感染的机制如何？至今尚未见有关报道。众所周知，机体抗感染能力的增强主要体现在免疫防御功能的增强。为此，该实验试图通过检测MHD患者血清白介素2(IL-2) 、可溶性白介素2受体(sIL-2R)的含量和血中T细胞亚群的比例来了解r-HuEPO对细胞免疫功能的影响，检测血清中单核-巨噬细胞分泌的与炎症有关的介质如白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量，来进一步探讨r-HuEPO抗感染的机制。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 检测对象 17例MHD患者，男11例，女6例，年龄范围26～71岁。均为芜湖市第二人民医院血透室患者(每周透析2～3次)。作为治疗组(r-HuEPO组)。同时设13例(每周透析2～3次)未经注射r-HuEPO治疗的MHD患者作为对照组(control组)，男10例，女3例，年龄范围23～76岁。
1.2 试剂与方法
1.2.1 r-HuEPO注射液 每ml含r-HuEPO 2 000 IU, 山东永铭伟沃生物药业有限公司生产，批号：9812033，批准文号：国药准字(1998)鲁赛诺S-01。治疗方法：每周100～150 IU.kg-1体重，分2～3次iv。当患者红细胞压积上升至30%，血红蛋白升至100 g.L-1时改用维持量，即为治疗剂量的2/3，维持红细胞压积和血红蛋白量在适当水平。于治疗前和治疗后(红细胞压积和血红蛋白升至上述水平1 mon后)检测各项指标。对照组也于同期抽血进行检测。
, 百拇医药
1.2.2 血清IL-2、 sIL-2R的检测 IL-2试剂盒、sIL-2R试剂盒购自北京军事医学科学院基础研究所，以双抗体夹心ELISA法检测。终止后于450 nm处测OD值。结果与相应的标准曲线比较测定，以μg.L-1、kU.L-1表示。
1.2.3 血清IL-1、IL-6、TNF-α的检测 IL-1试剂盒、IL-6试剂盒、TNF-α试剂盒购自邦定生物医学公司。采用ELISA双抗体夹心法。终止后于490 nm处测OD值。结果与相应的标准曲线比较，以μg.L-1表示。
1.2.4 T淋巴细胞亚群的测定 T淋巴细胞亚群试剂盒购自邦定生物医学公司。采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)法。
1.2.5 数据统计学处理 各种检测数据均采用t检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 r-HuEPO对MDH患者血清IL-2和sIL-2R含量的影响 从表1可知，经r-HuEPO治疗的MHD患者血清IL-2含量较治疗前明显增高(P<0.05)，sIL-2R水平较治疗前明显下降(P<0.05)；未经r-HuEPO治疗组(对照组)在此期内血清IL-2含量无明显变化，而sIL-2R水平明显下降(P<0.05)。
Tab 1 The effects of r-HuEPO on serum levels of IL-2 and sIL-2R of patients with MHD (X±s)
Group
n
IL-2/μg.L-1
, 百拇医药
sIL-2R/kU.L-1
before treatment
after treatment
before treatment
after treatment
r-HuEPO
17
11.42±5.87
15.63±2.67*
232.34±80.12
, 百拇医药
187.45±68.65*
Control
13
11.65±3.64
12.42±3.31
253.98±130.31
213.67±109.23*
*P<0.05 vs before treatmentTab 2 The effects of r-HuEPO on T-lymphocyte subsets of patients with MHD (X±s)
Group
, 百拇医药
n
CD3/%
CD4/%
CD8/%
CD4/CD8
r-HuEPO before treatment
17
58.38±12.91
36.81±8.75
26.63±8.72
1.38
, 百拇医药
r-HuEPO after treatment
17
57.32±8.25
42.67±9.23*
23.45±6.92
1.82*
Control before treatment
13
61.37±8.85
34.93±6.97
27.98±9.21
, 百拇医药
1.25
Control after treatment
13
59.26±11.45
37.04±7.92
28.67±8.54
1.29
*P<0.05 vs before treatmentTab 3 The effects of r-HuEPO on serum levels of IL-1 ,IL-6 and TNF-α of patients with MHD(X±s)
Group
, http://www.100md.com
n
IL-1/μg.L-1
IL-6/μg.L-1
TNF-α/μg.L-1
r-HuEPO before treatment
17
514.72±216.23
909.17±231.67
4.14±0.79
r-HuEPO after treatment
, 百拇医药
17
327.45±123.45*
1038.32±432.12
2.97±0.85*
Control before treatment
13
421.48±312.46
865.24±178.94
3.77±1.01
Control after treatment
, http://www.100md.com
13
389.87±221.35
773.45±297.43
4.41±0.75
*P<0.05 vs before treatment2.2 r-HuEPO对MDH患者T淋巴细胞亚群的影响 MHD患者用r-HuEPO治疗前、后CD3 T细胞含量与对照组相比差异无显著性,治疗后CD+4 T细胞、CD4/CD8比值与治疗前相比差异有显著性(P<0.05)。CD+8T细胞在治疗后虽有所下降，但经统计学处理差异无显著性(见表2)。
2.3 r-HuEPO对MDH患者血清IL-1、IL-6和TNF-α含量的影响 r-HuEPO可明显降低MHD患者血清IL-1、TNF-α的含量，与治疗前相比差异有显著性(P<0.05)；虽然从数值上看，能提高MHD患者血清IL-6的含量，但在统计学上无意义。未用r-HuEPO组(对照组)血清IL-1、IL-6和TNF-α的含量无显著变化。见表3。
, 百拇医药
3 讨论
MHD患者的细胞免疫功能存在多方面的紊乱，表现为末梢淋巴细胞数显著减少，IL-2活性和干扰素诱生水平明显降低[4]。一般认为单次透析可短暂改善患者的免疫功能，而长期血透无助于MHD患者免疫功能的改善。
本研究表明，MHD患者经r-HuEPO治疗后，在贫血状态被缓解后，CD+4 T细胞数明显增高，CD4/CD8比值相应增高，同时CD+4 T细胞分泌IL-2的量也相应增高，促使机体免疫功能的增强，其抗感染能力也相应增强。可以解释张国华等[3]报道结果。
sIL-2R的水平可反映体液中单个核细胞活性状态。r-HuEPO却促使MHD患者血清sIL-2R的水平下降，显示其抑制单个核细胞的活性。
, 百拇医药
IL-1、IL-6和TNF-α是由活化的单核-巨噬细胞分泌的细胞因子，在炎症过程中起一定的作用。r-HuEPO可降低MHD患者血清IL-1和TNF-α的含量，对于缓解炎症引起的损伤、抗感染起一定的作用。
从r-HuEPO对MHD患者血清 sIL-2R、IL-1、TNF含量的影响情况，表明r-HuEPO在增强机体免疫功能的同时，又抑制单个核细胞的活性及分泌相应的炎性介质。这是否可提示其有一定的免疫调节作用，值得商榷。
总之，以上的实验结果说明，r-HuEPO在改善贫血的同时，可通过改变血清中细胞因子的含量、血中T细胞亚群的比例来改善机体的免疫功能，增强机体的抗感染能力。
作者简介：董群，女，44岁，教授，硕士生导师，主要从事免疫学研究工作
董群(皖南医学院微生物学教研室，芜湖 241001)
, 百拇医药
田亚非(安徽省芜湖市第二人民医院肾内科, 芜湖 241000)
参考文献
1.李开龙，朱妙珍. 重组人红细胞生成素在肾性贫血中的应用进展， 国外医药合成药、生化药、制剂分册，1997；18(2)：83～7
2.李 军，罗季安，方建珍. 促红细胞生成素对尿毒症患者红细胞免疫功能的影响.中国实验临床免疫学杂志，1997；9(3)：51～3
3.张国华，侯凡凡，张 训. 重组人EPO对维持血透患者感染发生率的影响，中华内科杂志，1997；36(5)：332～3
4.戴 勇，余 瑛，唐世聪 et al. 维持性血液透析病人NK-IL-IFN-γ系统的动态观察.中华肾脏病杂志，1995；11(1)：6～8, 百拇医药
董群 田亚非
摘 要 目的 探讨重组人红细胞生成素(r-HuEPO)对维持性血液透析(MHD)患者抗感染免疫功能的影响。方法 选取17例MHD患者于静脉注射r-HuEPO前和注射后取血清检测白介素2(IL-2)、可溶性白介素2受体(sIL-2R)、白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子( (TNF-α)的含量和测血液中T淋巴细胞亚群的比例。另取13例未注射r-HuEPO治疗的MHD患者作为对照。结果 r-HuEPO可提高MHD患者血清IL-2的含量、CD+4 T细胞的比例、CD4/CD8的比值；降低血清sIL-2R、IL-1和TNF-α的含量。但对CD+8细胞比例、血清IL-6的含量没有明显的影响。结论 r-HuEPO在改善贫血的同时可通过改变血清中细胞因子的含量、血中T细胞亚群的比例来增强机体的抗感染免疫功能。
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关键词：重组人红细胞生成素 维持性血液透析 细胞因子 T细胞亚群
重组人红细胞生成素(r-HuEPO)与人天然红细胞生成素具有相同的氨基酸序列和促进骨髓中红系祖细胞的增殖和分化的效应[1]。现已有报道显示r-HuEPO能通过提高红细胞数目和改善红细胞免疫粘附功能，使机体免疫功能得以改善[2]。也有研究表明给维持性血液透析(MHD)患者注射r-HuEPO后，可降低感染发生率，并使感染人数明显减少[3]。其抗感染的机制如何？至今尚未见有关报道。众所周知，机体抗感染能力的增强主要体现在免疫防御功能的增强。为此，该实验试图通过检测MHD患者血清白介素2(IL-2) 、可溶性白介素2受体(sIL-2R)的含量和血中T细胞亚群的比例来了解r-HuEPO对细胞免疫功能的影响，检测血清中单核-巨噬细胞分泌的与炎症有关的介质如白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量，来进一步探讨r-HuEPO抗感染的机制。
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1 材料与方法
1.1 检测对象 17例MHD患者，男11例，女6例，年龄范围26～71岁。均为芜湖市第二人民医院血透室患者(每周透析2～3次)。作为治疗组(r-HuEPO组)。同时设13例(每周透析2～3次)未经注射r-HuEPO治疗的MHD患者作为对照组(control组)，男10例，女3例，年龄范围23～76岁。
1.2 试剂与方法
1.2.1 r-HuEPO注射液 每ml含r-HuEPO 2 000 IU, 山东永铭伟沃生物药业有限公司生产，批号：9812033，批准文号：国药准字(1998)鲁赛诺S-01。治疗方法：每周100～150 IU.kg-1体重，分2～3次iv。当患者红细胞压积上升至30%，血红蛋白升至100 g.L-1时改用维持量，即为治疗剂量的2/3，维持红细胞压积和血红蛋白量在适当水平。于治疗前和治疗后(红细胞压积和血红蛋白升至上述水平1 mon后)检测各项指标。对照组也于同期抽血进行检测。
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1.2.2 血清IL-2、 sIL-2R的检测 IL-2试剂盒、sIL-2R试剂盒购自北京军事医学科学院基础研究所，以双抗体夹心ELISA法检测。终止后于450 nm处测OD值。结果与相应的标准曲线比较测定，以μg.L-1、kU.L-1表示。
1.2.3 血清IL-1、IL-6、TNF-α的检测 IL-1试剂盒、IL-6试剂盒、TNF-α试剂盒购自邦定生物医学公司。采用ELISA双抗体夹心法。终止后于490 nm处测OD值。结果与相应的标准曲线比较，以μg.L-1表示。
1.2.4 T淋巴细胞亚群的测定 T淋巴细胞亚群试剂盒购自邦定生物医学公司。采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)法。
1.2.5 数据统计学处理 各种检测数据均采用t检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 r-HuEPO对MDH患者血清IL-2和sIL-2R含量的影响 从表1可知，经r-HuEPO治疗的MHD患者血清IL-2含量较治疗前明显增高(P<0.05)，sIL-2R水平较治疗前明显下降(P<0.05)；未经r-HuEPO治疗组(对照组)在此期内血清IL-2含量无明显变化，而sIL-2R水平明显下降(P<0.05)。
Tab 1 The effects of r-HuEPO on serum levels of IL-2 and sIL-2R of patients with MHD (X±s)
Group
n
IL-2/μg.L-1
, 百拇医药
sIL-2R/kU.L-1
before treatment
after treatment
before treatment
after treatment
r-HuEPO
17
11.42±5.87
15.63±2.67*
232.34±80.12
, 百拇医药
187.45±68.65*
Control
13
11.65±3.64
12.42±3.31
253.98±130.31
213.67±109.23*
*P<0.05 vs before treatmentTab 2 The effects of r-HuEPO on T-lymphocyte subsets of patients with MHD (X±s)
Group
, 百拇医药
n
CD3/%
CD4/%
CD8/%
CD4/CD8
r-HuEPO before treatment
17
58.38±12.91
36.81±8.75
26.63±8.72
1.38
, 百拇医药
r-HuEPO after treatment
17
57.32±8.25
42.67±9.23*
23.45±6.92
1.82*
Control before treatment
13
61.37±8.85
34.93±6.97
27.98±9.21
, 百拇医药
1.25
Control after treatment
13
59.26±11.45
37.04±7.92
28.67±8.54
1.29
*P<0.05 vs before treatmentTab 3 The effects of r-HuEPO on serum levels of IL-1 ,IL-6 and TNF-α of patients with MHD(X±s)
Group
, http://www.100md.com
n
IL-1/μg.L-1
IL-6/μg.L-1
TNF-α/μg.L-1
r-HuEPO before treatment
17
514.72±216.23
909.17±231.67
4.14±0.79
r-HuEPO after treatment
, 百拇医药
17
327.45±123.45*
1038.32±432.12
2.97±0.85*
Control before treatment
13
421.48±312.46
865.24±178.94
3.77±1.01
Control after treatment
, http://www.100md.com
13
389.87±221.35
773.45±297.43
4.41±0.75
*P<0.05 vs before treatment2.2 r-HuEPO对MDH患者T淋巴细胞亚群的影响 MHD患者用r-HuEPO治疗前、后CD3 T细胞含量与对照组相比差异无显著性,治疗后CD+4 T细胞、CD4/CD8比值与治疗前相比差异有显著性(P<0.05)。CD+8T细胞在治疗后虽有所下降，但经统计学处理差异无显著性(见表2)。
2.3 r-HuEPO对MDH患者血清IL-1、IL-6和TNF-α含量的影响 r-HuEPO可明显降低MHD患者血清IL-1、TNF-α的含量，与治疗前相比差异有显著性(P<0.05)；虽然从数值上看，能提高MHD患者血清IL-6的含量，但在统计学上无意义。未用r-HuEPO组(对照组)血清IL-1、IL-6和TNF-α的含量无显著变化。见表3。
, 百拇医药
3 讨论
MHD患者的细胞免疫功能存在多方面的紊乱，表现为末梢淋巴细胞数显著减少，IL-2活性和干扰素诱生水平明显降低[4]。一般认为单次透析可短暂改善患者的免疫功能，而长期血透无助于MHD患者免疫功能的改善。
本研究表明，MHD患者经r-HuEPO治疗后，在贫血状态被缓解后，CD+4 T细胞数明显增高，CD4/CD8比值相应增高，同时CD+4 T细胞分泌IL-2的量也相应增高，促使机体免疫功能的增强，其抗感染能力也相应增强。可以解释张国华等[3]报道结果。
sIL-2R的水平可反映体液中单个核细胞活性状态。r-HuEPO却促使MHD患者血清sIL-2R的水平下降，显示其抑制单个核细胞的活性。
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IL-1、IL-6和TNF-α是由活化的单核-巨噬细胞分泌的细胞因子，在炎症过程中起一定的作用。r-HuEPO可降低MHD患者血清IL-1和TNF-α的含量，对于缓解炎症引起的损伤、抗感染起一定的作用。
从r-HuEPO对MHD患者血清 sIL-2R、IL-1、TNF含量的影响情况，表明r-HuEPO在增强机体免疫功能的同时，又抑制单个核细胞的活性及分泌相应的炎性介质。这是否可提示其有一定的免疫调节作用，值得商榷。
总之，以上的实验结果说明，r-HuEPO在改善贫血的同时，可通过改变血清中细胞因子的含量、血中T细胞亚群的比例来改善机体的免疫功能，增强机体的抗感染能力。
作者简介：董群，女，44岁，教授，硕士生导师，主要从事免疫学研究工作
董群(皖南医学院微生物学教研室，芜湖 241001)
, 百拇医药
田亚非(安徽省芜湖市第二人民医院肾内科, 芜湖 241000)
参考文献
1.李开龙，朱妙珍. 重组人红细胞生成素在肾性贫血中的应用进展， 国外医药合成药、生化药、制剂分册，1997；18(2)：83～7
2.李 军，罗季安，方建珍. 促红细胞生成素对尿毒症患者红细胞免疫功能的影响.中国实验临床免疫学杂志，1997；9(3)：51～3
3.张国华，侯凡凡，张 训. 重组人EPO对维持血透患者感染发生率的影响，中华内科杂志，1997；36(5)：332～3
4.戴 勇，余 瑛，唐世聪 et al. 维持性血液透析病人NK-IL-IFN-γ系统的动态观察.中华肾脏病杂志，1995；11(1)：6～8, 百拇医药