重组分枝杆菌噬菌体检测分枝杆菌活力的研究
吕斌 徐顺清 符志军 陈志飞 周宜开
关键词：分枝杆菌 活力检测 分枝杆菌噬菌体 重组的可表达荧光素酶的分枝杆菌噬菌体，由于可特异地感染宿主菌——分枝杆菌并在宿主菌中快速增殖，同时表达荧光素酶，因此通过检测荧光素酶的浓度即可快速检测分枝杆菌的活力。本实验比较了温敏噬菌体Phage88和非温敏株Phage40对不同分枝杆菌：卡介苗(BCG)、结核分枝杆菌H37Ra(ATCC25177)、H37Rv(ATCC36801)、耻垢分枝杆菌(M. smegmatis)mc155(ATCC19420)活力测定的灵敏度，并对大肠杆菌(Escherichia coli)(ATCC25922)的发光值进行了测量，以确定该方法的特异性。本实验所用的噬菌体Phage40和Phage88由纽约Albert Einstein University的William Jacobs教授提供。
分枝杆菌噬菌体增殖后，在本实验室确定的最佳发光条件下分别测量30?h内不同噬菌体对不同细菌在不同稀释度下的发光值。所用噬菌体浓度Phage40为PFU=6.1×109/ml，Phage88为PFU=4.8×109/ml。结果发现分枝杆菌的发光值与大肠杆菌相比差异有显著性，大肠杆菌的发光值与阴性对照无差异。表明两种噬菌休均特异地对分枝杆菌有发光反应。在各分枝杆菌中，BCG的发光值最高，mc155次之，H37Ra和H37Rv最低，H37Ra和H37Rv之间的发光值无明显差别(P>0.05)。Phage88在各种分枝杆菌中的发光值均明显高于Phage40。
Phage40对各种分枝杆菌的灵敏度分别为：mc155：9.3×104/ml(最高发光值为20.49)，BCG：4.2×104/ml(最高发光值为41.38)，H37Ra：6.4×105/ml(最高发光值为45.66)，H37Rv：7.6×105/ml(最高发光值为35.19)；Phage88对各种分枝杆菌的灵敏度分别为：mc155：9.3×102/ml(最高发光值为102.8)，BCG：4.2×102/ml(最高发光值为189.5)，H37Ra：6.4×104/ml(最高发光值为32.47)，H37Rv：7.6×104/ml(最高发光值为31.09)。2株噬菌体均特异地对分枝杆菌有发光反应，对非分枝杆菌(如大肠杆菌)的发光值与阴性对照相比差异无显著性(P>0.05)。Phage88对不同分枝杆菌的检测灵敏度均大于Phage40，在同一细菌浓度下Phage88的平均发光值也比Phage40高。Phage88更适合实际应用。但Phage88的增殖要求在37℃以下，增殖的速度与Phage40相比较低，发光反应的时间后移。
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39770679)
作者单位：吕斌(同济医科大学环境医学研究所)
徐顺清(同济医科大学环境医学研究所)
周宜开(同济医科大学环境医学研究所)
符志军(武汉市结核病防治所)
陈志飞(武汉市结核病防治所), http://www.100md.com
关键词：分枝杆菌 活力检测 分枝杆菌噬菌体 重组的可表达荧光素酶的分枝杆菌噬菌体，由于可特异地感染宿主菌——分枝杆菌并在宿主菌中快速增殖，同时表达荧光素酶，因此通过检测荧光素酶的浓度即可快速检测分枝杆菌的活力。本实验比较了温敏噬菌体Phage88和非温敏株Phage40对不同分枝杆菌：卡介苗(BCG)、结核分枝杆菌H37Ra(ATCC25177)、H37Rv(ATCC36801)、耻垢分枝杆菌(M. smegmatis)mc155(ATCC19420)活力测定的灵敏度，并对大肠杆菌(Escherichia coli)(ATCC25922)的发光值进行了测量，以确定该方法的特异性。本实验所用的噬菌体Phage40和Phage88由纽约Albert Einstein University的William Jacobs教授提供。
分枝杆菌噬菌体增殖后，在本实验室确定的最佳发光条件下分别测量30?h内不同噬菌体对不同细菌在不同稀释度下的发光值。所用噬菌体浓度Phage40为PFU=6.1×109/ml，Phage88为PFU=4.8×109/ml。结果发现分枝杆菌的发光值与大肠杆菌相比差异有显著性，大肠杆菌的发光值与阴性对照无差异。表明两种噬菌休均特异地对分枝杆菌有发光反应。在各分枝杆菌中，BCG的发光值最高，mc155次之，H37Ra和H37Rv最低，H37Ra和H37Rv之间的发光值无明显差别(P>0.05)。Phage88在各种分枝杆菌中的发光值均明显高于Phage40。
Phage40对各种分枝杆菌的灵敏度分别为：mc155：9.3×104/ml(最高发光值为20.49)，BCG：4.2×104/ml(最高发光值为41.38)，H37Ra：6.4×105/ml(最高发光值为45.66)，H37Rv：7.6×105/ml(最高发光值为35.19)；Phage88对各种分枝杆菌的灵敏度分别为：mc155：9.3×102/ml(最高发光值为102.8)，BCG：4.2×102/ml(最高发光值为189.5)，H37Ra：6.4×104/ml(最高发光值为32.47)，H37Rv：7.6×104/ml(最高发光值为31.09)。2株噬菌体均特异地对分枝杆菌有发光反应，对非分枝杆菌(如大肠杆菌)的发光值与阴性对照相比差异无显著性(P>0.05)。Phage88对不同分枝杆菌的检测灵敏度均大于Phage40，在同一细菌浓度下Phage88的平均发光值也比Phage40高。Phage88更适合实际应用。但Phage88的增殖要求在37℃以下，增殖的速度与Phage40相比较低，发光反应的时间后移。
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39770679)
作者单位：吕斌(同济医科大学环境医学研究所)
徐顺清(同济医科大学环境医学研究所)
周宜开(同济医科大学环境医学研究所)
符志军(武汉市结核病防治所)
陈志飞(武汉市结核病防治所), http://www.100md.com