p16蛋白和CD44V6在胃癌中的表达及临床意义的研究
作者：张俊华 吕光成
单位：张俊华(丹阳市人民医院，江苏丹阳，212300)；吕光成(苏州大学附属第一医院)
关键词：胃癌；p16蛋白；CD44V6；免疫组织化学
苏州医学院学报001008 摘要 目的 探讨p16蛋白，CD44V6在胃癌的发生发展及转移中的临床意义。方法 应用免疫组织化学方法对46例胃癌及癌旁组织中p16和CD44V6表达进行检测。结果 胃癌组织中p16蛋白阳性率(8/46，21.05%)明显低于癌旁组织中表达率(27/46，58.70%)。而CD44V6在胃癌中的表达率为(71.74%，33/46)，癌旁组织中未见CD44V6表达。两者的表达与年龄、性别、肿癌大小无相关性，而与有无淋巴结转移显著相关。p16与分化程度有显著差异，而CD446则与之无关。在TNM分期中，CD44V6在Ⅲ、Ⅳ期中的表达显著高于Ⅰ期中，而p16在Ⅰ期中的表达率明显高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期中的表达率。p16与CD44V6两者在胃癌中的表达无相关性。但有淋巴结转移组(27例)中，p16阳性表达率3.70%明显低于CD44V6阳性表达率88.89%，且有显著差别(P<0.05)。结论 p16蛋白、CD44V6是胃癌发生发展的重要因素，特别是CD44V6可作为胃癌淋巴结转移的重要指标，p16蛋白、CD44V6可为临床诊断胃癌、判断预后、指导手术提供重要依据。
, 百拇医药
中图法分类号 R735.204
The Expression of p16 Protein and CD44V6 in Gastric Cancer
and Their Significance
Zhang Junhua, Lu Guangchen
(Danyang People's Hospital,Jiangsu Dunyang,212300)
Abstract Objective To study the clinical significance and effect of the expression of p16 protein and CD44V6 in the occurrence and development of gastric carcinomas.Methods p16 protein and CD44V6 expression were detected in 46 specimens of gastric carcinomas and pericarcinoma tissues by the methods of immunohistochemistry.Results The positive rate of p16 protein expression 8/46(21.05%) was significantly lower than that in pericarcinoma tissues 27/46(58.70%).The positive rate of CD44V6 was 33/46(71.74%) in gastric carcinomas,but it was not expressed in pericarcinoma tissues.The positive expression of p16 protein and CD44V6 were correlated with lymph node metastasis of gastric carcinomas.The positive expression of p16 protein were correlated with degree of differentiation and clinical stage.CD44V6 expression was correlated with clinical stage,but not with degree of differentiation.The expression of p16 protein and CD44V6 were not with correlated with sex,age and tumor size.But in the gastric carcinoma with lymph node metastasis,the positive rate of p16 protein (3.70%) was significantly lower than that of CD44V6 (88.89%) (P<0.05).Conclusion The abnormal expressions of p16 protein and CD44V6 were important factors in the occurrence,development of gastric carcinoma,specially CD44V6 was an important index in the lymph node metastasis of gastric carcinoma.So the detection of p16 protein and CD44V6 imply important significance for gastric carcinoma dignosis,pronosis and treatment.
, 百拇医药
Key words gastric carcinoma;p16 protein;CD44V6 immunohistochemistry
胃癌是中国死亡率最高的恶性肿瘤，其发生发展和转移涉及多种基因的异常，其中CD44V6和p16基因变异较为常见，也是目前的研究热点。但研究结果和观点不尽相同，且两者同时在胃癌中的表达情况报道不多。本文检测了胃癌及癌旁组织中p16和CD44V6的表达情况，结合临床病理资料加以分析研究于下。
1 材料和方法
1.1 材料 胃癌(46例中男6例，女20例，平均年龄57.8岁)及其癌旁组织均来自苏医附一院手术标本，术后立即取材，组织经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，分别进行免疫组化和HE染色诊断确定，术前、术中患者均未进行化疗、放疗。
鼠抗p16mAb(F-12)为美国Santa Cruz公司产品，CD44V6mAb为CHEMICON INTERNATIONAL INC公司产品，免疫组化ABC试剂盒及DAB显色剂试剂盒均购于武汉Boster公司。
, 百拇医药
1.2 方法 石蜡切片常规脱蜡至水化。经3%H2O2，室温孵育10min，微波修复抗原室温下冷却后，用1∶10稀释正常血清封闭液(正常山羊血清)封闭非特异性背景染色，室温20min。切片滴加一抗：鼠抗p16mAb(1∶50),CD44V6mAB(1∶50)，4℃过夜，再加入生物素化山羊抗小鼠IgG(1∶1000)10μl孵育30min,加入试剂SABC(1∶80)10μl,混匀后加至切片，37℃20min,DAB显色5～8min。苏木素轻度复染、脱水、透明、封片、观察。阴性对照以PBS代替一抗。阳性对照用已知p16阳性扁桃体组织，已知CD44V6阳性乳癌组织作阳性对照。
1.3 判定标准 p16①)以细胞呈清晰棕色为阳性，且以阳性细胞数所占比例(10个高倍视野)分为+<25%，++25%～50%，+++>50%；②以细胞无棕色或与背景一致的很淡棕色为阴性。CD44V6以胞膜呈棕黄色为阳性，阳性细胞数>10%为阳性表达。
, 百拇医药
2 结果
p16蛋白免疫组化阳性信号为棕色颗粒，大部分定位于胞浆，少部分定位于胞核。CD44V6免疫组化阳性表达于胞膜，为棕黄色。胃癌中p16蛋白表达8/46(21.05%)明显低于癌旁组织中27/46(58.70%)，而CD44V6在胃癌中的表达为33/46(71.74%)，癌旁组织中未见表达。胃癌中p16蛋白，CD44V6表达与肿瘤大小、年龄、性别情况未见明显差异(P>0.05)。p16和CD44V6与胃癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移关系见附表。p16蛋白与分化程度及TNM分期有相关性(P<0.05)。CD44V6与分化程度无关，但与TNM分期相关(P<0.05)。在CD44V6阳性的胃癌中(33例)，p16阳性仅4例(12.12%)，而CD44V6阴性的胃癌中13例，p16阳性4例(30.76%)，两者无差异。在有淋巴结转移组(27例)中，p16蛋白阳性率3.70%(1/27)，CD44V6阳性率88.89%阳性率88.89%(24/27)，两者有显著差别(P<0.05)。
, 百拇医药
附表 p16和CD44V6表达与胃癌病理参数的关系
n
p16
CD44V6
+～+++
-
+
-
淋巴结转
有
27
1(3.70)
26
, 百拇医药
24(88.89)
3
无
19
7(36.84)a
12
9(47.37)a
10
分化程度
高
8
5(62.5)
, 百拇医药 3
6(75)
2
中
13
1(7.69)b
12
9(69.23)
4
低
12
1(8.33)b
11
, 百拇医药
9(75)
3
未
13
1(7.69)b
12
9(69.23)
4
TNM分期
Ⅰ
6
4(66.7)c
2
, http://www.100md.com
2(33.3)c
4
Ⅱ
20
2(10)
18
13(65)
7
ⅢⅣ
20
2(10)
18
18(90)
, 百拇医药
2
a与淋巴结转移组比，P<0.05；b与高分化组比，P<0.05；c与Ⅲ、Ⅳ期比，P<0.05
3 讨论
人类CD44基因定位于11号染色体短臂，有20个高度保守的外显子。完整基因组在染色体DNA上大约跨越50K。CD44基因的外显子按表现方式分为两型：一种是组成型外显子，有10个，其转录片段存在于所有CD44转录子中，称为标准型CD44(CD44S)；一种是V区变异拼接外显子，也有10个，称CD44拼接变异体(CD44V)。CD44V6是一类具有高度异质性的单链膜表面糖蛋白，能介导淋巴细胞归巢，并被认为与细胞的运动，肿瘤的发生发展和侵袭有关。研究发现，人类肿瘤组织普遍存在CD44V的表达紊乱。一般认为，CD44V表达的失控与基因突变有关。体外实验证明，CD44V6的表达是非转移性大鼠胰腺癌细胞株获得转移能力所必需的[1]。研究表明，CD44V6的表达与胃癌侵袭有关，特别是CD44V6的表达在胃癌侵袭和转移过程中起重要作用[2]。文献报道，人类胃癌CD44V6表达率64%～77%，且发现CD44V6阳性表达与胃癌的进展程度有关。辛彦[3]报道晚期胃癌CD44V6的检出率明显高于早、中期胃癌，伴淋巴转移及肝转移者CD44V6检出率亦明显高于不伴转移者。本组胃癌中CD44V6阳性率为71.74%，而癌旁组织中未见表达。同时胃癌伴有淋巴结转移时CD44V6的表达明显高于无淋巴转移组(P<0.01)。而且Ⅰ期胃癌中CD44V6表达明显低于Ⅲ、Ⅳ期胃癌。但CD44V6与组织分化程度无相关性，这说明CD44V6的表达与胃癌的时展、转移有关。CD44V6阳性预示胃癌有较强的侵袭、转移能力。由此提示，CD44V6阳性的胃癌患者需要更彻底的淋巴结清扫。但Mirecka[4]认为CD44V6的表达率与转移无显著相关性，而与肿瘤大小呈正相关。但本组结果显示，CD44V6阳性率与肿瘤大小无明显相关性。这在临床资料中也可以得到证实，肿瘤的大小与是否发生淋巴结转移无明显关系，即使是早期胃癌也能发生淋巴结转移。
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p16基因又称多肿瘤抑制基因(MTS1)，人的p16基因定位于9P21，全长8.5kb，由2个内含子和3个外显子组成，外显子序列编码为CDK4的抑制蛋白，即p16蛋白，是一个分子量为15.84kd的单链多肽，它是细胞周期中CDK4的特异性抑制因子抑制CDK4的活性，阻止细胞从G1期进入S期，抑制DNA的合成和细胞增殖。p16基因作为确定的抑癌基因，它的抑癌机理与细胞周期调控有关。Okamoto等[5]发现将有p16cDNA表达的载体转染癌细胞，可有效地抑制癌细胞克隆的形成，相反p16的缺失则导致肿瘤细胞无限制生长。p16基因突变在人类恶性肿瘤中普遍存在，包括膀胱癌、黑色素瘤、白血病、肺癌等[6]。突变率各家报道不一，主要形式是纯合性缺失和异常甲基化[7]，还有杂合性缺失，插入点突变和移码突变等。近年来，国内对胃癌中的p16的研究很多，吕有勇[8] 报道，不仅胃癌细胞系中存在p16基因的缺失，而且原发性胃癌中亦有p16基因的缺失，其缺失异常多见于低分化，有淋巴结转移，进展期胃癌，提示p16基因缺失与胃癌发生、发展密切相关。但日本学者发现在胃癌中p16基因发生缺失率低。Igaki[9]等认为，p16基因突变可能与胃癌的发生无关。Lee YY等[10]对36例原发性胃癌的研究中也发现，仅1例有p16基因的重排，未见p16基因的缺失和突变，p16蛋白在胃癌表达的异常可能是p16mRNA转录缺陷或DNA甲基化引起的。因此，p16蛋白胃癌异常表达的机理不仅有p16基因缺失点突变，CPG岛甲基化，还有p16mRNA转录翻译过程的缺陷。各种研究对p16蛋白表达与胃癌生物学行为的关系，观点不尽相同，有人认为p16阳性表达与组织学类型、分化程度、临床分期、淋巴结转移相关，有人则认为与之无关。本组46例胃癌组织中，p16阳性率21.05%，明显低于癌旁组织58.70%，说明p16基因的突变是胃癌发生中的重要环节。有淋巴结转移组p16阳性率3.70%，明显低于无淋巴结转移组36.84%，有显著统计意义，提示p16阳性表达是淋巴结转移的重要指标并据之可预测预后情况。在Ⅰ期胃癌中的阳性率显著高于Ⅲ、Ⅳ期胃癌，说明p16基因突变与胃癌的发展密切相关。本组结果，有淋巴结转移，进展期胃癌p16蛋白表达情况与吕有勇[8]研究相一致。
, 百拇医药
p16蛋白与CD44V6在胃癌中的表达情况已作分析，但两者之间在胃癌中的表达无明显相关性。在33例CD44V6阳性病例中p16阳性4例(12.12%)，在13例CD44V6阴性病例中p16阳性4例(30.76%)，统计学处理无差别。说明p16蛋白与CD44V6是在胃癌的不同环节发生作用。p16蛋白为抑癌蛋白，又是细胞周期素激酶抑制物，参与胃癌的发生发展。而CD44V6作为细胞粘附分子，是胃癌发生后影响胃癌的侵袭转移的重要因素。但在有淋巴结转移27例病例中，p16蛋白阳性仅1/27(3.70%)，而CD44V6 24/27(88.89%)，两者有显著差异。文献中p16蛋白对抑制胃癌淋巴结转移观点也不同。本组研究认为p16蛋白表达情况在有无淋巴结转移中有显著差异，说明p16蛋白与胃癌淋巴结转移有关，但具体机制仍待研究。在临床中同时考虑p16蛋白，CD44V6的表达情况对术中淋巴清扫及胃癌的诊断、治疗及判断预后都有意义。
张俊华硕士研究生 吕光成导师
参考文献
, 百拇医药
1，Gunthert U,Hofman M,Rudy W,et al.A new variant of glycoprotein CD44 confers potential to rat carcinoma cells.Cell,1991,65∶12
2，Harn HJ,Ho li,Chang JY.Differential expression of the human metastasis adhesion molecule CD44V in normal and carcinomatous stomach mucosa of Chinese subject.Caner,1995,75∶1065
3，辛 彦，赵风凯，张素敏，等.CD44V6基因编码蛋白表达与胃癌转移和预后的关系.世界华人消化杂志，1999，7∶210
4，Mirecka J,Marx D,Schauer A.Immunohistochemical localization of CD44 variants 5 and 6 in human gastric mucosa and gastric cancer.Anticancer Res,1995,15∶1459
, http://www.100md.com
5，Okamoto A,Dametrick DJ,Spillare EA,et al.Mutations and altered expression of p16NK4 in human cancer.Proc Natl Acad Sci USA.1994,91∶11045
6，Kamb A,Cruise A,Feldnaus JW,et al.A cell cycle regulator botentially involved in genesis of manny tumor types.Science,1994,15∶264(5157)∶436
7，Hemam JG,Merlo A,Mao L,et al.Inactivation of the CDKN2 /p16/MTS1 gene is frequently associated with aberrant DNA methylation in all common human.Cancer Res,1995,55(20)∶4525
, 百拇医药
8，吕有勇.多基因变异与胃粘膜细胞癌变的关系.中华消化杂志，1996，6(1)∶9
9，Igaki.H,Sasaki H,Kishi T,et al.Highly frequent homozygous deletion of the p16 gene in esophageal caner all lines.Biochem Biophys Res Commun,1994,203(2)∶1090
10，Lec YY,Kang SH,Seo JY,et al.Alterations of p16INK-4A and P15INK-4B genes in gastric carcinomas Cancer,1997,90∶189
(2000年9月5日收稿), 百拇医药
单位：张俊华(丹阳市人民医院，江苏丹阳，212300)；吕光成(苏州大学附属第一医院)
关键词：胃癌；p16蛋白；CD44V6；免疫组织化学
苏州医学院学报001008 摘要 目的 探讨p16蛋白，CD44V6在胃癌的发生发展及转移中的临床意义。方法 应用免疫组织化学方法对46例胃癌及癌旁组织中p16和CD44V6表达进行检测。结果 胃癌组织中p16蛋白阳性率(8/46，21.05%)明显低于癌旁组织中表达率(27/46，58.70%)。而CD44V6在胃癌中的表达率为(71.74%，33/46)，癌旁组织中未见CD44V6表达。两者的表达与年龄、性别、肿癌大小无相关性，而与有无淋巴结转移显著相关。p16与分化程度有显著差异，而CD446则与之无关。在TNM分期中，CD44V6在Ⅲ、Ⅳ期中的表达显著高于Ⅰ期中，而p16在Ⅰ期中的表达率明显高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期中的表达率。p16与CD44V6两者在胃癌中的表达无相关性。但有淋巴结转移组(27例)中，p16阳性表达率3.70%明显低于CD44V6阳性表达率88.89%，且有显著差别(P<0.05)。结论 p16蛋白、CD44V6是胃癌发生发展的重要因素，特别是CD44V6可作为胃癌淋巴结转移的重要指标，p16蛋白、CD44V6可为临床诊断胃癌、判断预后、指导手术提供重要依据。
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中图法分类号 R735.204
The Expression of p16 Protein and CD44V6 in Gastric Cancer
and Their Significance
Zhang Junhua, Lu Guangchen
(Danyang People's Hospital,Jiangsu Dunyang,212300)
Abstract Objective To study the clinical significance and effect of the expression of p16 protein and CD44V6 in the occurrence and development of gastric carcinomas.Methods p16 protein and CD44V6 expression were detected in 46 specimens of gastric carcinomas and pericarcinoma tissues by the methods of immunohistochemistry.Results The positive rate of p16 protein expression 8/46(21.05%) was significantly lower than that in pericarcinoma tissues 27/46(58.70%).The positive rate of CD44V6 was 33/46(71.74%) in gastric carcinomas,but it was not expressed in pericarcinoma tissues.The positive expression of p16 protein and CD44V6 were correlated with lymph node metastasis of gastric carcinomas.The positive expression of p16 protein were correlated with degree of differentiation and clinical stage.CD44V6 expression was correlated with clinical stage,but not with degree of differentiation.The expression of p16 protein and CD44V6 were not with correlated with sex,age and tumor size.But in the gastric carcinoma with lymph node metastasis,the positive rate of p16 protein (3.70%) was significantly lower than that of CD44V6 (88.89%) (P<0.05).Conclusion The abnormal expressions of p16 protein and CD44V6 were important factors in the occurrence,development of gastric carcinoma,specially CD44V6 was an important index in the lymph node metastasis of gastric carcinoma.So the detection of p16 protein and CD44V6 imply important significance for gastric carcinoma dignosis,pronosis and treatment.
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Key words gastric carcinoma;p16 protein;CD44V6 immunohistochemistry
胃癌是中国死亡率最高的恶性肿瘤，其发生发展和转移涉及多种基因的异常，其中CD44V6和p16基因变异较为常见，也是目前的研究热点。但研究结果和观点不尽相同，且两者同时在胃癌中的表达情况报道不多。本文检测了胃癌及癌旁组织中p16和CD44V6的表达情况，结合临床病理资料加以分析研究于下。
1 材料和方法
1.1 材料 胃癌(46例中男6例，女20例，平均年龄57.8岁)及其癌旁组织均来自苏医附一院手术标本，术后立即取材，组织经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，分别进行免疫组化和HE染色诊断确定，术前、术中患者均未进行化疗、放疗。
鼠抗p16mAb(F-12)为美国Santa Cruz公司产品，CD44V6mAb为CHEMICON INTERNATIONAL INC公司产品，免疫组化ABC试剂盒及DAB显色剂试剂盒均购于武汉Boster公司。
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1.2 方法 石蜡切片常规脱蜡至水化。经3%H2O2，室温孵育10min，微波修复抗原室温下冷却后，用1∶10稀释正常血清封闭液(正常山羊血清)封闭非特异性背景染色，室温20min。切片滴加一抗：鼠抗p16mAb(1∶50),CD44V6mAB(1∶50)，4℃过夜，再加入生物素化山羊抗小鼠IgG(1∶1000)10μl孵育30min,加入试剂SABC(1∶80)10μl,混匀后加至切片，37℃20min,DAB显色5～8min。苏木素轻度复染、脱水、透明、封片、观察。阴性对照以PBS代替一抗。阳性对照用已知p16阳性扁桃体组织，已知CD44V6阳性乳癌组织作阳性对照。
1.3 判定标准 p16①)以细胞呈清晰棕色为阳性，且以阳性细胞数所占比例(10个高倍视野)分为+<25%，++25%～50%，+++>50%；②以细胞无棕色或与背景一致的很淡棕色为阴性。CD44V6以胞膜呈棕黄色为阳性，阳性细胞数>10%为阳性表达。
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2 结果
p16蛋白免疫组化阳性信号为棕色颗粒，大部分定位于胞浆，少部分定位于胞核。CD44V6免疫组化阳性表达于胞膜，为棕黄色。胃癌中p16蛋白表达8/46(21.05%)明显低于癌旁组织中27/46(58.70%)，而CD44V6在胃癌中的表达为33/46(71.74%)，癌旁组织中未见表达。胃癌中p16蛋白，CD44V6表达与肿瘤大小、年龄、性别情况未见明显差异(P>0.05)。p16和CD44V6与胃癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移关系见附表。p16蛋白与分化程度及TNM分期有相关性(P<0.05)。CD44V6与分化程度无关，但与TNM分期相关(P<0.05)。在CD44V6阳性的胃癌中(33例)，p16阳性仅4例(12.12%)，而CD44V6阴性的胃癌中13例，p16阳性4例(30.76%)，两者无差异。在有淋巴结转移组(27例)中，p16蛋白阳性率3.70%(1/27)，CD44V6阳性率88.89%阳性率88.89%(24/27)，两者有显著差别(P<0.05)。
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附表 p16和CD44V6表达与胃癌病理参数的关系
n
p16
CD44V6
+～+++
-
+
-
淋巴结转
有
27
1(3.70)
26
, 百拇医药
24(88.89)
3
无
19
7(36.84)a
12
9(47.37)a
10
分化程度
高
8
5(62.5)
, 百拇医药 3
6(75)
2
中
13
1(7.69)b
12
9(69.23)
4
低
12
1(8.33)b
11
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9(75)
3
未
13
1(7.69)b
12
9(69.23)
4
TNM分期
Ⅰ
6
4(66.7)c
2
, http://www.100md.com
2(33.3)c
4
Ⅱ
20
2(10)
18
13(65)
7
ⅢⅣ
20
2(10)
18
18(90)
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2
a与淋巴结转移组比，P<0.05；b与高分化组比，P<0.05；c与Ⅲ、Ⅳ期比，P<0.05
3 讨论
人类CD44基因定位于11号染色体短臂，有20个高度保守的外显子。完整基因组在染色体DNA上大约跨越50K。CD44基因的外显子按表现方式分为两型：一种是组成型外显子，有10个，其转录片段存在于所有CD44转录子中，称为标准型CD44(CD44S)；一种是V区变异拼接外显子，也有10个，称CD44拼接变异体(CD44V)。CD44V6是一类具有高度异质性的单链膜表面糖蛋白，能介导淋巴细胞归巢，并被认为与细胞的运动，肿瘤的发生发展和侵袭有关。研究发现，人类肿瘤组织普遍存在CD44V的表达紊乱。一般认为，CD44V表达的失控与基因突变有关。体外实验证明，CD44V6的表达是非转移性大鼠胰腺癌细胞株获得转移能力所必需的[1]。研究表明，CD44V6的表达与胃癌侵袭有关，特别是CD44V6的表达在胃癌侵袭和转移过程中起重要作用[2]。文献报道，人类胃癌CD44V6表达率64%～77%，且发现CD44V6阳性表达与胃癌的进展程度有关。辛彦[3]报道晚期胃癌CD44V6的检出率明显高于早、中期胃癌，伴淋巴转移及肝转移者CD44V6检出率亦明显高于不伴转移者。本组胃癌中CD44V6阳性率为71.74%，而癌旁组织中未见表达。同时胃癌伴有淋巴结转移时CD44V6的表达明显高于无淋巴转移组(P<0.01)。而且Ⅰ期胃癌中CD44V6表达明显低于Ⅲ、Ⅳ期胃癌。但CD44V6与组织分化程度无相关性，这说明CD44V6的表达与胃癌的时展、转移有关。CD44V6阳性预示胃癌有较强的侵袭、转移能力。由此提示，CD44V6阳性的胃癌患者需要更彻底的淋巴结清扫。但Mirecka[4]认为CD44V6的表达率与转移无显著相关性，而与肿瘤大小呈正相关。但本组结果显示，CD44V6阳性率与肿瘤大小无明显相关性。这在临床资料中也可以得到证实，肿瘤的大小与是否发生淋巴结转移无明显关系，即使是早期胃癌也能发生淋巴结转移。
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p16基因又称多肿瘤抑制基因(MTS1)，人的p16基因定位于9P21，全长8.5kb，由2个内含子和3个外显子组成，外显子序列编码为CDK4的抑制蛋白，即p16蛋白，是一个分子量为15.84kd的单链多肽，它是细胞周期中CDK4的特异性抑制因子抑制CDK4的活性，阻止细胞从G1期进入S期，抑制DNA的合成和细胞增殖。p16基因作为确定的抑癌基因，它的抑癌机理与细胞周期调控有关。Okamoto等[5]发现将有p16cDNA表达的载体转染癌细胞，可有效地抑制癌细胞克隆的形成，相反p16的缺失则导致肿瘤细胞无限制生长。p16基因突变在人类恶性肿瘤中普遍存在，包括膀胱癌、黑色素瘤、白血病、肺癌等[6]。突变率各家报道不一，主要形式是纯合性缺失和异常甲基化[7]，还有杂合性缺失，插入点突变和移码突变等。近年来，国内对胃癌中的p16的研究很多，吕有勇[8] 报道，不仅胃癌细胞系中存在p16基因的缺失，而且原发性胃癌中亦有p16基因的缺失，其缺失异常多见于低分化，有淋巴结转移，进展期胃癌，提示p16基因缺失与胃癌发生、发展密切相关。但日本学者发现在胃癌中p16基因发生缺失率低。Igaki[9]等认为，p16基因突变可能与胃癌的发生无关。Lee YY等[10]对36例原发性胃癌的研究中也发现，仅1例有p16基因的重排，未见p16基因的缺失和突变，p16蛋白在胃癌表达的异常可能是p16mRNA转录缺陷或DNA甲基化引起的。因此，p16蛋白胃癌异常表达的机理不仅有p16基因缺失点突变，CPG岛甲基化，还有p16mRNA转录翻译过程的缺陷。各种研究对p16蛋白表达与胃癌生物学行为的关系，观点不尽相同，有人认为p16阳性表达与组织学类型、分化程度、临床分期、淋巴结转移相关，有人则认为与之无关。本组46例胃癌组织中，p16阳性率21.05%，明显低于癌旁组织58.70%，说明p16基因的突变是胃癌发生中的重要环节。有淋巴结转移组p16阳性率3.70%，明显低于无淋巴结转移组36.84%，有显著统计意义，提示p16阳性表达是淋巴结转移的重要指标并据之可预测预后情况。在Ⅰ期胃癌中的阳性率显著高于Ⅲ、Ⅳ期胃癌，说明p16基因突变与胃癌的发展密切相关。本组结果，有淋巴结转移，进展期胃癌p16蛋白表达情况与吕有勇[8]研究相一致。
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p16蛋白与CD44V6在胃癌中的表达情况已作分析，但两者之间在胃癌中的表达无明显相关性。在33例CD44V6阳性病例中p16阳性4例(12.12%)，在13例CD44V6阴性病例中p16阳性4例(30.76%)，统计学处理无差别。说明p16蛋白与CD44V6是在胃癌的不同环节发生作用。p16蛋白为抑癌蛋白，又是细胞周期素激酶抑制物，参与胃癌的发生发展。而CD44V6作为细胞粘附分子，是胃癌发生后影响胃癌的侵袭转移的重要因素。但在有淋巴结转移27例病例中，p16蛋白阳性仅1/27(3.70%)，而CD44V6 24/27(88.89%)，两者有显著差异。文献中p16蛋白对抑制胃癌淋巴结转移观点也不同。本组研究认为p16蛋白表达情况在有无淋巴结转移中有显著差异，说明p16蛋白与胃癌淋巴结转移有关，但具体机制仍待研究。在临床中同时考虑p16蛋白，CD44V6的表达情况对术中淋巴清扫及胃癌的诊断、治疗及判断预后都有意义。
张俊华硕士研究生 吕光成导师
参考文献
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1，Gunthert U,Hofman M,Rudy W,et al.A new variant of glycoprotein CD44 confers potential to rat carcinoma cells.Cell,1991,65∶12
2，Harn HJ,Ho li,Chang JY.Differential expression of the human metastasis adhesion molecule CD44V in normal and carcinomatous stomach mucosa of Chinese subject.Caner,1995,75∶1065
3，辛 彦，赵风凯，张素敏，等.CD44V6基因编码蛋白表达与胃癌转移和预后的关系.世界华人消化杂志，1999，7∶210
4，Mirecka J,Marx D,Schauer A.Immunohistochemical localization of CD44 variants 5 and 6 in human gastric mucosa and gastric cancer.Anticancer Res,1995,15∶1459
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5，Okamoto A,Dametrick DJ,Spillare EA,et al.Mutations and altered expression of p16NK4 in human cancer.Proc Natl Acad Sci USA.1994,91∶11045
6，Kamb A,Cruise A,Feldnaus JW,et al.A cell cycle regulator botentially involved in genesis of manny tumor types.Science,1994,15∶264(5157)∶436
7，Hemam JG,Merlo A,Mao L,et al.Inactivation of the CDKN2 /p16/MTS1 gene is frequently associated with aberrant DNA methylation in all common human.Cancer Res,1995,55(20)∶4525
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8，吕有勇.多基因变异与胃粘膜细胞癌变的关系.中华消化杂志，1996，6(1)∶9
9，Igaki.H,Sasaki H,Kishi T,et al.Highly frequent homozygous deletion of the p16 gene in esophageal caner all lines.Biochem Biophys Res Commun,1994,203(2)∶1090
10，Lec YY,Kang SH,Seo JY,et al.Alterations of p16INK-4A and P15INK-4B genes in gastric carcinomas Cancer,1997,90∶189
(2000年9月5日收稿), 百拇医药