基因治疗原理及发展
作者：蒋滢
单位：苏州大学医学院生物技术系，苏州，215007
关键词：
苏州医学院学报001002
1 基因治疗原理
1.1 基因治疗类型 一般包括替换疗法及添加基因法两种类型[1]。
1.1.1 替换疗法 是最理想的基因治疗类型，即将有缺陷的基因除法，换上具有正常功能的基因，这种治疗方法称替换疗法。如异常β-珠蛋白的基因用正常β-珠蛋白的基因替换，由于必须在生殖细胞基因转移，难度大，尚未进入临床。
1.1.2 添加基因法 缺陷基因仍保留，让其少表达，再外加基因，以补足缺陷基因的不正常表达，只需体细胞。目前是临床首选的基因方法。“靶细胞”，即是转载外源基因的细胞。
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1.2 基因治疗中靶细胞的选择
1.2.1 骨髓干细胞 它是基因治疗中研究最多的细胞，易采集、移植及繁殖力强的优点，用于治疗各种红细胞病，腺苷脱氨酶(ADA)缺乏病、免疫缺失、慢性肉芽病、Gaucher's病。
1.2.2 肝细胞 它可作为许多遗传性代谢缺陷的靶细胞，带了外源基因的肝细胞直接注入组织，容易死亡，现在可将肝细胞附着于胶原覆盖的微孔膜，再植入皮下或腹腔，就可使肝细胞存活并表达外源基因产物。可用于人类低密度脂蛋白受体缺乏，苯丙酮酸尿症以及α1-抗胰蛋白酶缺乏病等先天性疾病的基因治疗。
1.2.3 皮肤细胞包括成纤维细胞及角质细胞 体外易繁殖及转化，选用治疗血友病、血清蛋白病及糖尿病等激素缺陷的疾病。
1.2.4 淋巴细胞 它易采集、分离，体外大量繁殖，虽然在体内生命期有限，但可连续多次输入体内，已对ADA缺乏病进行了首例治疗。
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肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)它对肿瘤有特异性，输入外源基因后，输回给病人，它可以集中在原肿瘤所在部位，对肿瘤发挥治疗作用。
1.2.5 癌细胞 是治疗肿瘤常用的靶细胞。通过外源性基因转移，增加肿瘤细胞的免疫原性，或抑制癌基因表达，或表达正常的抗癌基因产物等达到治疗肿瘤的目的。已用于临床治床迁移性黑色素瘤。
此外，还有使用血管内皮细胞、肌细胞、胎儿细胞等，均可作为基因治疗中的靶细胞。
1.3 基因转移的方法
1.3.1 理化方法
1.3.1.1 DNA与磷酸钙共沉淀法 即将外源基因DNA片段与磷酸钙共沉于靶细胞膜上，让靶细胞摄取，使外源基因进入细胞核。手续简单，但效率低，只有百万分之一。
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1.3.1.2 脂质体-细胞融合法 即将外源基因包在磷脂和胆固醇形成的脂质体内，然后与受体细胞融合，将标有外源基因的脂质体转入细胞内，适用于各种靶细胞[2]。
1.3.1.3 血影红细胞(erythrocyte ghost)融合法 即使分离出来的红细胞处于低渗，红细胞肿大，膜上出现20～25μm小孔，使外源基因从小孔进入红细胞，然后恢复渗透压，红细胞膜恢复，不让外源基因释放出来，最后再与受体细胞融合，效率高，没有免疫问题。
1.3.1.4 微注射法 将外源性基因在特制显微镜下直接注入受体细胞，转化率高，但每次只能注射一个细胞。
1.3.1.5 电穿孔法(dlectroporation) 即借助瞬间的高压脉冲，将细胞穿孔，使外源性基因穿入受体细胞，已进入商品化。但必须注意：脉肿过强引起细胞死亡，过弱不能转入。
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1.3.2 生物学方法-使用病毒为载体 手续简便，但转化率低，只有万分之一。常用病毒：
1.3.2.1 反转录病毒作为载体 属于RNA病毒[3-4]
RNA病毒的基因：5′——(gag)/(核心蛋白)——(pol)/(反转录酶)——(env)/(外壳蛋白)——3′
采用限制性内切酶，切除gag、env基因，装入外源性基因，形成重组反转录病毒，有时还装入SV40(疱疹病毒)或CMV(巨细胞病毒)启动顺序，便于外源基因表达，还装入neoR(抗新霉素)基因。由于自身基因已除去，无能力再复制，成为缺陷型重组反转录病毒。由于已失去感染宿主能力，所以借助辅助细胞来扩增和包装，而辅助细胞中含有另外一种缺陷型病毒，因此，只能转录翻译结构基因中包装的蛋白质，待包装好的重组缺陷病毒通过转导到靶细胞，然后再植入受体(宿主)细胞。
, 百拇医药
由包装好的重组缺陷病毒→cDNA→整合到受体细胞，最后表达外源基因产物。因此，这种反转录病毒作载体，宿主(受体)细胞范围广，但只能转导到正在分裂、增殖的细胞，基因转移效率高，可达100%，但外源基因不能大于8Kb，所以它不能作为大基因载体。由于在制备过程中使用了辅助细胞扩增及包装，或其它微生物的RNA转导到靶细胞而污染，因此，必须进行一系列的动物试剂和安全检查。
1.3.2.2 腺病毒作为载体 近年进展很快，其优点为运载的基因片段可达36Kb，并可转导到非分裂增殖的细胞。因此，一些反转录病毒不能转导的靶细胞，不需要整合到宿主细胞基因组，避免了基因整合引起宿主细胞恶变的危险性，但易引起宿主的免疫反应及其它副作用。
1.3.2.3 疱疹类病作为载体 包括单纯疱疹病毒(HSV-1)，巨细胞病毒(CMV)，EB病毒等，其优点可以插入大基因片段，感染已完全分化的肝细胞、神经元细胞，而缺点是外源基因表达时，常受到机制尚未明确的基因组调节的影响。
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2 肿瘤的基因治疗
治疗肿瘤的基因种类不少，在此介绍几种[5-6]。
2.1 细胞因子基因 一般认为用基因工程重组的细胞因子进入患者体内，半衰期短，毒性反应大等缺点，因此改用细胞因子的基因导入细胞，常用细胞是肿瘤细胞及淋巴细胞[7]，然后回输到患者体内，使其在体内持续分泌一定量的细胞因子，调节患者的免疫系统，达到直接或间接地杀伤肿瘤细胞。临床用的细胞因子基因有IL-2、IL-4、TEF和INF-γ。
2.2 HLA基因 它是一种肿瘤细胞人类白细胞抗原基因。正常人的免疫系统对肿瘤存在着免疫监视作用，而肿瘤细胞的HLA表达不强，这是肿瘤形成的重要原因。因此，可以将HLA基因导入肿瘤细胞，提高体内免疫效应细胞对肿瘤的监视能力，从而提高机体抗肿瘤的免疫力。1994年Gary Nabal曾用HLA-B的基因导入恶性黑色素瘤细胞，提高肿瘤的免疫原性，从而刺激了机体抗肿瘤的免疫功能，达到杀伤恶性黑色素瘤细胞；又如使用缺陷型单纯疱疹病毒-Ⅰ型(HSV-1)带着HLA基因导入神经胶质细胞瘤，刺激HLA基因表达，提高机体抗胶质细胞肿瘤的免疫能力，HLA基因转移表达，在肿瘤治疗中占有相当重要的地位。
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2.3 自杀性基因 所谓自杀性基因实际上它是单纯疱疹病毒胸腺核苷激酶(HSV-TK)的基因[8]，此基因目前只用于脑肿的治疗。其原理：TKTMPTKTDPTKTTP。自杀性基因的表达产物-TK，它只能使胸腺核苷及胸腺核苷酸磷酸化，而不能使胸腺嘧啶磷酸化，为此凡被HSV-TK基因感染的细胞，都可被丙氧鸟苷杀死，因为TK能磷酸化丙氧鸟苷，从而抑制了肿瘤DNA的合成。治疗方法：先将HSV-TK基因导入脑肿瘤细胞，然后回注到脑肿瘤组织，随后用丙氧鸟苷(Ganciclouir)治疗，可消除肿瘤组织，称“旁观者效应(by-stander effects)，只需要10～20%带有HSV-TK基因的肿瘤细胞，就可消除全部肿瘤。带有自杀基因的细胞能释放出毒性代谢物，通过细胞间隙进入没有自杀基因的肿瘤细胞，发挥对肿瘤细胞的杀伤作用。
2.4 抑癌基因 至今已分离出许多抑癌基因[9]，其中用于治疗肿瘤的有RB及P53抑癌基因，发现肿瘤患者的P53抗癌基因发生了突变，对小细胞肺癌及非小细胞肺癌P53的突变率分别为55%～73%及20%～45%，野生型抑癌P53基因导入肺癌细胞，可使恶性程度降低，甚至使肺癌细胞逆转，达到治疗肺癌的效果。发现前列腺癌中RB抑癌基因突变，假如导入正常RB抑癌基因，则抑制了前列腺癌。
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2.5 癌基因的反义RNA封闭 正常人的癌基因在外界，如物理、化学、生物等因素作用下发生激活引起异常表达，异常表达产物干扰正常组织细胞的分裂与分化的动态平衡，使细胞恶性生长形成肿瘤。现常用反义技术，即用反义的RNA来封闭癌基因高表达[10]。例如，慢性粒细胞白血病(CML)的癌基因(C-abl)从9号染色体位到22号染色体bcr基因的下游，形成了bcr-c-abl基因，其表达产物P210，导致bcr基因不产生粘附分子，结果粒细胞不受控制增生，导致慢性粒细胞白血病的发生。现在发现这两种基因联合表达与它们邻近10～20核苷酸序列有关，为此用CML反义RNA来到闭邻近的10～20核苷酸序列，不使bcr与abl联合表达，从而产生正常的表达产物P145。此外，发现bcl-2基因，表达产物是线粒体膜组成蛋白，它过量表达，抑制了肿瘤细胞的凋亡(apoptosis)。目前，正在考虑封锁bcl-2基因的方法，消除肿瘤细胞凋亡的抑制作用。
2.6 耐药基因 肿瘤的化疗，毒性大，特别对骨髓造血细胞，因此，使化疗药物剂量受到限制。有些病人或有些肿瘤对化疗药物，产生了耐药性，这与肿瘤细胞中耐药基因有关。1992年Sorrentino用肿瘤的耐药基因构建逆转录病毒，然后植入骨髓细胞后再给予药物化疗，这样凡含有耐药性基因的骨髓细胞能承受大剂量的化疗，这种方法目前正在进行临床初探。除以上对癌症采取种种基因治疗外，对遗传性疾病也是很有效的[11]。目前世界上确定对β-地中海性贫血作为基因治疗的首选疾病。
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3 基因治疗存在的问题及前景
基因治疗涉及医学和伦理道德多方面问题，1985年以来，美国对基因治疗试验必须通过三个机构：①国立卫生研究院(NIH)；②重组DNA咨询委员会(Recombinant DNA Advisory committee,RAC)；③食品和药物管理局(FDA)，从而保证了基因治疗用于人类疾病治疗的安全性及可靠性。
3.1 存在问题 ①外基因导入后的表达效率问题。②外基因表达调控问题 例如糖尿病基因治疗，血糖高时需加强受体表达，血糖不高时，不需加强受体表达，就涉及基因表达的调控。③免疫问题 即外基因表达后蛋白质被自身免疫系统识别为外来抗原，产生抗体，引起免疫反应。④反转录病毒作为载体，导入机体，能激活癌基因，而产生癌症，所以常用缺陷型反转录病毒作为载体。最近，美国国立卫生研究院，做了三个骨髓移植基因治疗的猴子，由于辅助病毒污染，产生了恶性淋巴细胞瘤。⑤医疗费用大，国家及个人一时均承受不了。
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3.2 前景
不仅对“不治之症”能得到治疗，而且随着人类基因组结构及功能渐渐被阐明，哪些人对某种疾病的易感性及抵抗性，从而对“不治之症”可以进行预防。
参考文献
1，Anderson W F.Human Gene Therapy.Science,1992,256∶808
2，Aoki K,Yoshida T,Matsumoto N,et al.Gene therapy for peritoneal dissenination of pancreatic cancer by liposome-mediated transfer of perpes simple virus thymidine kinase gene. Hum.Gene Ther,1997,8∶1107～13
, 百拇医药
3，Ido A,Nakata K,Katoy,et al.Gene therapy for hapatoma cell using a retrovirus vector carry in herpes simplex virus thumidine kinase gene under the control of human alphafetoproteim gene promator. Cancer Res,1995,55∶3105～3109
4，Sorrentino Bp,Brandt SJ,Bodine D,et al.Selection of drup-resistance bone marrow cells in vivo after retroviral transfer of the human MORI.Science，1992,257∶99～103
5，Gutierrez A A.Gene Therapy for Cancer.Lancet，1992,239∶715.
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6，Yanfang Zheng,Jeren Zhang.Cancer Gene Therapy.肿瘤杂志，2000，13∶1
7，Lary BM,Coveney EC,Philip R,et al.Inhibition of establishied pancreatic cancer following specific active imunotherapy with interleukin-2 gene transduced tumor cells.Cancer Gene therapy,1997,4∶97～104
8，徐克成，吴建文.消化系统癌肿的自杀基因治疗.世界华人消化杂志，1999，7(8)∶13
9，孟照华，何振平.肝癌抑制基因治疗的研究现状.世界华人消化杂志，1999，7(4)∶24
10，黄贤明，魏曙光，王琳芳，等.C-ets-2,c-myc,N-ras三个癌基因联合反义RNA对肝癌细胞恶性表型的逆转.中华肿瘤杂起，1994，16∶243
11，张 晶，陈云弟.基因治疗：治疗遗传病的根本措施.科学导报，1999，134(8)∶18
(2000年8月14日收稿), 百拇医药
单位：苏州大学医学院生物技术系，苏州，215007
关键词：
苏州医学院学报001002
1 基因治疗原理
1.1 基因治疗类型 一般包括替换疗法及添加基因法两种类型[1]。
1.1.1 替换疗法 是最理想的基因治疗类型，即将有缺陷的基因除法，换上具有正常功能的基因，这种治疗方法称替换疗法。如异常β-珠蛋白的基因用正常β-珠蛋白的基因替换，由于必须在生殖细胞基因转移，难度大，尚未进入临床。
1.1.2 添加基因法 缺陷基因仍保留，让其少表达，再外加基因，以补足缺陷基因的不正常表达，只需体细胞。目前是临床首选的基因方法。“靶细胞”，即是转载外源基因的细胞。
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1.2 基因治疗中靶细胞的选择
1.2.1 骨髓干细胞 它是基因治疗中研究最多的细胞，易采集、移植及繁殖力强的优点，用于治疗各种红细胞病，腺苷脱氨酶(ADA)缺乏病、免疫缺失、慢性肉芽病、Gaucher's病。
1.2.2 肝细胞 它可作为许多遗传性代谢缺陷的靶细胞，带了外源基因的肝细胞直接注入组织，容易死亡，现在可将肝细胞附着于胶原覆盖的微孔膜，再植入皮下或腹腔，就可使肝细胞存活并表达外源基因产物。可用于人类低密度脂蛋白受体缺乏，苯丙酮酸尿症以及α1-抗胰蛋白酶缺乏病等先天性疾病的基因治疗。
1.2.3 皮肤细胞包括成纤维细胞及角质细胞 体外易繁殖及转化，选用治疗血友病、血清蛋白病及糖尿病等激素缺陷的疾病。
1.2.4 淋巴细胞 它易采集、分离，体外大量繁殖，虽然在体内生命期有限，但可连续多次输入体内，已对ADA缺乏病进行了首例治疗。
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肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)它对肿瘤有特异性，输入外源基因后，输回给病人，它可以集中在原肿瘤所在部位，对肿瘤发挥治疗作用。
1.2.5 癌细胞 是治疗肿瘤常用的靶细胞。通过外源性基因转移，增加肿瘤细胞的免疫原性，或抑制癌基因表达，或表达正常的抗癌基因产物等达到治疗肿瘤的目的。已用于临床治床迁移性黑色素瘤。
此外，还有使用血管内皮细胞、肌细胞、胎儿细胞等，均可作为基因治疗中的靶细胞。
1.3 基因转移的方法
1.3.1 理化方法
1.3.1.1 DNA与磷酸钙共沉淀法 即将外源基因DNA片段与磷酸钙共沉于靶细胞膜上，让靶细胞摄取，使外源基因进入细胞核。手续简单，但效率低，只有百万分之一。
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1.3.1.2 脂质体-细胞融合法 即将外源基因包在磷脂和胆固醇形成的脂质体内，然后与受体细胞融合，将标有外源基因的脂质体转入细胞内，适用于各种靶细胞[2]。
1.3.1.3 血影红细胞(erythrocyte ghost)融合法 即使分离出来的红细胞处于低渗，红细胞肿大，膜上出现20～25μm小孔，使外源基因从小孔进入红细胞，然后恢复渗透压，红细胞膜恢复，不让外源基因释放出来，最后再与受体细胞融合，效率高，没有免疫问题。
1.3.1.4 微注射法 将外源性基因在特制显微镜下直接注入受体细胞，转化率高，但每次只能注射一个细胞。
1.3.1.5 电穿孔法(dlectroporation) 即借助瞬间的高压脉冲，将细胞穿孔，使外源性基因穿入受体细胞，已进入商品化。但必须注意：脉肿过强引起细胞死亡，过弱不能转入。
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1.3.2 生物学方法-使用病毒为载体 手续简便，但转化率低，只有万分之一。常用病毒：
1.3.2.1 反转录病毒作为载体 属于RNA病毒[3-4]
RNA病毒的基因：5′——(gag)/(核心蛋白)——(pol)/(反转录酶)——(env)/(外壳蛋白)——3′
采用限制性内切酶，切除gag、env基因，装入外源性基因，形成重组反转录病毒，有时还装入SV40(疱疹病毒)或CMV(巨细胞病毒)启动顺序，便于外源基因表达，还装入neoR(抗新霉素)基因。由于自身基因已除去，无能力再复制，成为缺陷型重组反转录病毒。由于已失去感染宿主能力，所以借助辅助细胞来扩增和包装，而辅助细胞中含有另外一种缺陷型病毒，因此，只能转录翻译结构基因中包装的蛋白质，待包装好的重组缺陷病毒通过转导到靶细胞，然后再植入受体(宿主)细胞。
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由包装好的重组缺陷病毒→cDNA→整合到受体细胞，最后表达外源基因产物。因此，这种反转录病毒作载体，宿主(受体)细胞范围广，但只能转导到正在分裂、增殖的细胞，基因转移效率高，可达100%，但外源基因不能大于8Kb，所以它不能作为大基因载体。由于在制备过程中使用了辅助细胞扩增及包装，或其它微生物的RNA转导到靶细胞而污染，因此，必须进行一系列的动物试剂和安全检查。
1.3.2.2 腺病毒作为载体 近年进展很快，其优点为运载的基因片段可达36Kb，并可转导到非分裂增殖的细胞。因此，一些反转录病毒不能转导的靶细胞，不需要整合到宿主细胞基因组，避免了基因整合引起宿主细胞恶变的危险性，但易引起宿主的免疫反应及其它副作用。
1.3.2.3 疱疹类病作为载体 包括单纯疱疹病毒(HSV-1)，巨细胞病毒(CMV)，EB病毒等，其优点可以插入大基因片段，感染已完全分化的肝细胞、神经元细胞，而缺点是外源基因表达时，常受到机制尚未明确的基因组调节的影响。
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2 肿瘤的基因治疗
治疗肿瘤的基因种类不少，在此介绍几种[5-6]。
2.1 细胞因子基因 一般认为用基因工程重组的细胞因子进入患者体内，半衰期短，毒性反应大等缺点，因此改用细胞因子的基因导入细胞，常用细胞是肿瘤细胞及淋巴细胞[7]，然后回输到患者体内，使其在体内持续分泌一定量的细胞因子，调节患者的免疫系统，达到直接或间接地杀伤肿瘤细胞。临床用的细胞因子基因有IL-2、IL-4、TEF和INF-γ。
2.2 HLA基因 它是一种肿瘤细胞人类白细胞抗原基因。正常人的免疫系统对肿瘤存在着免疫监视作用，而肿瘤细胞的HLA表达不强，这是肿瘤形成的重要原因。因此，可以将HLA基因导入肿瘤细胞，提高体内免疫效应细胞对肿瘤的监视能力，从而提高机体抗肿瘤的免疫力。1994年Gary Nabal曾用HLA-B的基因导入恶性黑色素瘤细胞，提高肿瘤的免疫原性，从而刺激了机体抗肿瘤的免疫功能，达到杀伤恶性黑色素瘤细胞；又如使用缺陷型单纯疱疹病毒-Ⅰ型(HSV-1)带着HLA基因导入神经胶质细胞瘤，刺激HLA基因表达，提高机体抗胶质细胞肿瘤的免疫能力，HLA基因转移表达，在肿瘤治疗中占有相当重要的地位。
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2.3 自杀性基因 所谓自杀性基因实际上它是单纯疱疹病毒胸腺核苷激酶(HSV-TK)的基因[8]，此基因目前只用于脑肿的治疗。其原理：TKTMPTKTDPTKTTP。自杀性基因的表达产物-TK，它只能使胸腺核苷及胸腺核苷酸磷酸化，而不能使胸腺嘧啶磷酸化，为此凡被HSV-TK基因感染的细胞，都可被丙氧鸟苷杀死，因为TK能磷酸化丙氧鸟苷，从而抑制了肿瘤DNA的合成。治疗方法：先将HSV-TK基因导入脑肿瘤细胞，然后回注到脑肿瘤组织，随后用丙氧鸟苷(Ganciclouir)治疗，可消除肿瘤组织，称“旁观者效应(by-stander effects)，只需要10～20%带有HSV-TK基因的肿瘤细胞，就可消除全部肿瘤。带有自杀基因的细胞能释放出毒性代谢物，通过细胞间隙进入没有自杀基因的肿瘤细胞，发挥对肿瘤细胞的杀伤作用。
2.4 抑癌基因 至今已分离出许多抑癌基因[9]，其中用于治疗肿瘤的有RB及P53抑癌基因，发现肿瘤患者的P53抗癌基因发生了突变，对小细胞肺癌及非小细胞肺癌P53的突变率分别为55%～73%及20%～45%，野生型抑癌P53基因导入肺癌细胞，可使恶性程度降低，甚至使肺癌细胞逆转，达到治疗肺癌的效果。发现前列腺癌中RB抑癌基因突变，假如导入正常RB抑癌基因，则抑制了前列腺癌。
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2.5 癌基因的反义RNA封闭 正常人的癌基因在外界，如物理、化学、生物等因素作用下发生激活引起异常表达，异常表达产物干扰正常组织细胞的分裂与分化的动态平衡，使细胞恶性生长形成肿瘤。现常用反义技术，即用反义的RNA来封闭癌基因高表达[10]。例如，慢性粒细胞白血病(CML)的癌基因(C-abl)从9号染色体位到22号染色体bcr基因的下游，形成了bcr-c-abl基因，其表达产物P210，导致bcr基因不产生粘附分子，结果粒细胞不受控制增生，导致慢性粒细胞白血病的发生。现在发现这两种基因联合表达与它们邻近10～20核苷酸序列有关，为此用CML反义RNA来到闭邻近的10～20核苷酸序列，不使bcr与abl联合表达，从而产生正常的表达产物P145。此外，发现bcl-2基因，表达产物是线粒体膜组成蛋白，它过量表达，抑制了肿瘤细胞的凋亡(apoptosis)。目前，正在考虑封锁bcl-2基因的方法，消除肿瘤细胞凋亡的抑制作用。
2.6 耐药基因 肿瘤的化疗，毒性大，特别对骨髓造血细胞，因此，使化疗药物剂量受到限制。有些病人或有些肿瘤对化疗药物，产生了耐药性，这与肿瘤细胞中耐药基因有关。1992年Sorrentino用肿瘤的耐药基因构建逆转录病毒，然后植入骨髓细胞后再给予药物化疗，这样凡含有耐药性基因的骨髓细胞能承受大剂量的化疗，这种方法目前正在进行临床初探。除以上对癌症采取种种基因治疗外，对遗传性疾病也是很有效的[11]。目前世界上确定对β-地中海性贫血作为基因治疗的首选疾病。
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3 基因治疗存在的问题及前景
基因治疗涉及医学和伦理道德多方面问题，1985年以来，美国对基因治疗试验必须通过三个机构：①国立卫生研究院(NIH)；②重组DNA咨询委员会(Recombinant DNA Advisory committee,RAC)；③食品和药物管理局(FDA)，从而保证了基因治疗用于人类疾病治疗的安全性及可靠性。
3.1 存在问题 ①外基因导入后的表达效率问题。②外基因表达调控问题 例如糖尿病基因治疗，血糖高时需加强受体表达，血糖不高时，不需加强受体表达，就涉及基因表达的调控。③免疫问题 即外基因表达后蛋白质被自身免疫系统识别为外来抗原，产生抗体，引起免疫反应。④反转录病毒作为载体，导入机体，能激活癌基因，而产生癌症，所以常用缺陷型反转录病毒作为载体。最近，美国国立卫生研究院，做了三个骨髓移植基因治疗的猴子，由于辅助病毒污染，产生了恶性淋巴细胞瘤。⑤医疗费用大，国家及个人一时均承受不了。
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3.2 前景
不仅对“不治之症”能得到治疗，而且随着人类基因组结构及功能渐渐被阐明，哪些人对某种疾病的易感性及抵抗性，从而对“不治之症”可以进行预防。
参考文献
1，Anderson W F.Human Gene Therapy.Science,1992,256∶808
2，Aoki K,Yoshida T,Matsumoto N,et al.Gene therapy for peritoneal dissenination of pancreatic cancer by liposome-mediated transfer of perpes simple virus thymidine kinase gene. Hum.Gene Ther,1997,8∶1107～13
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3，Ido A,Nakata K,Katoy,et al.Gene therapy for hapatoma cell using a retrovirus vector carry in herpes simplex virus thumidine kinase gene under the control of human alphafetoproteim gene promator. Cancer Res,1995,55∶3105～3109
4，Sorrentino Bp,Brandt SJ,Bodine D,et al.Selection of drup-resistance bone marrow cells in vivo after retroviral transfer of the human MORI.Science，1992,257∶99～103
5，Gutierrez A A.Gene Therapy for Cancer.Lancet，1992,239∶715.
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6，Yanfang Zheng,Jeren Zhang.Cancer Gene Therapy.肿瘤杂志，2000，13∶1
7，Lary BM,Coveney EC,Philip R,et al.Inhibition of establishied pancreatic cancer following specific active imunotherapy with interleukin-2 gene transduced tumor cells.Cancer Gene therapy,1997,4∶97～104
8，徐克成，吴建文.消化系统癌肿的自杀基因治疗.世界华人消化杂志，1999，7(8)∶13
9，孟照华，何振平.肝癌抑制基因治疗的研究现状.世界华人消化杂志，1999，7(4)∶24
10，黄贤明，魏曙光，王琳芳，等.C-ets-2,c-myc,N-ras三个癌基因联合反义RNA对肝癌细胞恶性表型的逆转.中华肿瘤杂起，1994，16∶243
11，张 晶，陈云弟.基因治疗：治疗遗传病的根本措施.科学导报，1999，134(8)∶18
(2000年8月14日收稿), 百拇医药