非小细胞肺癌化学治疗与血清sAPO-1/Fas、NO的变化
非小细胞肺癌化学治疗与血清sAPO-1/Fas、NO的变化
周建英 朱旗 姚杭平 陈水芳
摘 要 目的 观察化疗药物替尼泊甙(VM-26)、表阿霉素(EPI)、顺铂(DDP)治疗非小细胞肺癌的疗效、毒性及治疗前后血清sAPO-1/Fas、NO含量的变化。方法 42例诊断明确的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者(鳞癌28例，腺癌12例，未分化癌2例)采用VM-26、EPI、DDP联合化疗2个周期。化疗前后分别用双抗体夹心ELISA方法测定血清sAPO-1/Fas含量和用酶还原法测定血清NO含量。结果 化疗的总有效率(完全缓解+部分缓解)为47.6%(20/42)，稳定15例，进展7例。有效组和鳞癌组治疗后血清sAPO-1/Fas水平较治疗前明显下降(P<0.05)。鳞癌组、有效组和腺癌组血清NO水平较治疗前明显升高(P<0.05)。结论 VM-26、EPI、DDP联合化疗对晚期NSCLC有较好的疗效。血清sAPO-1/Fas、NO水平可能反映细胞凋亡水平，可作为对化疗药物的敏感指标。
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主题词：肺肿瘤/药物疗法；癌，非小细胞肺/药物疗法；替尼泊甙；表阿霉素；顺铂； 一氧化氮
细胞凋亡是真核细胞最广泛的死亡方式，与肿瘤消退有关。近来研究表明，Fas及FasL是介导细胞凋亡的一对膜蛋白，当FasL与Fas结合时，可在数小时内诱发Fas表达细胞凋亡，细胞体积缩小，核固缩[1]。NO是存在于体内有多种生物学活性的无机分子，它可以通过影响细胞物质代谢和能量代谢而造成细胞死亡[2]。其作为一种新发现的抗肿瘤分子，已越来越受到重视。当前，晚期NSCLC治疗较为棘手，化疗疗效尚不能令人满意，除内源性耐药外，也取决于抗癌药诱导细胞凋亡的能力[3]。因此，能否诱导肿瘤细胞凋亡，已成为新的化疗目标及筛选抗癌药物的标准。
1998年1月～1999年1月，我科应用替尼泊甙(VM-26)+表阿霉素(EPI)+顺铂(DDP)治疗NSCLC 42例，在治疗前后观察血清sAPO-1/Fas与NO含量变化，为临床应用该方案提供理论依据。
, 百拇医药
材料与方法
一、研究对象
选用经组织学或细胞学检查确诊的NSCLC 42例。男性33例，女性9例。年龄 32～74岁，平均62岁。其中鳞癌28例，腺癌12例，大细胞未分化癌2例。TNM分期采用国际抗癌联盟推出的1997肺癌国际分期修正系统的标准：ⅢA期26例，ⅢB期12例，Ⅳ期4例。
表3 不同病理类型组化疗前后血清sAPO-1/Fas、NO含量的变化
病理类型
例数
sAPO-1/Fas (ng/ml)
P值
NO (μmol/L)
, 百拇医药
P值
治疗前
治疗后
治疗前
治疗后
鳞癌
28
8.68±7.11
1.68±1.74
<0.05
77.07±37.45
125±69.81
<0.05
, 百拇医药
腺癌
12
4.12±4.56
2.94±4.23
>0.05
50.08±47.29
126.80±49.79
<0.05
大细胞未分化癌
2
4.21±1.41
1.80±0.81
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>0.05
19.29± 6.47
44.59±16.43
>0.05
表4 不同疗效组化疗前后血清sAPO-1/Fas、NO含量的变化
临床疗效
例数
sAPO-1/Fas (ng/ml)
P值
NO(μmol/L)
P值
治疗前
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治疗后
治疗前
治疗后
近期有效组 (CR+PR)
20
5.98±3.88
1.41±1.28
<0.05
49.77±29.81
128.61±55.87
<0.05
稳定、进展组 (S+P)
, 百拇医药
22
4.77±4.60
2.34±2.87
>0.05
65.39±59.5
88.83±40.94
>0.05
二、化学治疗
1.化疗方法：化疗前常规行血象、肝、肾功能及心电图检查均在正常范围。采用VM-26+EPI+DDP方案。VM-26每日90 mg/m2，静脉滴入，第1，2，3天；EPI按40 mg/m2，静脉冲入，第1天；DDP每日20 mg/m2，静脉滴入，第1，2，3天。配合水化并常规给予 5-羟色胺受体拮抗剂(康泉)止吐治疗。
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2.疗效评定：按WHO实体瘤客观疗效评定标准分为：完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)和进展(PD)。有效率为CR+PR。毒副反应按WHO制定的标准分为0～Ⅳ度。
三、血清sAPO-1/Fas、NO水平检测
1.标本采集：在化疗前及2个周期化疗结束后，分别抽晨起空腹肘静脉血3 ml，分离血清后置-80℃冻存。
2.测定方法：本实验sAPO-1/Fas检测采用双抗体夹心ELISA法，试剂灵敏度为100 pg/ml。NO检测采用硝酸还原酶特异地将NO-3还原为NO-2，NO-2与显色剂作用生成有色物质，通过显色深浅测定其浓度的高低，吸光度(A，曾称光密度OD)值大小代表NO水平。试剂盒购自美国Genzyme公司，操作均严格按说明书进行。
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四、统计方法
采用均值±标准差表示，所得结果采用t检验。
表1 42例NSCLC临床疗效
病理类型
例数
CR
PR
S
P
CR+PR(%)
鳞癌
28
15
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10
3
53.6
腺癌
12
5
4
3
41.7
大细胞未分化癌
2
1
1
合计
, 百拇医药
42
0
20
15
7
47.6
结果
1.临床疗效：本组患者治疗后临床症状得到缓解，近期总有效率达 47.6%(表1)。随访至1999年2月底，中位生存期420天，平均生存期406.43天，X±s为406.43±9.38, 95%可信区间388.05～424.81。
2.毒副反应：本组病例白细胞总数均有不同程度下降，在用药后第10～15天降至最低值。3例转氨酶轻度升高，2例一过性肌酐升高，治疗结束1周后均恢复正常。无一例出现心脏毒性(表2)。
, 百拇医药
表2 化疗方案毒副反应
毒副反应
Ⅰ度
Ⅱ度
Ⅲ度
Ⅳ度
合计
白细胞减少
16(38.1)
14(33.3)
3( 7.1)
2( 4.8)
35(83.3)
, 百拇医药
血小板减少
4( 9.5)
4( 9.5)
恶心、呕吐
18(42.9)
12(28.6)
2( 4.8)
32(76.2)
脱发
18(42.9)
10(23.8)
28(66.7)
, 百拇医药
注：( )内为% 3.各组血清sAPO-1/Fas、NO含量：化疗后鳞癌组血清 sAPO-1/Fas水平较治疗前明显降低 (P<0.05)，鳞癌组和腺癌组血清NO水平较治疗前明显升高(P<0.05，表3)。化疗前后近期有效组(CR+PR)血清sAPO-1/Fas、NO水平的改变有显著意义(P<0.05，表4)。
讨论
APO-1/Fas相对分子质量为44 600，系跨膜糖蛋白，属神经生长因子与肿瘤坏死因子受体超家属成员，是一个细胞凋亡信号受体，可以诱导APO-1/Fas 蛋白所在细胞凋亡[1]。正常肺泡细胞上皮及肺癌细胞中均有Fas的表达[4]。APO-1/Fas在膜外时以可溶性形式出现(sAPO-1)，患恶性肿瘤时sAPO-1含量上升。sAPO-1可以通过和细胞Fas分子竞争结合FasL而阻断Fas介导的细胞凋亡。因此，血清sAPO-1/Fas的增高，可能为肿瘤细胞逃避Fas介导的细胞凋亡，引起肿瘤细胞无限生长所致。NO是内皮源性舒张因子的主要活性成分，具有免疫防护作用，能够杀伤病原微生物及阻止细胞癌变。Hibbs等[5]首先发现，活化巨噬细胞产生的NO具有抑制细胞生长和细胞毒性作用，能抑制与巨噬细胞共同培养的肿瘤细胞的许多代谢活动，导致瘤细胞内铁大量丧失，细胞死亡。在体内消灭肿瘤细胞是一复杂过程。Dive等[6]认为，抗癌因子抗癌是由于诱导了敏感肿瘤的凋亡，而调节肿瘤凋亡的基因是癌基因，指出肿瘤化疗的目标是诱导细胞凋亡。
, 百拇医药
目前，大多数抗癌药物都能引起其敏感细胞的凋亡，但不同肿瘤细胞对化疗的反应不同。我们以VM-26、EPI、DDP化疗药物联合治疗晚期NSCLC，CR+PR达47.6%。治疗前后对比，鳞癌组和近期有效组血清sAPO-1/Fas水平明显降低，提示Fas介导的细胞凋亡对这两组患者有重要作用[7]；而腺癌组患者治疗前后sAPO-1/Fas的改变并不显著，这可能与腺癌细胞中Fas的表达较低[8]或对该化疗不敏感所致。鳞癌组、腺癌组和近期有效组血清NO水平显著增加，提示化疗后肿瘤细胞凋亡增加，故可作为对化疗药物敏感的指标。另外，鳞癌组治疗前血清sAPO-1/Fas水平高于腺癌组和大细胞未分化癌组(P<0.05)，可能与肿瘤细胞类型、异型性及细胞本身的增殖、凋亡情况有关[7]，值得进一步研究。
根据我们的实验结果和有关文献报道，我们认为VM-26、EPI、DDP联合化疗耐受性良好，毒副反应小，是治疗晚期NSCLC的一个有效方案。血清sAPO-1/Fas和NO水平的变化可能反映细胞凋亡水平，可以作为化疗的敏感指标。
, 百拇医药
作者单位：周建英(310003 杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科)
朱旗(310003 杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科)
陈水芳(310003 杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科)
姚杭平(浙江大学医学院传染病研究所)
参考文献
1，Nagata S, Golstein P. The Fas death factor. Science, 1995,267:1449-1456.
2，Stamler JS. Redox signaling nitrosylation and related target interactions of nitrc oxide. Cell, 1994,78:931-936.
, 百拇医药
3，Mcdonnell TJ, Meyn RE, Robertson LE. Implications of apoptotic cell death regulation in cancer therapy. Semin Cancer Biol, 1995,6:53-60.
4，Fine A, Anderson NL, Rothstein TL, et al, Fas expression in pulmonary alveolar type Ⅱcells. Am J Physiol, 1997,273:64-71.
5，Hibbs JB, Taintor RR, Vavrin Z. Macrophage cytotoxity: role for Larginine deiminase and iminonitrogen oxidation to nitrite. Science, 1987,235:473-476.
, 百拇医药
6，Dive C, Evans CA, Whetton AD. Induction of apoptosis-new targets for cancer chemotherapy. Semin Cancer Biol, 1992,3:417-420.
7，Volm m, Koomagi R. The implications for proliferaton and apoptosis for lung cancer metastasis. Oncol Rep, 1999,6:373-376.
8，Nambu Y, Hughes SJ, Rehemtulla A, et al, Lack of cell surface Fas/APO-1 expression in pulmonary adenocarcinomas. J Clin Invest, 1998,101:1102-1110., 百拇医药
周建英 朱旗 姚杭平 陈水芳
摘 要 目的 观察化疗药物替尼泊甙(VM-26)、表阿霉素(EPI)、顺铂(DDP)治疗非小细胞肺癌的疗效、毒性及治疗前后血清sAPO-1/Fas、NO含量的变化。方法 42例诊断明确的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者(鳞癌28例，腺癌12例，未分化癌2例)采用VM-26、EPI、DDP联合化疗2个周期。化疗前后分别用双抗体夹心ELISA方法测定血清sAPO-1/Fas含量和用酶还原法测定血清NO含量。结果 化疗的总有效率(完全缓解+部分缓解)为47.6%(20/42)，稳定15例，进展7例。有效组和鳞癌组治疗后血清sAPO-1/Fas水平较治疗前明显下降(P<0.05)。鳞癌组、有效组和腺癌组血清NO水平较治疗前明显升高(P<0.05)。结论 VM-26、EPI、DDP联合化疗对晚期NSCLC有较好的疗效。血清sAPO-1/Fas、NO水平可能反映细胞凋亡水平，可作为对化疗药物的敏感指标。
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主题词：肺肿瘤/药物疗法；癌，非小细胞肺/药物疗法；替尼泊甙；表阿霉素；顺铂； 一氧化氮
细胞凋亡是真核细胞最广泛的死亡方式，与肿瘤消退有关。近来研究表明，Fas及FasL是介导细胞凋亡的一对膜蛋白，当FasL与Fas结合时，可在数小时内诱发Fas表达细胞凋亡，细胞体积缩小，核固缩[1]。NO是存在于体内有多种生物学活性的无机分子，它可以通过影响细胞物质代谢和能量代谢而造成细胞死亡[2]。其作为一种新发现的抗肿瘤分子，已越来越受到重视。当前，晚期NSCLC治疗较为棘手，化疗疗效尚不能令人满意，除内源性耐药外，也取决于抗癌药诱导细胞凋亡的能力[3]。因此，能否诱导肿瘤细胞凋亡，已成为新的化疗目标及筛选抗癌药物的标准。
1998年1月～1999年1月，我科应用替尼泊甙(VM-26)+表阿霉素(EPI)+顺铂(DDP)治疗NSCLC 42例，在治疗前后观察血清sAPO-1/Fas与NO含量变化，为临床应用该方案提供理论依据。
, 百拇医药
材料与方法
一、研究对象
选用经组织学或细胞学检查确诊的NSCLC 42例。男性33例，女性9例。年龄 32～74岁，平均62岁。其中鳞癌28例，腺癌12例，大细胞未分化癌2例。TNM分期采用国际抗癌联盟推出的1997肺癌国际分期修正系统的标准：ⅢA期26例，ⅢB期12例，Ⅳ期4例。
表3 不同病理类型组化疗前后血清sAPO-1/Fas、NO含量的变化
病理类型
例数
sAPO-1/Fas (ng/ml)
P值
NO (μmol/L)
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P值
治疗前
治疗后
治疗前
治疗后
鳞癌
28
8.68±7.11
1.68±1.74
<0.05
77.07±37.45
125±69.81
<0.05
, 百拇医药
腺癌
12
4.12±4.56
2.94±4.23
>0.05
50.08±47.29
126.80±49.79
<0.05
大细胞未分化癌
2
4.21±1.41
1.80±0.81
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>0.05
19.29± 6.47
44.59±16.43
>0.05
表4 不同疗效组化疗前后血清sAPO-1/Fas、NO含量的变化
临床疗效
例数
sAPO-1/Fas (ng/ml)
P值
NO(μmol/L)
P值
治疗前
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治疗后
治疗前
治疗后
近期有效组 (CR+PR)
20
5.98±3.88
1.41±1.28
<0.05
49.77±29.81
128.61±55.87
<0.05
稳定、进展组 (S+P)
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22
4.77±4.60
2.34±2.87
>0.05
65.39±59.5
88.83±40.94
>0.05
二、化学治疗
1.化疗方法：化疗前常规行血象、肝、肾功能及心电图检查均在正常范围。采用VM-26+EPI+DDP方案。VM-26每日90 mg/m2，静脉滴入，第1，2，3天；EPI按40 mg/m2，静脉冲入，第1天；DDP每日20 mg/m2，静脉滴入，第1，2，3天。配合水化并常规给予 5-羟色胺受体拮抗剂(康泉)止吐治疗。
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2.疗效评定：按WHO实体瘤客观疗效评定标准分为：完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)和进展(PD)。有效率为CR+PR。毒副反应按WHO制定的标准分为0～Ⅳ度。
三、血清sAPO-1/Fas、NO水平检测
1.标本采集：在化疗前及2个周期化疗结束后，分别抽晨起空腹肘静脉血3 ml，分离血清后置-80℃冻存。
2.测定方法：本实验sAPO-1/Fas检测采用双抗体夹心ELISA法，试剂灵敏度为100 pg/ml。NO检测采用硝酸还原酶特异地将NO-3还原为NO-2，NO-2与显色剂作用生成有色物质，通过显色深浅测定其浓度的高低，吸光度(A，曾称光密度OD)值大小代表NO水平。试剂盒购自美国Genzyme公司，操作均严格按说明书进行。
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四、统计方法
采用均值±标准差表示，所得结果采用t检验。
表1 42例NSCLC临床疗效
病理类型
例数
CR
PR
S
P
CR+PR(%)
鳞癌
28
15
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10
3
53.6
腺癌
12
5
4
3
41.7
大细胞未分化癌
2
1
1
合计
, 百拇医药
42
0
20
15
7
47.6
结果
1.临床疗效：本组患者治疗后临床症状得到缓解，近期总有效率达 47.6%(表1)。随访至1999年2月底，中位生存期420天，平均生存期406.43天，X±s为406.43±9.38, 95%可信区间388.05～424.81。
2.毒副反应：本组病例白细胞总数均有不同程度下降，在用药后第10～15天降至最低值。3例转氨酶轻度升高，2例一过性肌酐升高，治疗结束1周后均恢复正常。无一例出现心脏毒性(表2)。
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表2 化疗方案毒副反应
毒副反应
Ⅰ度
Ⅱ度
Ⅲ度
Ⅳ度
合计
白细胞减少
16(38.1)
14(33.3)
3( 7.1)
2( 4.8)
35(83.3)
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血小板减少
4( 9.5)
4( 9.5)
恶心、呕吐
18(42.9)
12(28.6)
2( 4.8)
32(76.2)
脱发
18(42.9)
10(23.8)
28(66.7)
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注：( )内为% 3.各组血清sAPO-1/Fas、NO含量：化疗后鳞癌组血清 sAPO-1/Fas水平较治疗前明显降低 (P<0.05)，鳞癌组和腺癌组血清NO水平较治疗前明显升高(P<0.05，表3)。化疗前后近期有效组(CR+PR)血清sAPO-1/Fas、NO水平的改变有显著意义(P<0.05，表4)。
讨论
APO-1/Fas相对分子质量为44 600，系跨膜糖蛋白，属神经生长因子与肿瘤坏死因子受体超家属成员，是一个细胞凋亡信号受体，可以诱导APO-1/Fas 蛋白所在细胞凋亡[1]。正常肺泡细胞上皮及肺癌细胞中均有Fas的表达[4]。APO-1/Fas在膜外时以可溶性形式出现(sAPO-1)，患恶性肿瘤时sAPO-1含量上升。sAPO-1可以通过和细胞Fas分子竞争结合FasL而阻断Fas介导的细胞凋亡。因此，血清sAPO-1/Fas的增高，可能为肿瘤细胞逃避Fas介导的细胞凋亡，引起肿瘤细胞无限生长所致。NO是内皮源性舒张因子的主要活性成分，具有免疫防护作用，能够杀伤病原微生物及阻止细胞癌变。Hibbs等[5]首先发现，活化巨噬细胞产生的NO具有抑制细胞生长和细胞毒性作用，能抑制与巨噬细胞共同培养的肿瘤细胞的许多代谢活动，导致瘤细胞内铁大量丧失，细胞死亡。在体内消灭肿瘤细胞是一复杂过程。Dive等[6]认为，抗癌因子抗癌是由于诱导了敏感肿瘤的凋亡，而调节肿瘤凋亡的基因是癌基因，指出肿瘤化疗的目标是诱导细胞凋亡。
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目前，大多数抗癌药物都能引起其敏感细胞的凋亡，但不同肿瘤细胞对化疗的反应不同。我们以VM-26、EPI、DDP化疗药物联合治疗晚期NSCLC，CR+PR达47.6%。治疗前后对比，鳞癌组和近期有效组血清sAPO-1/Fas水平明显降低，提示Fas介导的细胞凋亡对这两组患者有重要作用[7]；而腺癌组患者治疗前后sAPO-1/Fas的改变并不显著，这可能与腺癌细胞中Fas的表达较低[8]或对该化疗不敏感所致。鳞癌组、腺癌组和近期有效组血清NO水平显著增加，提示化疗后肿瘤细胞凋亡增加，故可作为对化疗药物敏感的指标。另外，鳞癌组治疗前血清sAPO-1/Fas水平高于腺癌组和大细胞未分化癌组(P<0.05)，可能与肿瘤细胞类型、异型性及细胞本身的增殖、凋亡情况有关[7]，值得进一步研究。
根据我们的实验结果和有关文献报道，我们认为VM-26、EPI、DDP联合化疗耐受性良好，毒副反应小，是治疗晚期NSCLC的一个有效方案。血清sAPO-1/Fas和NO水平的变化可能反映细胞凋亡水平，可以作为化疗的敏感指标。
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作者单位：周建英(310003 杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科)
朱旗(310003 杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科)
陈水芳(310003 杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科)
姚杭平(浙江大学医学院传染病研究所)
参考文献
1，Nagata S, Golstein P. The Fas death factor. Science, 1995,267:1449-1456.
2，Stamler JS. Redox signaling nitrosylation and related target interactions of nitrc oxide. Cell, 1994,78:931-936.
, 百拇医药
3，Mcdonnell TJ, Meyn RE, Robertson LE. Implications of apoptotic cell death regulation in cancer therapy. Semin Cancer Biol, 1995,6:53-60.
4，Fine A, Anderson NL, Rothstein TL, et al, Fas expression in pulmonary alveolar type Ⅱcells. Am J Physiol, 1997,273:64-71.
5，Hibbs JB, Taintor RR, Vavrin Z. Macrophage cytotoxity: role for Larginine deiminase and iminonitrogen oxidation to nitrite. Science, 1987,235:473-476.
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6，Dive C, Evans CA, Whetton AD. Induction of apoptosis-new targets for cancer chemotherapy. Semin Cancer Biol, 1992,3:417-420.
7，Volm m, Koomagi R. The implications for proliferaton and apoptosis for lung cancer metastasis. Oncol Rep, 1999,6:373-376.
8，Nambu Y, Hughes SJ, Rehemtulla A, et al, Lack of cell surface Fas/APO-1 expression in pulmonary adenocarcinomas. J Clin Invest, 1998,101:1102-1110., 百拇医药