ANAE染色和抗Thy 1-SPA菌体花环双标记法的建立及其用于检测小鼠T淋巴细胞的研究报告
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第七届肿瘤和第
作者：骆云鹏 范维珂 段积华 李培然 骆询
单位：骆云鹏 范维珂 段积华 李培然(重庆医科大学病理生理教研室， 重庆 400016)；骆询( College of Arts and Sciences, Suffolk University, Boston, MA 02108， USA)
关键词：
中国病理生理杂志0010236
Thy抗原[Thy(θ)antigen]是T淋巴细胞表面特异标志，系由第9对染色体等位基因编码的抗原分子。Mueller发现，抗θ血清可破坏ANAE阳性淋巴细胞，ANAE阴性者则否。设想，小鼠ANAE阳性淋巴细胞可能正是携有Thy 1表面标志物的淋巴细胞，应该可以直接获得证明。为此，作者进行了小鼠淋巴细胞抗Thy 1-SPA菌体花环与ANAE染色双标记的实验研究。目的：建立ANAE染色联合抗Thy 1-SPA菌体花环双标记法；利用此法证明抗θ抗体对ANAE阳性淋巴细胞的特异作用。方法：利用双标记法对正常小鼠胸腺及脾细胞进行检测，观察抗Thy 1-SPA抗体对ANAE阳性细胞结合的专一性。结果：在胸腺细胞，ANAE+-抗Thy 1 SPA菌体花环+T淋巴细胞为91.27%±5.52%,ANAE+细胞为95.46%±2.40%及抗Thy 1-SPA菌体花环+细胞为93.51%±4.10%;而脾细胞分别为41.45%±3.97%,45.85%±4.40%和47.51%±4.33%。双标记阳性率略低于总的ANAE+或总抗θ菌体花环+数，但三者之间无明显的差异(P>0.05)。结论：ANAE-抗Thy 1 SPA菌体花环法的成功建立，首次用此法证明抗θ血清对ANAE阳性细胞的特异作用。讨论：进行双标记测试的体会：为保证抗Thy 1-SPA菌体花环应有的最高阳性率，宜选用10%的标准菌体原液；鉴于作者观察到脾细胞悬液有一定量的单核吞噬细胞，故建议用ANAE-Thy 1-SPA菌体花环试验时，复染甲基绿以利于细胞识别。行ANAE染色时，应注意细胞悬液需及时固定，并严格掌握孵育液的pH及孵育时间。双标记法中标记物检测的原理ANAE法中，ANAE是一种在酸性环境发生作用的非特异性同功酶，能将底物α-乙酸萘酯水解生成α-萘酚，后者在羟基相邻的碳位上，与六偶氮副品红结合，产生棕色沉淀，沉积于胞浆。SPA花环法的第一抗体为抗Thy 1血清；第二抗体代之以金黄色葡萄球菌Cowan Ⅰ菌株，此菌株胞壁含有A蛋白(SPA)，能与Ig的Fc段结合，引起细菌粘附。T细胞膜上的Thy1 这种分化抗原，分子结构属于免疫球蛋白超家族(Ig superfamily)成员，由单基因编码。为111个氨基酸组成的肽链，籍尾部的磷酸肌醇酰基结合至C末端半胱氨酸残基上，使Thy 1多肽分子锚定于T细胞膜双层类脂层之间。相应抗体-抗Thy 1抗体对小鼠T细胞是一种强而有效的活化剂，其活化依赖于T细胞受体(T cell receptor, TCR)与CD3的复合物(即TCR-CD3复合物)的协同表达。其中，最常见的组成形式为TCRαβ-CD3γδεεζζ，相应的发生系通过由原癌基因src所编码的酪氨酸蛋白激酶P59fyn使TCR-CD3复合物于胞浆内酪氨酸磷酸化，促使细胞内信号传递的进行，造成相应细胞破坏。, 百拇医药
单位：骆云鹏 范维珂 段积华 李培然(重庆医科大学病理生理教研室， 重庆 400016)；骆询( College of Arts and Sciences, Suffolk University, Boston, MA 02108， USA)
关键词：
中国病理生理杂志0010236
Thy抗原[Thy(θ)antigen]是T淋巴细胞表面特异标志，系由第9对染色体等位基因编码的抗原分子。Mueller发现，抗θ血清可破坏ANAE阳性淋巴细胞，ANAE阴性者则否。设想，小鼠ANAE阳性淋巴细胞可能正是携有Thy 1表面标志物的淋巴细胞，应该可以直接获得证明。为此，作者进行了小鼠淋巴细胞抗Thy 1-SPA菌体花环与ANAE染色双标记的实验研究。目的：建立ANAE染色联合抗Thy 1-SPA菌体花环双标记法；利用此法证明抗θ抗体对ANAE阳性淋巴细胞的特异作用。方法：利用双标记法对正常小鼠胸腺及脾细胞进行检测，观察抗Thy 1-SPA抗体对ANAE阳性细胞结合的专一性。结果：在胸腺细胞，ANAE+-抗Thy 1 SPA菌体花环+T淋巴细胞为91.27%±5.52%,ANAE+细胞为95.46%±2.40%及抗Thy 1-SPA菌体花环+细胞为93.51%±4.10%;而脾细胞分别为41.45%±3.97%,45.85%±4.40%和47.51%±4.33%。双标记阳性率略低于总的ANAE+或总抗θ菌体花环+数，但三者之间无明显的差异(P>0.05)。结论：ANAE-抗Thy 1 SPA菌体花环法的成功建立，首次用此法证明抗θ血清对ANAE阳性细胞的特异作用。讨论：进行双标记测试的体会：为保证抗Thy 1-SPA菌体花环应有的最高阳性率，宜选用10%的标准菌体原液；鉴于作者观察到脾细胞悬液有一定量的单核吞噬细胞，故建议用ANAE-Thy 1-SPA菌体花环试验时，复染甲基绿以利于细胞识别。行ANAE染色时，应注意细胞悬液需及时固定，并严格掌握孵育液的pH及孵育时间。双标记法中标记物检测的原理ANAE法中，ANAE是一种在酸性环境发生作用的非特异性同功酶，能将底物α-乙酸萘酯水解生成α-萘酚，后者在羟基相邻的碳位上，与六偶氮副品红结合，产生棕色沉淀，沉积于胞浆。SPA花环法的第一抗体为抗Thy 1血清；第二抗体代之以金黄色葡萄球菌Cowan Ⅰ菌株，此菌株胞壁含有A蛋白(SPA)，能与Ig的Fc段结合，引起细菌粘附。T细胞膜上的Thy1 这种分化抗原，分子结构属于免疫球蛋白超家族(Ig superfamily)成员，由单基因编码。为111个氨基酸组成的肽链，籍尾部的磷酸肌醇酰基结合至C末端半胱氨酸残基上，使Thy 1多肽分子锚定于T细胞膜双层类脂层之间。相应抗体-抗Thy 1抗体对小鼠T细胞是一种强而有效的活化剂，其活化依赖于T细胞受体(T cell receptor, TCR)与CD3的复合物(即TCR-CD3复合物)的协同表达。其中，最常见的组成形式为TCRαβ-CD3γδεεζζ，相应的发生系通过由原癌基因src所编码的酪氨酸蛋白激酶P59fyn使TCR-CD3复合物于胞浆内酪氨酸磷酸化，促使细胞内信号传递的进行，造成相应细胞破坏。, 百拇医药