碱性成纤维细胞生长因子对兔晶体上皮细胞增殖作用的免疫组织化学研究
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第六届受体和信
作者：彭惠 李平华 罗莉霞 骆云鹏 汤为学
单位：彭惠 李平华 罗莉霞(重庆医科大学附属第一医院眼科，重庆 400016)；骆云鹏 汤为学(重庆医科大学病理生理教研室，重庆 400046)
关键词：
中国病理生理杂志0010337
目的：晶体后囊混浊(后发性白内障)是白内障术后影响视力的主要远期并发症。残留的晶体上皮细胞的增殖、并移行至后囊下和向成纤维细胞的转化是后囊混浊的基本病理过程。探讨影响晶体上皮细胞增殖的因素，对后囊混浊的发病机理及防治有极其重要的意义。方法：在HE染色观察细胞形态的基础上，用免疫组织化学法观察成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)作用于兔晶体上皮细胞后PCNA(proliferating cell nuclear antigen)的表达。首先进行兔眼晶体上皮细胞原代及传代培养，实验分正常细胞组、添加bFGF细胞组。在第2～3代培养细胞中添加bFGF，浓度为102 ng/mL，加入6孔板中在37℃7%CO2饱和湿度的培养箱中培养72 h后，多聚甲醛固定30 min，进行常规HE染色和免疫组织化学染色。用HL60白血病细胞作阳性对照。结果：在原代及传代培养兔晶体上皮细胞成功的基础上，HE染色细胞呈多边形，见兔晶体上皮细胞胞浆丰富，呈伊红色，核略小，居中，呈蓝黑色。正常细胞组PCNA表达呈阴性；添加bFGF组PCNA表达呈强阳性，即核呈深棕色。讨论：体外培养晶体上皮细胞对观察细胞分化、研究白内障和后囊混浊形成机制以及筛选防治后囊混浊的药物都有十分重要的价值。但由于晶体前囊膜小，所含细胞数较少，进行原代培养的成功率较低，甚至无法重复，给研究工作带来一定困难。我们在配培养液时注意pH，用前加纯的胎牛血清，取材时截取尽可能大的囊膜，多获取赤道区的晶体上皮细胞 ，甚至可携带少量皮质，以及用塑料培养瓶，使囊膜易于贴附等，增加了兔晶体上皮细胞原代培养的成功率。同时囊膜剪得细小，只滴两至三滴培养液作润湿，巴氏吸管转移囊膜片至培养瓶的培养面时，尽量涂布均匀，如液体较多宜弃其一部分，从而为原代兔晶体上皮细胞的良好生长创造了条件。PCNA主要存在于增殖细胞的S期，它是一种分子量为36 000的酸性非组织核蛋白，属DNA聚合酶δ的辅助蛋白，在DNA合成中极为必需，PCNA的合成和表达与细胞的增殖状态有关，已广泛用于细胞增殖的检测。本实验添加bFGF组PCNA表达呈强阳性，证实了bFGF是促进兔晶体上皮细胞的增殖的重要因素。, http://www.100md.com
单位：彭惠 李平华 罗莉霞(重庆医科大学附属第一医院眼科，重庆 400016)；骆云鹏 汤为学(重庆医科大学病理生理教研室，重庆 400046)
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目的：晶体后囊混浊(后发性白内障)是白内障术后影响视力的主要远期并发症。残留的晶体上皮细胞的增殖、并移行至后囊下和向成纤维细胞的转化是后囊混浊的基本病理过程。探讨影响晶体上皮细胞增殖的因素，对后囊混浊的发病机理及防治有极其重要的意义。方法：在HE染色观察细胞形态的基础上，用免疫组织化学法观察成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)作用于兔晶体上皮细胞后PCNA(proliferating cell nuclear antigen)的表达。首先进行兔眼晶体上皮细胞原代及传代培养，实验分正常细胞组、添加bFGF细胞组。在第2～3代培养细胞中添加bFGF，浓度为102 ng/mL，加入6孔板中在37℃7%CO2饱和湿度的培养箱中培养72 h后，多聚甲醛固定30 min，进行常规HE染色和免疫组织化学染色。用HL60白血病细胞作阳性对照。结果：在原代及传代培养兔晶体上皮细胞成功的基础上，HE染色细胞呈多边形，见兔晶体上皮细胞胞浆丰富，呈伊红色，核略小，居中，呈蓝黑色。正常细胞组PCNA表达呈阴性；添加bFGF组PCNA表达呈强阳性，即核呈深棕色。讨论：体外培养晶体上皮细胞对观察细胞分化、研究白内障和后囊混浊形成机制以及筛选防治后囊混浊的药物都有十分重要的价值。但由于晶体前囊膜小，所含细胞数较少，进行原代培养的成功率较低，甚至无法重复，给研究工作带来一定困难。我们在配培养液时注意pH，用前加纯的胎牛血清，取材时截取尽可能大的囊膜，多获取赤道区的晶体上皮细胞 ，甚至可携带少量皮质，以及用塑料培养瓶，使囊膜易于贴附等，增加了兔晶体上皮细胞原代培养的成功率。同时囊膜剪得细小，只滴两至三滴培养液作润湿，巴氏吸管转移囊膜片至培养瓶的培养面时，尽量涂布均匀，如液体较多宜弃其一部分，从而为原代兔晶体上皮细胞的良好生长创造了条件。PCNA主要存在于增殖细胞的S期，它是一种分子量为36 000的酸性非组织核蛋白，属DNA聚合酶δ的辅助蛋白，在DNA合成中极为必需，PCNA的合成和表达与细胞的增殖状态有关，已广泛用于细胞增殖的检测。本实验添加bFGF组PCNA表达呈强阳性，证实了bFGF是促进兔晶体上皮细胞的增殖的重要因素。, http://www.100md.com