Alzheimer病实验模型的研究
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第六届受体和信
作者：王建枝 王全保 李先涛 汪义朋 魏泽兰 夏若寒 王群 郝天玲 王小川 刘蓉
单位：同济医科大学病理生理教研室，湖北 武汉 430030
关键词：
中国病理生理杂志0010307
目的：Alzheimer病(Alzheimer disease, AD)的主要脑病理改变是神经原纤维缠结(neurofibrillary thangles, NFT)和老年斑(senile plaques, SP)，且前者与AD临床痴呆症状呈相关关系。NFT的主要成分是以双螺旋丝(pairedhelical filament, PHF)形成聚集的异常磷酸化的tau蛋白，大量体外研究资料显示：蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶调节失衡是tau蛋白异常磷酸化的基础。方法：采用蛋白激酶激活剂和/或蛋白磷酸酯酶抑制剂从动物整体和细胞水平模拟AD样磷酸化系统失衡，并对实验动物行为以及大鼠组织或培养细胞的病理改变进行了检测。结果：(1)大鼠海马注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ， GaMKⅡ)激活剂缓激肽(Bradykinin, BK)可引起大鼠出现学习记忆障碍，而单纯注射蛋白磷酸酯酶(PP)-2B的抑制环胞菌素A(cyclosporin A)不引起实验动物的行为障碍。(2)单纯注射BK引起12c8，M4和PHF-1免疫显色增强，提示BK注射引起tau蛋白的Scr-262/356，Thr-231/235和Scr-396/404位过度磷酸化。(3) 单纯注射CSA导致M4和PHF-1免疫显色增强，但12c8无改变，提示CSA不引起Ser-262/356位的过度磷酸化。可见，tau蛋白的Ser-262/356位磷酸化似乎与动物的学习记忆障碍相关。(4)在人成神经瘤细胞(SHSY5Y)中加入PP-2A和PP-1的特异性抑制剂(okadaik acid, OA)，可引起细胞突出起缩短直至消失，细胞活性降低直至死亡，出现凋亡特异性改变，细胞微管破坏。(5)OA使SY5Y细胞中识别磷酸化神经细丝(neurofilament, NF)的SMI31和SMI34抗体显色明显增强并向胞浆及核周聚集，而识别非磷酸化NF的SMI32，SMI33和NR4显色明显减弱，使认识管蛋白的抗体DM1A显色显著减弱，提示OA抑制PP-2A和部分抑制PP-1后可导致NF的过度磷酸及微管破坏。(6)褪黑激素对上述OA损伤有明显保护作用。结论：从整体或细胞水平干扰特定蛋白质磷酸系统可导致AD样行为和部分病理改变。该研究为建立AD实验模型提供了有用的新资料。, 百拇医药
单位：同济医科大学病理生理教研室，湖北 武汉 430030
关键词：
中国病理生理杂志0010307
目的：Alzheimer病(Alzheimer disease, AD)的主要脑病理改变是神经原纤维缠结(neurofibrillary thangles, NFT)和老年斑(senile plaques, SP)，且前者与AD临床痴呆症状呈相关关系。NFT的主要成分是以双螺旋丝(pairedhelical filament, PHF)形成聚集的异常磷酸化的tau蛋白，大量体外研究资料显示：蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶调节失衡是tau蛋白异常磷酸化的基础。方法：采用蛋白激酶激活剂和/或蛋白磷酸酯酶抑制剂从动物整体和细胞水平模拟AD样磷酸化系统失衡，并对实验动物行为以及大鼠组织或培养细胞的病理改变进行了检测。结果：(1)大鼠海马注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ， GaMKⅡ)激活剂缓激肽(Bradykinin, BK)可引起大鼠出现学习记忆障碍，而单纯注射蛋白磷酸酯酶(PP)-2B的抑制环胞菌素A(cyclosporin A)不引起实验动物的行为障碍。(2)单纯注射BK引起12c8，M4和PHF-1免疫显色增强，提示BK注射引起tau蛋白的Scr-262/356，Thr-231/235和Scr-396/404位过度磷酸化。(3) 单纯注射CSA导致M4和PHF-1免疫显色增强，但12c8无改变，提示CSA不引起Ser-262/356位的过度磷酸化。可见，tau蛋白的Ser-262/356位磷酸化似乎与动物的学习记忆障碍相关。(4)在人成神经瘤细胞(SHSY5Y)中加入PP-2A和PP-1的特异性抑制剂(okadaik acid, OA)，可引起细胞突出起缩短直至消失，细胞活性降低直至死亡，出现凋亡特异性改变，细胞微管破坏。(5)OA使SY5Y细胞中识别磷酸化神经细丝(neurofilament, NF)的SMI31和SMI34抗体显色明显增强并向胞浆及核周聚集，而识别非磷酸化NF的SMI32，SMI33和NR4显色明显减弱，使认识管蛋白的抗体DM1A显色显著减弱，提示OA抑制PP-2A和部分抑制PP-1后可导致NF的过度磷酸及微管破坏。(6)褪黑激素对上述OA损伤有明显保护作用。结论：从整体或细胞水平干扰特定蛋白质磷酸系统可导致AD样行为和部分病理改变。该研究为建立AD实验模型提供了有用的新资料。, 百拇医药