内源性过氧亚硝基阴离子参与介导内毒素致肺动脉内皮细胞的损伤作用
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第六届受体和信
作者：谷振勇 凌亦凌
单位：河北医科大学病理生理教研室，河北 石家庄 050017
关键词：
中国病理生理杂志0010302
目的： 在培养的小牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)水平，观察LPS对BPAEC诱生ONOO-能力及内皮源性ONOO-在LPS致BPAEC损伤中的作用，以探讨LPS引起肺动脉内皮细胞损伤的新机制。方法：用流式细胞分析技术检测ONOO-生成标志物NT的荧光强度(任意单位，代表内源性ONOO-的生成量)和NT阳性细胞数，计算NT阳性细胞百分率。结果：(1) 1 μg、5 μg和10 μg/mL LPS剂量依赖性引起BPAEC诱生NT(亦即ONOO-)明显增多，分别为6.36±0.11、6.55±0.30和7.24±0.40，显著高于溶剂对照组(3.27±0.15，P<0.01)；与溶剂组比较，NT阳性细胞数和百分率也明显增多或增高(P<0.05)。iNOS选择性抑制剂AG明显抑制5 μg/mL LPS诱生ONOO-增多，NT荧光强度降至4.20±0.72(P<0.05)，而NT阳性细胞数和百分率分别减少或降低，但与5 μg/mL LPS组比较无明显差异(P>0.05)，表明AG使BPAEC生成ONOO-能力降低。(2)在LPS作用下，BPAEC培养上清中的MDA含量和LDH活性明显增多和增高，并呈现剂量依赖性效应。(3)1 μg、5 μg和10 μg/mL LPS可诱导BPAEC凋亡增多，凋亡百分率分别为6.63%±0.83%、13.50%±0.60和13.63%±0.78%，明显多于溶剂组(2.43%±0.80%，P<0.05，P<0.01)；凋亡细胞绝对数也明显增多。BPAEC用EB荧光染色后，各组均可见细胞染色质浓集、核变小等细胞凋亡征象。AG可致5 μg/mL LPS引起的BPAEC凋亡百分率和凋亡细胞数明显降低或减少，分别由13.50%±0.60%降至8.66%±0.44%(P<0.01)，凋亡细胞数由2693±121减至1468±68(P<0.05)，但仍明显高于溶剂组。(4)线粒体呼吸用MTT试验检测，用溶剂组吸光度均值的百分比表示。线粒体膜电位(Δφ)用FCM检测线粒体膜保留荧光分子R-123能力表示(任意单位)。LPS(1 μg/mL、5 μg/mL和10 μg/mL)可剂量依赖性的抑制线粒体呼吸，分别为75.77%±4.54%、62.45%±2.87%和49.51%±10.84%；1 μg/mL LPS组Δφ略增高，5 μg/mL和10 μg/mL LPS组Δφ明显降低，分别为42.00±1.08和35.00±3.60(P<0.01，与对照组的47.00±0.70比较)。结论：LPS可引起培养的牛肺动脉内皮细胞生成ONOO-增多；ONOO-可参与介导LPS所致的细胞过氧化损伤与细胞凋亡。
国家自然科学基金资助(No. 39870317), 百拇医药
单位：河北医科大学病理生理教研室，河北 石家庄 050017
关键词：
中国病理生理杂志0010302
目的： 在培养的小牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)水平，观察LPS对BPAEC诱生ONOO-能力及内皮源性ONOO-在LPS致BPAEC损伤中的作用，以探讨LPS引起肺动脉内皮细胞损伤的新机制。方法：用流式细胞分析技术检测ONOO-生成标志物NT的荧光强度(任意单位，代表内源性ONOO-的生成量)和NT阳性细胞数，计算NT阳性细胞百分率。结果：(1) 1 μg、5 μg和10 μg/mL LPS剂量依赖性引起BPAEC诱生NT(亦即ONOO-)明显增多，分别为6.36±0.11、6.55±0.30和7.24±0.40，显著高于溶剂对照组(3.27±0.15，P<0.01)；与溶剂组比较，NT阳性细胞数和百分率也明显增多或增高(P<0.05)。iNOS选择性抑制剂AG明显抑制5 μg/mL LPS诱生ONOO-增多，NT荧光强度降至4.20±0.72(P<0.05)，而NT阳性细胞数和百分率分别减少或降低，但与5 μg/mL LPS组比较无明显差异(P>0.05)，表明AG使BPAEC生成ONOO-能力降低。(2)在LPS作用下，BPAEC培养上清中的MDA含量和LDH活性明显增多和增高，并呈现剂量依赖性效应。(3)1 μg、5 μg和10 μg/mL LPS可诱导BPAEC凋亡增多，凋亡百分率分别为6.63%±0.83%、13.50%±0.60和13.63%±0.78%，明显多于溶剂组(2.43%±0.80%，P<0.05，P<0.01)；凋亡细胞绝对数也明显增多。BPAEC用EB荧光染色后，各组均可见细胞染色质浓集、核变小等细胞凋亡征象。AG可致5 μg/mL LPS引起的BPAEC凋亡百分率和凋亡细胞数明显降低或减少，分别由13.50%±0.60%降至8.66%±0.44%(P<0.01)，凋亡细胞数由2693±121减至1468±68(P<0.05)，但仍明显高于溶剂组。(4)线粒体呼吸用MTT试验检测，用溶剂组吸光度均值的百分比表示。线粒体膜电位(Δφ)用FCM检测线粒体膜保留荧光分子R-123能力表示(任意单位)。LPS(1 μg/mL、5 μg/mL和10 μg/mL)可剂量依赖性的抑制线粒体呼吸，分别为75.77%±4.54%、62.45%±2.87%和49.51%±10.84%；1 μg/mL LPS组Δφ略增高，5 μg/mL和10 μg/mL LPS组Δφ明显降低，分别为42.00±1.08和35.00±3.60(P<0.01，与对照组的47.00±0.70比较)。结论：LPS可引起培养的牛肺动脉内皮细胞生成ONOO-增多；ONOO-可参与介导LPS所致的细胞过氧化损伤与细胞凋亡。
国家自然科学基金资助(No. 39870317), 百拇医药