含ITIM的新型膜蛋白分子LLIR及其跨膜缺失突变体的克隆与功能研究
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第三届消化专业
作者：黄欣 袁正隆 张明徽 陈国友 章卫平 于益芝 曹雪涛
单位：第二军医大学免疫学教研室，上海 200433
关键词：
树突状细胞
树突状细胞(dendritic cells, DCs)是重要的抗原提呈细胞，其部分功能需要通过膜受体来介导，研究DCs表面的受体是了解抗原提呈功能机制的途径之一。研究得较早的与DCs功能相关的膜表面分子有DEC-205和MMR，这两个分子都是Ⅰ型跨膜蛋白，胞外含有数个C型lectin结构域，对于DCs摄取抗原的功能很重要。另外，也有带lectin结构域的Ⅱ型跨膜分子被发现，如CLEC-1、CLEC-2、Dectin-1、Dectin-2，这些分子的胞外段都含有一个CRD，除了在DCs表达以外，也在髓系细胞和单核细胞中表达。此外还发现表达在DCs表面的抑制型受体，如ILT3和ILT4(immunoglobulin-like transcript)，其胞内段含ITIM，胞外段是免疫球蛋白样结构，这两个分子在髓系细胞和单核细胞中也有表达，能向细胞内传递抑制性信号。本实验首先利用减数杂交技术从KLH刺激的DCs中克隆到一个具有C型lectin结构域的新分子，得到其全长序列后在公共基因数据库登录(序列号：AF067800)：分析显示该分子是一包含C型lectin结构域的Ⅱ型跨膜蛋白，胞内区段含有ITIM特征结构；染色体定位为12p13，同源分析最为相近的分子集群为ASGPRs，该分子被命名为lectin样的免疫受体(LLIR)。对于LLIR在组织细胞中表达所作的Northern、RT-PCR分析提示LLIR在正常组织中表达丰度很低，主要表达在DCs、前髓系细胞、B细胞、肝、脾。在RT-PCR分析过程中克隆到了LLIR的两个剪切变异体(variants)，分别命名为LLIRv1、LLIRv2。原核表达LLIRv2蛋白后制备、纯化了抗LLIRv2的多克隆抗血清。Western检测显示LLIR在体内是一糖基化蛋白，分子量约60 kD，以单体形式存在，主要表达在DCs、前髓系细胞、B细胞中；同时通过基因转染真核细胞瞬时表达、体外翻译LLIR和LLIRv2证实两个分子在体内的分子量几乎是一致的。此外，利用免疫共沉淀证实LLIR胞内段的ITIM具有结合SHP-1的潜在能力，提示LLIR很可能是一个新型抑制型受体。, http://www.100md.com
单位：第二军医大学免疫学教研室，上海 200433
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树突状细胞
树突状细胞(dendritic cells, DCs)是重要的抗原提呈细胞，其部分功能需要通过膜受体来介导，研究DCs表面的受体是了解抗原提呈功能机制的途径之一。研究得较早的与DCs功能相关的膜表面分子有DEC-205和MMR，这两个分子都是Ⅰ型跨膜蛋白，胞外含有数个C型lectin结构域，对于DCs摄取抗原的功能很重要。另外，也有带lectin结构域的Ⅱ型跨膜分子被发现，如CLEC-1、CLEC-2、Dectin-1、Dectin-2，这些分子的胞外段都含有一个CRD，除了在DCs表达以外，也在髓系细胞和单核细胞中表达。此外还发现表达在DCs表面的抑制型受体，如ILT3和ILT4(immunoglobulin-like transcript)，其胞内段含ITIM，胞外段是免疫球蛋白样结构，这两个分子在髓系细胞和单核细胞中也有表达，能向细胞内传递抑制性信号。本实验首先利用减数杂交技术从KLH刺激的DCs中克隆到一个具有C型lectin结构域的新分子，得到其全长序列后在公共基因数据库登录(序列号：AF067800)：分析显示该分子是一包含C型lectin结构域的Ⅱ型跨膜蛋白，胞内区段含有ITIM特征结构；染色体定位为12p13，同源分析最为相近的分子集群为ASGPRs，该分子被命名为lectin样的免疫受体(LLIR)。对于LLIR在组织细胞中表达所作的Northern、RT-PCR分析提示LLIR在正常组织中表达丰度很低，主要表达在DCs、前髓系细胞、B细胞、肝、脾。在RT-PCR分析过程中克隆到了LLIR的两个剪切变异体(variants)，分别命名为LLIRv1、LLIRv2。原核表达LLIRv2蛋白后制备、纯化了抗LLIRv2的多克隆抗血清。Western检测显示LLIR在体内是一糖基化蛋白，分子量约60 kD，以单体形式存在，主要表达在DCs、前髓系细胞、B细胞中；同时通过基因转染真核细胞瞬时表达、体外翻译LLIR和LLIRv2证实两个分子在体内的分子量几乎是一致的。此外，利用免疫共沉淀证实LLIR胞内段的ITIM具有结合SHP-1的潜在能力，提示LLIR很可能是一个新型抑制型受体。, http://www.100md.com