多发性硬化病中3种疱疹病毒DNA的检测
吴晓芝 张劲松 娄慧泉 尚红
关键词：多发性硬化症(MS) 疱疹病毒 PCR 多发性硬化症(MS)与病毒感染的关系颇受国内外学者重视。MS患者血中同时检测出Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)，EB病毒(EBV)、人类巨细胞病毒(HCMV)DNA，国内目前尚未见报道。我们采用PCR方法检测MS患者血中3种疱疹病毒DNA，以探讨MS的发病与病毒的关系。
材料与方法
病例与对照：患者19例，均经临床确诊为MS。男9例，女10例，年龄16～52岁。健康体检者30例为对照组，男15例，女15例，年龄17～55岁。
材料：PCR检测试剂盒，华美生物工程公司提供。扩增片段HSV-1 453bp，EBV 269bp，HCMV 300bp。碱基序列为：HSV-1：5′-CGACTTTGCCAGCCTGTACC 3′，5′-AGACCGTGTCCCCGTAGATG 3′；EBV：5′-GTCATCATCATCCGGGTCTC 3′，5′-TTCGGGTTGGAACCTCCTTG 3′；HCMV：5′-TTACCAAGAACTCAGCCTTC 3′，5′-GTGCGTGAGCACCTTGTCTC 3′。
, http://www.100md.com
仪器和方法：PCR扩增仪，美国PE公司2400型。紫外检测仪，MODELFS-312型。取PCR混合物26μl，聚合酶2μl，加模板DNA 4μl，于0.5ml，Eppendorf管中，石蜡油封闭反应体系，然后置PCR仪上，94℃预变性300?s，后进入94℃ 45?s、55℃ 45?s、72℃ 45?s，共35个循环，最后72℃保温5?min。取PCR反应产物10μl加溴酚蓝指示剂0.6ml，在含0.5μl/mg溴乙锭的2%琼脂糖凝胶上电泳20～30?min，紫外检测仪观察结果，每次均设置阴性和阳性对照。
结果和讨论
PCR检测MS患者HSV-1、EBV及HCMV DNA结果见表1。
表1 PCR检测MS患者血中3种疱疹病毒DNA的结果(%)
例数
, 百拇医药
HSV-1+
EBV+
HCMV+
n(%)
n(%)
n(%)
MS
19
12(63.2)
10(52.6)
7(36.8)
对照组
, http://www.100md.com
30
4(13.3)
2(6.7)
8(26.7)
P值
<0.05
<0.05
>0.05
MS的病因迄今不明，目前，国内外学者认为本病与病毒感染及免疫调节缺陷等因素有关〔1，2〕。Sanders〔1〕应用PCR检测MS患者尸脑组织中疱疹病毒，发现在活动性斑块里HSV-1阳性检出率占41%(9/22)，高于非活动性斑块的20%(6/30)。Haahr S〔2〕指出，原发性EBV感染可能是导致MS的重要因素之一。通过电镜证实，在MS患者的淋巴细胞中存在人类逆转录病毒和EBV。本实验HSV-1、EBV DNA在MS患者血清中阳性检出率分别为63.2%、52.6%(P<0.05)，而HMCV DNA检出率较低，占36.8%(P>0.05)。MS患者发病前是否感染过疱疹类病毒难以核实，但我国人群中在幼年时大都感染过疱疹病毒，多为隐性感染，尤其是Ⅰ型疱疹病毒感染后可长期携带此病毒，当健康状况不佳，或生活环境有较大的改变时可使潜伏的病毒激活，而引发重复感染，当人体免疫功能减弱时病毒易进入中枢神经系统，呈不同的症状，有可能诱发MS。疱疹病毒感染与MS患者之间的确切关系尚有待进一步研究。
, 百拇医药
作者单位：吴晓芝(中国医科大学第一临床学院检验科)
娄慧泉(中国医科大学第一临床学院检验科)
尚红(中国医科大学第一临床学院检验科)
张劲松(神经疾病研究室)
参考文献
1 Sanders VJ, Felisan S, Waddell A, et al. Detection of herpesviridae in postmortem. multiple sclerosis brain tissue and controls by polymerase chain reaction. J Neurovirol, 1996, 2(4):249-258.
2 Haahr s, Sommerlund M, Christensen T, et al. A putative new retrovirus associated with multiple sclerosis and the possible involvement of Epstein-Barr virus in this disease. Ann-N-Y-Acad-Sci, 1994, 6724:148-156., http://www.100md.com
关键词：多发性硬化症(MS) 疱疹病毒 PCR 多发性硬化症(MS)与病毒感染的关系颇受国内外学者重视。MS患者血中同时检测出Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)，EB病毒(EBV)、人类巨细胞病毒(HCMV)DNA，国内目前尚未见报道。我们采用PCR方法检测MS患者血中3种疱疹病毒DNA，以探讨MS的发病与病毒的关系。
材料与方法
病例与对照：患者19例，均经临床确诊为MS。男9例，女10例，年龄16～52岁。健康体检者30例为对照组，男15例，女15例，年龄17～55岁。
材料：PCR检测试剂盒，华美生物工程公司提供。扩增片段HSV-1 453bp，EBV 269bp，HCMV 300bp。碱基序列为：HSV-1：5′-CGACTTTGCCAGCCTGTACC 3′，5′-AGACCGTGTCCCCGTAGATG 3′；EBV：5′-GTCATCATCATCCGGGTCTC 3′，5′-TTCGGGTTGGAACCTCCTTG 3′；HCMV：5′-TTACCAAGAACTCAGCCTTC 3′，5′-GTGCGTGAGCACCTTGTCTC 3′。
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仪器和方法：PCR扩增仪，美国PE公司2400型。紫外检测仪，MODELFS-312型。取PCR混合物26μl，聚合酶2μl，加模板DNA 4μl，于0.5ml，Eppendorf管中，石蜡油封闭反应体系，然后置PCR仪上，94℃预变性300?s，后进入94℃ 45?s、55℃ 45?s、72℃ 45?s，共35个循环，最后72℃保温5?min。取PCR反应产物10μl加溴酚蓝指示剂0.6ml，在含0.5μl/mg溴乙锭的2%琼脂糖凝胶上电泳20～30?min，紫外检测仪观察结果，每次均设置阴性和阳性对照。
结果和讨论
PCR检测MS患者HSV-1、EBV及HCMV DNA结果见表1。
表1 PCR检测MS患者血中3种疱疹病毒DNA的结果(%)
例数
, 百拇医药
HSV-1+
EBV+
HCMV+
n(%)
n(%)
n(%)
MS
19
12(63.2)
10(52.6)
7(36.8)
对照组
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30
4(13.3)
2(6.7)
8(26.7)
P值
<0.05
<0.05
>0.05
MS的病因迄今不明，目前，国内外学者认为本病与病毒感染及免疫调节缺陷等因素有关〔1，2〕。Sanders〔1〕应用PCR检测MS患者尸脑组织中疱疹病毒，发现在活动性斑块里HSV-1阳性检出率占41%(9/22)，高于非活动性斑块的20%(6/30)。Haahr S〔2〕指出，原发性EBV感染可能是导致MS的重要因素之一。通过电镜证实，在MS患者的淋巴细胞中存在人类逆转录病毒和EBV。本实验HSV-1、EBV DNA在MS患者血清中阳性检出率分别为63.2%、52.6%(P<0.05)，而HMCV DNA检出率较低，占36.8%(P>0.05)。MS患者发病前是否感染过疱疹类病毒难以核实，但我国人群中在幼年时大都感染过疱疹病毒，多为隐性感染，尤其是Ⅰ型疱疹病毒感染后可长期携带此病毒，当健康状况不佳，或生活环境有较大的改变时可使潜伏的病毒激活，而引发重复感染，当人体免疫功能减弱时病毒易进入中枢神经系统，呈不同的症状，有可能诱发MS。疱疹病毒感染与MS患者之间的确切关系尚有待进一步研究。
, 百拇医药
作者单位：吴晓芝(中国医科大学第一临床学院检验科)
娄慧泉(中国医科大学第一临床学院检验科)
尚红(中国医科大学第一临床学院检验科)
张劲松(神经疾病研究室)
参考文献
1 Sanders VJ, Felisan S, Waddell A, et al. Detection of herpesviridae in postmortem. multiple sclerosis brain tissue and controls by polymerase chain reaction. J Neurovirol, 1996, 2(4):249-258.
2 Haahr s, Sommerlund M, Christensen T, et al. A putative new retrovirus associated with multiple sclerosis and the possible involvement of Epstein-Barr virus in this disease. Ann-N-Y-Acad-Sci, 1994, 6724:148-156., http://www.100md.com