人胚胎甲状腺褪黑素受体的鉴定及生物学特性
http://www.100md.com
中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第六届受体和信
作者：孙中安 陆祖谦 何金 刘会敏 赵瑛 刘志民 彭树勋
单位：孙中安 陆祖谦 何金 刘会敏 赵瑛 刘志民(第二军医大学长征医院内分泌科，上海 200003)；彭树勋(香港大学医学院生理系)
关键词：
中国病理生理杂志0010263
目的：应用免疫组化和核酸原位杂交技术检测人胚胎甲状腺的MEL受体及其亚型，为进一步研究MEL对甲状腺功能的调节作用提供证据。方法：1.研究对象：中期水囊引产人胎儿，取出甲状腺，立即用4%多聚甲醛+0.1%DEPC固定，石蜡包埋组织，4℃冰箱贮存待检测。2.MEL探针制备：在LB培养基中分别培养含有MEL1A或MEL1B受体质粒的大肠杆菌，离心，回收大肠杆菌。按照华舜公司质粒抽提纯化试剂盒说明抽提纯化质粒，质粒酶切，地高辛标记探针(宝灵曼公司)，测定标记效率，探针浓度均达到80 ng/μL。3.核酸分子原位杂交：原位杂交检测试剂盒、APES、Poly-L-Lysin(多聚赖氨酸)和专用盖玻片均购自武汉博士德生物工程公司。APES与Poly-L-Lysin联合应用处理载玻片。按原位杂交试剂盒的说明进行检测。实验设不加探针为阴性对照。4.免疫组织化学法：一抗为鼠抗人MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体，由香港大学生理系彭树勋教授馈赠。免疫组化试剂盒购自福建迈新公司。MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体的稀释浓度为1∶75，以缓冲液代替第一抗体作为阴性对照，下丘脑组织作为阳性对照。结果：1.甲状腺MEL1A和MEL1B受体蛋白的检测：甲状腺免疫组织化学染色结果显示，在人胚胎甲状腺的滤泡细胞的胞膜和胞核中均存在MEL1A和MEL1B受体蛋白，但以胞核为主。2.甲状腺MEL1A和MEL1B受体mRNA的检测：甲状腺核酸分子原位杂交结果显示，在人胚胎甲状腺滤泡细胞的胞浆和胞核中存在MEL1A和MEL1B受体mRNA的表达，但以胞核为主。结论：人胚胎甲状腺组织存在MEL1A和MEL1B受体蛋白，同时检测到相应的MEL1A和MEL1B受体mRNA的表达。证实人胚胎甲状腺组织存在MEL受体，提示甲状腺为MEL作用的靶器官，说明MEL通过位于甲状腺细胞的MEL受体发挥着对甲状腺功能的调节作用，但MEL对甲状腺功能的调节机制尚需进一步的研究阐明。, http://www.100md.com
单位：孙中安 陆祖谦 何金 刘会敏 赵瑛 刘志民(第二军医大学长征医院内分泌科，上海 200003)；彭树勋(香港大学医学院生理系)
关键词：
中国病理生理杂志0010263
目的：应用免疫组化和核酸原位杂交技术检测人胚胎甲状腺的MEL受体及其亚型，为进一步研究MEL对甲状腺功能的调节作用提供证据。方法：1.研究对象：中期水囊引产人胎儿，取出甲状腺，立即用4%多聚甲醛+0.1%DEPC固定，石蜡包埋组织，4℃冰箱贮存待检测。2.MEL探针制备：在LB培养基中分别培养含有MEL1A或MEL1B受体质粒的大肠杆菌，离心，回收大肠杆菌。按照华舜公司质粒抽提纯化试剂盒说明抽提纯化质粒，质粒酶切，地高辛标记探针(宝灵曼公司)，测定标记效率，探针浓度均达到80 ng/μL。3.核酸分子原位杂交：原位杂交检测试剂盒、APES、Poly-L-Lysin(多聚赖氨酸)和专用盖玻片均购自武汉博士德生物工程公司。APES与Poly-L-Lysin联合应用处理载玻片。按原位杂交试剂盒的说明进行检测。实验设不加探针为阴性对照。4.免疫组织化学法：一抗为鼠抗人MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体，由香港大学生理系彭树勋教授馈赠。免疫组化试剂盒购自福建迈新公司。MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体的稀释浓度为1∶75，以缓冲液代替第一抗体作为阴性对照，下丘脑组织作为阳性对照。结果：1.甲状腺MEL1A和MEL1B受体蛋白的检测：甲状腺免疫组织化学染色结果显示，在人胚胎甲状腺的滤泡细胞的胞膜和胞核中均存在MEL1A和MEL1B受体蛋白，但以胞核为主。2.甲状腺MEL1A和MEL1B受体mRNA的检测：甲状腺核酸分子原位杂交结果显示，在人胚胎甲状腺滤泡细胞的胞浆和胞核中存在MEL1A和MEL1B受体mRNA的表达，但以胞核为主。结论：人胚胎甲状腺组织存在MEL1A和MEL1B受体蛋白，同时检测到相应的MEL1A和MEL1B受体mRNA的表达。证实人胚胎甲状腺组织存在MEL受体，提示甲状腺为MEL作用的靶器官，说明MEL通过位于甲状腺细胞的MEL受体发挥着对甲状腺功能的调节作用，但MEL对甲状腺功能的调节机制尚需进一步的研究阐明。, http://www.100md.com