小鼠腹腔巨噬细胞内的游离钙离子浓度及PMA、fMLP反应性的不均一性
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第六届受体和信
作者：朱晓燕 韩建中 娄淑杰 严进 徐仁宝
单位：朱晓燕 徐仁宝(第二军医大学基础部 病理生理教研室)；韩建中 娄淑杰 严进(神经生物教研室， 上海 200433)
关键词：
中国病理生理杂志0010284
目的：巨噬细胞(M)的反应性是炎症过程中的重要问题。迄今为止绝大多数的工作是以细胞群作为研究对象。我们推测在细胞群中各个细胞的反应可能是不一样的，因此有必要在单细胞水平上对白细胞的反应性进行研究。本实验以细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)为指标，测定了静息状态下单个腹腔M内[Ca2+]i水平及其对PMA、fMLP的反应性。方法：用生理盐水灌洗昆明小鼠腹腔获得M，在铺有鼠尾胶的盖玻片上贴壁30～90 min后用2 μmol/L Fura-2/AM及0.04% F-127负载，利用荧光显微镜成像系统检测并用Grynkiewicz公式计算[Ca2+]i。在测得静息状态下的[Ca2+]i后，用1 μg/mL PMA或2 μmol/L fMLP刺激细胞；分别以10-4mol/L DMSO或10-4 mol/L冰醋酸作为阴性对照。此外，用340 nm及380 nm波长的紫外线照射，观察单纯紫外线照射对[Ca2+]i的影响；用未经负载的M在340 nm及380 nm波长下摄取图像并同样用PMA、fMLP刺激分析细胞内自发荧光对本实验的影响。结果：1. 检测了7个小鼠共392个细胞的结果显示：静息状态下小鼠腹腔M内[Ca2+]i平均为53.81±23.64 nmol/L，与文献报告的结果近似。但波动范围较大，从10～20 nmol/L(2.81%)到90～100 nmol/L(1.79%)，其中频率最大的是40～60 nmol/L(46.17%)。2.加入PMA、fMLP后，[Ca2+]i升高，升高幅度与其静息状态下[Ca2+]i之间呈正相关(P<0.01)。单纯紫外线照射(曝光时间300 ms，每次间隔3 s，持续15 min)亦可导致M内[Ca2+]i升高，但其升高幅度显著低于加入PMA、fMLP后的[Ca2+]i升高水平，且与其静息状态下[Ca2+]i之间无显著相关；加入PMA后，M的自发荧光亦有波动，其波动范围与静息状态下的自发荧光水平无显著相关，加入fMLP后，M的自发荧光没有显著变化，说明上述结果的可靠性。结论：静息状态下小鼠腹腔巨噬细胞内游离钙离子浓度水平是不均一的；巨噬细胞对PMA、fMLP的反应性与其静息状态下游离钙离子浓度在一定范围内成正相关，提示静息状态下[Ca2+]i的不均一性可能有重要的生理和病理意义。本实验的结果还说明了白细胞的单细胞水平的研究的重要性。
国家自然科学基金 (No. 39730210)资助, http://www.100md.com
单位：朱晓燕 徐仁宝(第二军医大学基础部 病理生理教研室)；韩建中 娄淑杰 严进(神经生物教研室， 上海 200433)
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目的：巨噬细胞(M)的反应性是炎症过程中的重要问题。迄今为止绝大多数的工作是以细胞群作为研究对象。我们推测在细胞群中各个细胞的反应可能是不一样的，因此有必要在单细胞水平上对白细胞的反应性进行研究。本实验以细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)为指标，测定了静息状态下单个腹腔M内[Ca2+]i水平及其对PMA、fMLP的反应性。方法：用生理盐水灌洗昆明小鼠腹腔获得M，在铺有鼠尾胶的盖玻片上贴壁30～90 min后用2 μmol/L Fura-2/AM及0.04% F-127负载，利用荧光显微镜成像系统检测并用Grynkiewicz公式计算[Ca2+]i。在测得静息状态下的[Ca2+]i后，用1 μg/mL PMA或2 μmol/L fMLP刺激细胞；分别以10-4mol/L DMSO或10-4 mol/L冰醋酸作为阴性对照。此外，用340 nm及380 nm波长的紫外线照射，观察单纯紫外线照射对[Ca2+]i的影响；用未经负载的M在340 nm及380 nm波长下摄取图像并同样用PMA、fMLP刺激分析细胞内自发荧光对本实验的影响。结果：1. 检测了7个小鼠共392个细胞的结果显示：静息状态下小鼠腹腔M内[Ca2+]i平均为53.81±23.64 nmol/L，与文献报告的结果近似。但波动范围较大，从10～20 nmol/L(2.81%)到90～100 nmol/L(1.79%)，其中频率最大的是40～60 nmol/L(46.17%)。2.加入PMA、fMLP后，[Ca2+]i升高，升高幅度与其静息状态下[Ca2+]i之间呈正相关(P<0.01)。单纯紫外线照射(曝光时间300 ms，每次间隔3 s，持续15 min)亦可导致M内[Ca2+]i升高，但其升高幅度显著低于加入PMA、fMLP后的[Ca2+]i升高水平，且与其静息状态下[Ca2+]i之间无显著相关；加入PMA后，M的自发荧光亦有波动，其波动范围与静息状态下的自发荧光水平无显著相关，加入fMLP后，M的自发荧光没有显著变化，说明上述结果的可靠性。结论：静息状态下小鼠腹腔巨噬细胞内游离钙离子浓度水平是不均一的；巨噬细胞对PMA、fMLP的反应性与其静息状态下游离钙离子浓度在一定范围内成正相关，提示静息状态下[Ca2+]i的不均一性可能有重要的生理和病理意义。本实验的结果还说明了白细胞的单细胞水平的研究的重要性。
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