甲状腺肿瘤组织中IL-8的表达及意义
甲状腺肿瘤组织中IL-8的表达及意义
张雅萍 姬秋和 张南雁 李玉松 王文勇
摘 要：目的 探讨IL-8在甲状腺肿瘤组织中的表达及意义. 方法 应用免疫组织化学方法，观察12例甲状腺腺瘤和16例甲状腺癌(其中8例甲状腺乳头状癌、4例甲状腺滤泡状癌、3例甲状腺髓样癌和1例甲状腺未分化癌)患者甲状腺组织中IL-8的表达及分布. 结果 甲状腺腺瘤和甲状腺癌患者甲状腺组织中IL-8表达阳性率分别为25%和81%(P<0.01). 甲状腺癌中IL-8免疫染色强度显著高于甲状腺腺瘤(P<0.01)；不同类型甲状腺癌组织中IL-8免疫染色强度也有显著性差异(P<0.01)，其中未分化癌染色强度较高，其次为滤泡状癌，乳头状癌和髓样癌染色强度较低. 甲状腺腺瘤组织中间质细胞IL-8免疫染色阳性，而甲状腺癌组织中间质细胞IL-8免疫染色阴性，血管内皮细胞染色阳性. 结论 IL-8在甲状腺腺瘤组织中表达较低，而在甲状腺癌组织中高表达，且甲状腺癌恶性程度越高表达越强，提示IL-8可能与甲状腺肿瘤的恶性增殖有关.
, 百拇医药
关键词：甲状腺腺瘤；甲状腺癌；IL-8；免疫组织化学
0 引言
IL-8是1987年发现的由人单核细胞所产生的一种中性粒细胞趋化因子[1]. 不同实验室根据其不同生物学活性有不同命名，如中性粒细胞激活蛋白-1(NAP-1)、单核细胞来源的中性粒细胞趋化因子(MDNCF)、中性粒细胞激活因子(NAF)、T淋巴细胞趋化因子(TCF)和内皮细胞来源的中性粒细胞激活肽(EDNAP)等. 为避免不同名称带来的混乱，1988年在伦敦国际学术会议上统一命名为NAP/IL-8 (中性粒细胞活性肽/白细胞介素-8). 随着研究的深入，发现IL-8除促炎症作用外，还对某些肿瘤具有直接的促生长作用[2]，也已证实甲状腺滤泡细胞能够分泌IL-8[3]. IL-8表达是否与甲状腺肿瘤有关，我们采用免疫组织化学方法就此进行了初步研究.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 来自我院1994/1999年手术的甲状腺组织标本，其中甲状腺腺瘤12(男3，女9)例，年龄28～60岁；甲状腺癌16(男2，女14)例，年龄21～63岁. 所有病例0.5 a内均未经过药物治疗. 甲状腺组织标本经100 mL.L-1福尔马林固定，常规石蜡包埋，制成5 μm厚的切片，贴于预先涂有5 g.L-1铬钒明胶的载玻片上，37℃烤箱24 h.
1.2 方法 ①采用生物素-抗生物素-过氧化物酶复合物(sABC)法，按免疫组化sABC试剂盒(博士德公司)说明书所示步骤进行免疫组织化学染色：甲状腺标本脱蜡至水，分别经3 mol.L-1尿素及10 mL.L-1 H2O2浸泡各30 min，然后滴加正常羊血清15 min，1∶200鼠抗人IL-8抗体4℃冰箱过夜；1∶100生物素化的二抗 37℃孵育50 min，再加1∶100的A,B混合液37℃孵育50 min，最后DAB显色. 以PBS替代一抗作阴性对照. 鼠抗人IL-8单克隆抗体由本校免疫学教研室提供. ②结果判定：在光学显微镜下对切片染色阳性情况进行半定量评估，观察全片，无免疫染色阳性的标本为-；免疫染色阳性细胞较少，且散在分布者为+；而免疫染色阳性细胞多，呈丛集分布者为++. 求出每组中+,++标本所占总例数的百分比为该组标本阳性率. 用LEICA Q500MC图像分析系统对染色强度进行定量分析. 每张切片随机抽取10个视野，选择合适的门限分割值，测定阳性细胞的平均灰度，计算其均值，再求出每组标本的灰度平均值，灰度值低，说明染色强度高. ③统计学处理：采用SAS6.12统计软件包对图像分析测得的灰度值进行F检验；对阳性率进行χ2检验. 相差显著性界限定为P<0.01.
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2 结果
IL-8免疫染色阳性物质呈棕黄色颗粒，存在于细胞质中. 甲状腺腺瘤组织中IL-8染色阳性率为25%，主要表达于间质细胞，甲状腺滤泡细胞阳性染色较少，分布也较弥散(Fig 1). 甲状腺癌组织中，IL-8样免疫阳性物质主要表达于甲状腺滤泡细胞和瘤细胞，丛集分布，阳性率(81%)及染色强度均显著高于甲状腺腺瘤(P<0.01，Tab 1)，间质中纤维细胞IL-8免疫染色阴性(Fig 2)，但血管内皮细胞IL-8免疫染色阳性. 不同类型甲状腺癌组织中IL-8免疫染色强度也有显著性差异(P<0.01)，其中未分化癌染色强度较高，其次为滤泡状癌，乳头状癌和髓样癌染色强度较低(Tab 1).
表 1 甲状腺肿瘤组织中甲状腺滤泡细胞IL-8的表达
Tab 1 Expression of IL-8 in thyrocytes from thyroid tumours tissues
, 百拇医药
Expressing
intensity
Positive
Grey level
Group
n
-
+
++
rate
±s
, 百拇医药
Thyroid adenoma
12
9
4
0
25%
199.66± 8.15
Thyroid carcinoma
16
3
4
9
81%a
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173.72±11.71a
Papillary carcinoma
8
188.70±13.78
Follicular carcinoma
4
168.72±25.54
Medullary carcinoma
3
198.23± 2.80
Undifferentiaed carcinoma
, 百拇医药
1
163.34±13.74
aP<0.01 vs thyroid adenoma.
图 1 甲状腺腺瘤组织中，IL-8样免疫阳性物质主要表达于间质细胞，而甲状腺滤泡细胞阳性染色较少
Fig 1 In thyroid tummors, IL-8 like immunoactivity was detected in the stromal cells whereas that was absent in the thyrocytes ×200
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图 2 甲状腺癌组织中，IL-8样免疫染色阳性甲状腺滤泡细胞和瘤细胞，丛集分布，间质细胞IL-8免疫染色阴性
Fig 2 In thyroid carcinomas, IL-8 like immunoraectivity was detected in the thyrocytes and cancer cells whereas that was absent in the stromal cells ×400
3 讨论
甲状腺肿瘤分为良性(甲状腺腺瘤)和恶性(甲状腺癌)两大类，甲状腺癌中未分化癌恶性程度很高，其次为滤泡状癌和髓样癌，乳头状癌恶性程度较低，其发病机制尚不十分明确. 20世纪80年代Melmed提出了内分泌肿瘤形成的“二期学说”(诱导期和促生长期)：诱导期是内分泌腺细胞有自发的或获得的变异，导致异常的细胞基因表达；此后激素、生长因子或突变基因的表达产物刺激肿瘤生长，进入促生长期. 随着肿瘤分子遗传学的进展，已有许多关于甲状腺肿瘤遗传基因异常的研究报道；近年来，Eggo等[4]发现在甲状腺癌的病因中生长因子可能也有作用，为此学说提供了证据.
, http://www.100md.com
目前已证实细胞因子与肿瘤的发生、发展有关，人类多种肿瘤细胞和细胞系均可高表达IL-8[5]；IL-8也是黑色素瘤[6]、神经胶质瘤[2]的自分泌生长因子；Fiore等[7]发现在甲状腺癌细胞系中存在IL-8 mRNA的高表达. 本实验结果显示在甲状腺良性肿瘤——甲状腺腺瘤组织中，甲状腺滤泡细胞IL-8阳性染色较少；而甲状腺癌组织中IL-8高表达，其中未分化癌染色强度较高，其次为滤泡状癌，乳头状癌和髓样癌染色强度较低，提示IL-8可能与甲状腺肿瘤恶性增殖有关，表达强度与甲状腺癌的恶性程度亦有关系，恶性程度越高表达越强. 有报道[8]，人重组IL-8对大鼠角膜和人脐静脉内皮细胞有强的促血管生成作用，关节炎组织巨噬细胞和LPS激活的单核细胞培养上清的促血管生成作用均能被抗IL-8抗体抑制，提示IL-8在依赖血管生成的疾病如肿瘤生长、伤口愈合和关节炎中起作用. 我们的实验结果也显示，甲状腺癌组织中间质细胞IL-8免疫染色阴性，但血管内皮细胞IL-8免疫染色阳性. 提示IL-8可能还通过其促血管增生作用，间接发挥促进甲状腺癌生长的作用，其作用机制尚待进一步研究证实. 综上所述，在甲状腺癌组织中IL-8发生变化，表达上调，可能通过自分泌和旁分泌机制参与肿瘤的发展和维持.
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作者简介：张雅萍(1963-)，女(汉族)，河南省巩县人. 主治医师，讲师，硕士. Tel.(029)3375217(O) Email.YPLB@163.net
张雅萍(第四军医大学：西京医院内分泌科，陕西 西安 710033)
姬秋和(第四军医大学：西京医院内分泌科，陕西 西安 710033)
张南雁(第四军医大学：西京医院内分泌科，陕西 西安 710033)
李玉松(第四军医大学：基础部病理学教研室，陕西 西安 710033)
王文勇(第四军医大学：基础部病理学教研室，陕西 西安 710033)
参考文献:
, http://www.100md.com [1] Yoshimura T, Matsushima K, Oppenheim JJ et al. Neutrophil chemotactic factor produced by lipopolysaccharide(LPS)-stimulated human blood mononuclear leukocytes: Partial characterization and separation from interleukin 1 (IL-1)[J]. J Immunol, 1987;139(3):788-793.
[2] Yamanaka R, Tanaka R, Yoshida S et al. Growth inhibition of human glioma cells modulated by retrovirus gene transfection with antisense IL-8[J]. J Neuronocol, 1995;25(1):59-65.
, 百拇医药
[3] Watson PF, Pickerill AP, Davies R et al. Semi-quantitative analysis of interleukin-1 alpha, interleukin-6 and interleukin-8 mRNA expression by human thyrocytes[J]. J Mol Endocrinol, 1995;15(1):11-21.
[4] Eggo MC, Hopkins JM, Franklyn JA et al. Expression of fibroblast growth factors in thyroid cancer[J]. J Clin Endocrinol Metab, 1995;80(3):1006-1011.
[5] Sakamoto K, Masuda T, Mita S et al. Interleukin-8 is constitutively and commonly produced by various human carcinoma cell lines[J]. Int J Clin Lab Res, 1992;22(4):216-219.
, http://www.100md.com
[6] Schadendorf D, Moller A, Algermissen B et al. IL-8 produced by human malignant melanoma cells in vitro is an essential autocrine growth factor[J]. J Immunol, 1994;153(7):3360-3367.
[7] Fiore L, Pollina LE, Fontanini G et al. Cytokine production by a new undifferentiated human thyroid carcinoma cell line, FB-1[J]. J Clin Endocrinol Metab，1997;82(12):4094-4100.
[8] Koch AE, Polverini PJ, Kunkel SL et al. Interleukin-8 as a macrophage-derived mediator of angiogenesis[J]. Science, 1992;258(5089):1798-1801., 百拇医药
张雅萍 姬秋和 张南雁 李玉松 王文勇
摘 要：目的 探讨IL-8在甲状腺肿瘤组织中的表达及意义. 方法 应用免疫组织化学方法，观察12例甲状腺腺瘤和16例甲状腺癌(其中8例甲状腺乳头状癌、4例甲状腺滤泡状癌、3例甲状腺髓样癌和1例甲状腺未分化癌)患者甲状腺组织中IL-8的表达及分布. 结果 甲状腺腺瘤和甲状腺癌患者甲状腺组织中IL-8表达阳性率分别为25%和81%(P<0.01). 甲状腺癌中IL-8免疫染色强度显著高于甲状腺腺瘤(P<0.01)；不同类型甲状腺癌组织中IL-8免疫染色强度也有显著性差异(P<0.01)，其中未分化癌染色强度较高，其次为滤泡状癌，乳头状癌和髓样癌染色强度较低. 甲状腺腺瘤组织中间质细胞IL-8免疫染色阳性，而甲状腺癌组织中间质细胞IL-8免疫染色阴性，血管内皮细胞染色阳性. 结论 IL-8在甲状腺腺瘤组织中表达较低，而在甲状腺癌组织中高表达，且甲状腺癌恶性程度越高表达越强，提示IL-8可能与甲状腺肿瘤的恶性增殖有关.
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关键词：甲状腺腺瘤；甲状腺癌；IL-8；免疫组织化学
0 引言
IL-8是1987年发现的由人单核细胞所产生的一种中性粒细胞趋化因子[1]. 不同实验室根据其不同生物学活性有不同命名，如中性粒细胞激活蛋白-1(NAP-1)、单核细胞来源的中性粒细胞趋化因子(MDNCF)、中性粒细胞激活因子(NAF)、T淋巴细胞趋化因子(TCF)和内皮细胞来源的中性粒细胞激活肽(EDNAP)等. 为避免不同名称带来的混乱，1988年在伦敦国际学术会议上统一命名为NAP/IL-8 (中性粒细胞活性肽/白细胞介素-8). 随着研究的深入，发现IL-8除促炎症作用外，还对某些肿瘤具有直接的促生长作用[2]，也已证实甲状腺滤泡细胞能够分泌IL-8[3]. IL-8表达是否与甲状腺肿瘤有关，我们采用免疫组织化学方法就此进行了初步研究.
1 材料和方法
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1.1 材料 来自我院1994/1999年手术的甲状腺组织标本，其中甲状腺腺瘤12(男3，女9)例，年龄28～60岁；甲状腺癌16(男2，女14)例，年龄21～63岁. 所有病例0.5 a内均未经过药物治疗. 甲状腺组织标本经100 mL.L-1福尔马林固定，常规石蜡包埋，制成5 μm厚的切片，贴于预先涂有5 g.L-1铬钒明胶的载玻片上，37℃烤箱24 h.
1.2 方法 ①采用生物素-抗生物素-过氧化物酶复合物(sABC)法，按免疫组化sABC试剂盒(博士德公司)说明书所示步骤进行免疫组织化学染色：甲状腺标本脱蜡至水，分别经3 mol.L-1尿素及10 mL.L-1 H2O2浸泡各30 min，然后滴加正常羊血清15 min，1∶200鼠抗人IL-8抗体4℃冰箱过夜；1∶100生物素化的二抗 37℃孵育50 min，再加1∶100的A,B混合液37℃孵育50 min，最后DAB显色. 以PBS替代一抗作阴性对照. 鼠抗人IL-8单克隆抗体由本校免疫学教研室提供. ②结果判定：在光学显微镜下对切片染色阳性情况进行半定量评估，观察全片，无免疫染色阳性的标本为-；免疫染色阳性细胞较少，且散在分布者为+；而免疫染色阳性细胞多，呈丛集分布者为++. 求出每组中+,++标本所占总例数的百分比为该组标本阳性率. 用LEICA Q500MC图像分析系统对染色强度进行定量分析. 每张切片随机抽取10个视野，选择合适的门限分割值，测定阳性细胞的平均灰度，计算其均值，再求出每组标本的灰度平均值，灰度值低，说明染色强度高. ③统计学处理：采用SAS6.12统计软件包对图像分析测得的灰度值进行F检验；对阳性率进行χ2检验. 相差显著性界限定为P<0.01.
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2 结果
IL-8免疫染色阳性物质呈棕黄色颗粒，存在于细胞质中. 甲状腺腺瘤组织中IL-8染色阳性率为25%，主要表达于间质细胞，甲状腺滤泡细胞阳性染色较少，分布也较弥散(Fig 1). 甲状腺癌组织中，IL-8样免疫阳性物质主要表达于甲状腺滤泡细胞和瘤细胞，丛集分布，阳性率(81%)及染色强度均显著高于甲状腺腺瘤(P<0.01，Tab 1)，间质中纤维细胞IL-8免疫染色阴性(Fig 2)，但血管内皮细胞IL-8免疫染色阳性. 不同类型甲状腺癌组织中IL-8免疫染色强度也有显著性差异(P<0.01)，其中未分化癌染色强度较高，其次为滤泡状癌，乳头状癌和髓样癌染色强度较低(Tab 1).
表 1 甲状腺肿瘤组织中甲状腺滤泡细胞IL-8的表达
Tab 1 Expression of IL-8 in thyrocytes from thyroid tumours tissues
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Expressing
intensity
Positive
Grey level
Group
n
-
+
++
rate
±s, 百拇医药
Thyroid adenoma
12
9
4
0
25%
199.66± 8.15
Thyroid carcinoma
16
3
4
9
81%a
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173.72±11.71a
Papillary carcinoma
8
188.70±13.78
Follicular carcinoma
4
168.72±25.54
Medullary carcinoma
3
198.23± 2.80
Undifferentiaed carcinoma
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1
163.34±13.74
aP<0.01 vs thyroid adenoma.
图 1 甲状腺腺瘤组织中，IL-8样免疫阳性物质主要表达于间质细胞，而甲状腺滤泡细胞阳性染色较少
Fig 1 In thyroid tummors, IL-8 like immunoactivity was detected in the stromal cells whereas that was absent in the thyrocytes ×200
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图 2 甲状腺癌组织中，IL-8样免疫染色阳性甲状腺滤泡细胞和瘤细胞，丛集分布，间质细胞IL-8免疫染色阴性
Fig 2 In thyroid carcinomas, IL-8 like immunoraectivity was detected in the thyrocytes and cancer cells whereas that was absent in the stromal cells ×400
3 讨论
甲状腺肿瘤分为良性(甲状腺腺瘤)和恶性(甲状腺癌)两大类，甲状腺癌中未分化癌恶性程度很高，其次为滤泡状癌和髓样癌，乳头状癌恶性程度较低，其发病机制尚不十分明确. 20世纪80年代Melmed提出了内分泌肿瘤形成的“二期学说”(诱导期和促生长期)：诱导期是内分泌腺细胞有自发的或获得的变异，导致异常的细胞基因表达；此后激素、生长因子或突变基因的表达产物刺激肿瘤生长，进入促生长期. 随着肿瘤分子遗传学的进展，已有许多关于甲状腺肿瘤遗传基因异常的研究报道；近年来，Eggo等[4]发现在甲状腺癌的病因中生长因子可能也有作用，为此学说提供了证据.
, http://www.100md.com
目前已证实细胞因子与肿瘤的发生、发展有关，人类多种肿瘤细胞和细胞系均可高表达IL-8[5]；IL-8也是黑色素瘤[6]、神经胶质瘤[2]的自分泌生长因子；Fiore等[7]发现在甲状腺癌细胞系中存在IL-8 mRNA的高表达. 本实验结果显示在甲状腺良性肿瘤——甲状腺腺瘤组织中，甲状腺滤泡细胞IL-8阳性染色较少；而甲状腺癌组织中IL-8高表达，其中未分化癌染色强度较高，其次为滤泡状癌，乳头状癌和髓样癌染色强度较低，提示IL-8可能与甲状腺肿瘤恶性增殖有关，表达强度与甲状腺癌的恶性程度亦有关系，恶性程度越高表达越强. 有报道[8]，人重组IL-8对大鼠角膜和人脐静脉内皮细胞有强的促血管生成作用，关节炎组织巨噬细胞和LPS激活的单核细胞培养上清的促血管生成作用均能被抗IL-8抗体抑制，提示IL-8在依赖血管生成的疾病如肿瘤生长、伤口愈合和关节炎中起作用. 我们的实验结果也显示，甲状腺癌组织中间质细胞IL-8免疫染色阴性，但血管内皮细胞IL-8免疫染色阳性. 提示IL-8可能还通过其促血管增生作用，间接发挥促进甲状腺癌生长的作用，其作用机制尚待进一步研究证实. 综上所述，在甲状腺癌组织中IL-8发生变化，表达上调，可能通过自分泌和旁分泌机制参与肿瘤的发展和维持.
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作者简介：张雅萍(1963-)，女(汉族)，河南省巩县人. 主治医师，讲师，硕士. Tel.(029)3375217(O) Email.YPLB@163.net
张雅萍(第四军医大学：西京医院内分泌科，陕西 西安 710033)
姬秋和(第四军医大学：西京医院内分泌科，陕西 西安 710033)
张南雁(第四军医大学：西京医院内分泌科，陕西 西安 710033)
李玉松(第四军医大学：基础部病理学教研室，陕西 西安 710033)
王文勇(第四军医大学：基础部病理学教研室，陕西 西安 710033)
参考文献:
, http://www.100md.com [1] Yoshimura T, Matsushima K, Oppenheim JJ et al. Neutrophil chemotactic factor produced by lipopolysaccharide(LPS)-stimulated human blood mononuclear leukocytes: Partial characterization and separation from interleukin 1 (IL-1)[J]. J Immunol, 1987;139(3):788-793.
[2] Yamanaka R, Tanaka R, Yoshida S et al. Growth inhibition of human glioma cells modulated by retrovirus gene transfection with antisense IL-8[J]. J Neuronocol, 1995;25(1):59-65.
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[3] Watson PF, Pickerill AP, Davies R et al. Semi-quantitative analysis of interleukin-1 alpha, interleukin-6 and interleukin-8 mRNA expression by human thyrocytes[J]. J Mol Endocrinol, 1995;15(1):11-21.
[4] Eggo MC, Hopkins JM, Franklyn JA et al. Expression of fibroblast growth factors in thyroid cancer[J]. J Clin Endocrinol Metab, 1995;80(3):1006-1011.
[5] Sakamoto K, Masuda T, Mita S et al. Interleukin-8 is constitutively and commonly produced by various human carcinoma cell lines[J]. Int J Clin Lab Res, 1992;22(4):216-219.
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[6] Schadendorf D, Moller A, Algermissen B et al. IL-8 produced by human malignant melanoma cells in vitro is an essential autocrine growth factor[J]. J Immunol, 1994;153(7):3360-3367.
[7] Fiore L, Pollina LE, Fontanini G et al. Cytokine production by a new undifferentiated human thyroid carcinoma cell line, FB-1[J]. J Clin Endocrinol Metab，1997;82(12):4094-4100.
[8] Koch AE, Polverini PJ, Kunkel SL et al. Interleukin-8 as a macrophage-derived mediator of angiogenesis[J]. Science, 1992;258(5089):1798-1801., 百拇医药