FAS， NF-κB及Caspases在TNFα介导的微血管内皮细胞凋亡中的作用
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第六届受体和信
作者：曹翔 金惠铭
单位：上海医科大学病理生理学教研室，上海 200032
关键词：
中国病理生理杂志0010283
目的：研究肿瘤坏死因子α(TNF)引起微血管内皮细胞凋亡的特点及FAS，NF-κB和Caspases在此种凋亡中的作用。方法：用TUNEL，流式细胞仪等方法测定TNF引起体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(内皮细胞)凋亡。用免疫组化方法测定TNF引起内皮细胞NF-κB的活化，研究其活化对TNF引起的内皮细胞凋亡的影响。用Northern blot\, FAS抗体测定TNF对内皮细胞FAS表达的影响及FAS在内皮细胞凋亡中的作用。用Western blot\,免疫组化测定TNF作用后凋亡蛋白酶Caspase-8,Caspase-3的活化与表达。结果：细胞生长曲线显示TNF抑制内皮细胞增殖，并呈剂量依赖关系。5×103 U/mL TNF与内皮细胞共同孵育24 h后，细胞数量显著减少。TUNEL法测凋亡百分率为14.0%±3.1%，流式细胞仪测凋亡百分率为13.1%。NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐(APDC)与TNF共同作用于细胞后，存活细胞数显著减少，TUNEL阳性率升高。Northern blot\,免疫组化发现TNF作用后内皮细胞的FAS表达增高，用FAS抗体与TNF共同作用，细胞凋亡增加。Western blot显示TNF作用后Caspase-8活化显著增加。免疫组化提示TNF作用后Caspase-3表达增多。Caspase-3抑制剂与TNF共同作用，细胞凋亡减少，TUNEL阳性率为6.3%±2.5%。结论：1、大剂量TNF(5×103 U/mL)能够引起一定量的体外培养的内皮细胞发生凋亡(14.0%±3.1%)。2、NF-κB对内皮细胞凋亡有保护作用。3、TNF引起内皮细胞FAS表达增多，后者参与内皮细胞凋亡。4、TNF引起内皮细胞中Caspase-8活化，Caspase-3表达增多，Caspase-3抑制剂能减少TNF所致的内皮细胞凋亡。因此TNF所引起的内皮细胞凋亡与Caspase-8及Caspase-3的作用有关。, 百拇医药
单位：上海医科大学病理生理学教研室，上海 200032
关键词：
中国病理生理杂志0010283
目的：研究肿瘤坏死因子α(TNF)引起微血管内皮细胞凋亡的特点及FAS，NF-κB和Caspases在此种凋亡中的作用。方法：用TUNEL，流式细胞仪等方法测定TNF引起体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(内皮细胞)凋亡。用免疫组化方法测定TNF引起内皮细胞NF-κB的活化，研究其活化对TNF引起的内皮细胞凋亡的影响。用Northern blot\, FAS抗体测定TNF对内皮细胞FAS表达的影响及FAS在内皮细胞凋亡中的作用。用Western blot\,免疫组化测定TNF作用后凋亡蛋白酶Caspase-8,Caspase-3的活化与表达。结果：细胞生长曲线显示TNF抑制内皮细胞增殖，并呈剂量依赖关系。5×103 U/mL TNF与内皮细胞共同孵育24 h后，细胞数量显著减少。TUNEL法测凋亡百分率为14.0%±3.1%，流式细胞仪测凋亡百分率为13.1%。NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐(APDC)与TNF共同作用于细胞后，存活细胞数显著减少，TUNEL阳性率升高。Northern blot\,免疫组化发现TNF作用后内皮细胞的FAS表达增高，用FAS抗体与TNF共同作用，细胞凋亡增加。Western blot显示TNF作用后Caspase-8活化显著增加。免疫组化提示TNF作用后Caspase-3表达增多。Caspase-3抑制剂与TNF共同作用，细胞凋亡减少，TUNEL阳性率为6.3%±2.5%。结论：1、大剂量TNF(5×103 U/mL)能够引起一定量的体外培养的内皮细胞发生凋亡(14.0%±3.1%)。2、NF-κB对内皮细胞凋亡有保护作用。3、TNF引起内皮细胞FAS表达增多，后者参与内皮细胞凋亡。4、TNF引起内皮细胞中Caspase-8活化，Caspase-3表达增多，Caspase-3抑制剂能减少TNF所致的内皮细胞凋亡。因此TNF所引起的内皮细胞凋亡与Caspase-8及Caspase-3的作用有关。, 百拇医药