生物指示剂的实验评价
生物指示剂的实验评价
何曙云 邵珍红 刘宇英 陈金莲 温冬梅
摘 要： 目的 比较3 培养快速阅读生物指示剂与48 h培养生物指示剂的检测结果。方法 两种指示剂及留点温度计置于测试包中，在134℃脉动真空灭菌器中分别作0.5 min、1 min、2 min、3 min、4 min的灭菌后观察，培养结果。结果 两种培养方法的芽胞阳性率基本一致，3 h培养生物指示剂结果显示出有芽胞被灭活，但酶仍存活的现象；3个测试点以上层中相对难灭菌。 结论 两种指示剂的结果是一致的，快速培养仪能及早通过荧光发现3 h培养指示剂的酶存活，大大缩短了培养时间。
关键词：生物指示剂；生物检测；嗜热脂肪杆菌芽胞；脉动真空灭菌器；控制感染
, 百拇医药
生物检测法是压力蒸气灭菌效能测定的直接而可靠的方法及指标，2～7 d才得出结果，为此，我院选用3 h(B组)培养快速阅读生物指示剂的培养方法检测灭菌效果。为了了解快速培养生物指示剂培养结果的准确性，我们将快速培养与48 h(A组)培养的结果作对比观察，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 指示剂及分组 将A、B两组，每组包括3M生物指示剂各2支及留点温度计1支共同置于每个测试包的中间位置。A组为3M Attest 1262自含式生物指示剂，培养条件为56℃ 48 h的培养锅培养；B组为3M Attest 1292生物指示剂，培养条件为60℃ 3 h的快速阅读生物检测仪；然后将3个同样的测试包分别置于灭菌器柜内的上层中间(A1，B1)、下层后(A2，B2)、下层前(A3，B3)的位置，在真空度-0.086 MPa/cm2、蒸汽压力0.2 MPa/cm2、温度134℃的条件下分别作用0.5、1、2、3、4 min灭菌。
, 百拇医药
1.2 检测 将指示剂取出，按规定条件观察培养结果。A组肉眼观察指示剂变黄色为阳性，B组以检测仪阅读判别阳性结果，此时阅读结果虽为阳性，但肉眼观察指示剂仍未变黄色，如果经更长时间培养指示剂变黄，表明芽胞及细菌酶全部存活；如仍不变为黄色，表明芽胞已灭活，但酶仍存活。
2 结 果
2.1 指示剂 测试包中的留点温度计每次均显示温度为134±0.5℃。所有作对照的未经灭菌的指示剂芽胞及酶均为阳性。
2.2 灭菌效果 灭菌4 min A，B组共36支全部为阴性反应；灭菌0.5 min A，B组均为阳性反应。
2.3 阳性率 两组检测结果见表1。表1显示灭菌时间越短，阳性率越高。
表1 A，B组检测阳性(支)
, http://www.100md.com
灭菌时间
(min)
A组
B组
-
+
-
+
4.0
18
0
18
0
3.0
, 百拇医药
17
1
13
5
2.0
17
1
12
6
1.0
3
15
1
17
, 百拇医药
0.5
0
18
0
18
2.4 不同部位的测试包 两组阳性率如表2。表2 A，B两组不同位置培养阳性(支)
组 别
上层中
下层后
下层前
A组
14
10
, http://www.100md.com
11
B组
17
15
14
2.5 试剂开始变黄色时间 在观察培养结果过程中，发现试剂开始肉眼变黄色的时间A组为8 h左右、B组为6 h左右。
3 讨 论
3.1 4 min灭菌A组、B组指示剂的芽胞及酶均阴性，从而证实了细菌芽胞在132～134℃下的热死亡时间为3～4 min[1]的有关理论。
3.2 在实际工作中，灭菌后的检测应尽快得出结果，以便能够及时将灭菌物品用于临床。过去的常规培养检测方法需要7 d才有结果。虽然3M普通生物指示剂的检测可缩短至48 h，但是，比起快速仪的3 h出结果，仍然有相当的时间差距。由于快速仪的时间短，其检测的可靠性自然受到质疑。本实验结果表明，快速仪检测单纯芽胞阳性率40%与培养锅38.9%是几乎相同的，指示剂的存活时间与灭活时间完全是一致的，分别为30 s和4 min，因此，在实际工作中完全可以使用快速仪代替培养锅以缩短得出培养结果的时间，提高实际工作效率。
, 百拇医药
3.3 快速仪的检测原理是它能及早识别芽胞生长初始阶段时，某种酶被激活后使非荧光基质转换为荧光物质，通过识别荧光物质来确定阳性结果。如灭菌彻底，芽胞及酶皆被灭活，试剂不会变色；如灭菌不彻底，芽胞及酶都有活性，指示菌进入营养适宜的条件下，经过迟缓期后即进入对数生长期[2]，试剂变为黄色。但是因为酶的热抗力比芽胞强，所以B组在1～3 min的各时段中，有芽胞被灭活，酶仍有活性的状况，这状况亦视为灭菌失败。从表1可以看出，快速仪检测酶活性的变化是培养锅不能检测的。本实验的B组指示剂中，芽胞阴性而酶阳性占21.7%，这一指标能较好的反映灭菌的交界阶段不达标的灭菌过程，也显示了因为快速仪能检测细菌酶的活性，故有比培养锅更加敏感的特性。另外，培养温度愈高芽胞复苏生长所需时间愈短，所以B组快速仪指示剂肉眼变黄时间比培养锅短。
3.4 灭菌器柜内测试包及生物指示剂放置点不同，可能产生不同的灭菌效果，从表2可看出，上层中的位置高于下层后及下层前(接近排气口)，估计灭菌的最难点是在上层中。但本实验未能在实验数据上加以证实，还需要更进一步的观察。
, 百拇医药
何曙云(中山医科大学肿瘤医院， 广东 广州 510060)
邵珍红(中山医科大学肿瘤医院， 广东 广州 510060)
刘宇英(中山医科大学肿瘤医院， 广东 广州 510060)
陈金莲(中山医科大学肿瘤医院， 广东 广州 510060)
温冬梅(中山医科大学肿瘤医院， 广东 广州 510060)
参考文献
1，钟秀玲，程棣妍. 现代医院感染护理学[M]. 北京：人民军医出版社, 1995. 231.
2，杨浏，柴辉，刘细梅. 利用生物发光技术进行高压灭菌效果的快速检测[J]. 中华医院感染学杂志, 1996，6(4)：230.
3，姚楚水, 袁庆霞, 李荣芬, 等. 热损伤嗜热脂肪杆菌芽胞恢复培养基的研究[J]. 中国消毒学杂志, 1997, 4(1): 17., http://www.100md.com
何曙云 邵珍红 刘宇英 陈金莲 温冬梅
摘 要： 目的 比较3 培养快速阅读生物指示剂与48 h培养生物指示剂的检测结果。方法 两种指示剂及留点温度计置于测试包中，在134℃脉动真空灭菌器中分别作0.5 min、1 min、2 min、3 min、4 min的灭菌后观察，培养结果。结果 两种培养方法的芽胞阳性率基本一致，3 h培养生物指示剂结果显示出有芽胞被灭活，但酶仍存活的现象；3个测试点以上层中相对难灭菌。 结论 两种指示剂的结果是一致的，快速培养仪能及早通过荧光发现3 h培养指示剂的酶存活，大大缩短了培养时间。
关键词：生物指示剂；生物检测；嗜热脂肪杆菌芽胞；脉动真空灭菌器；控制感染
, 百拇医药
生物检测法是压力蒸气灭菌效能测定的直接而可靠的方法及指标，2～7 d才得出结果，为此，我院选用3 h(B组)培养快速阅读生物指示剂的培养方法检测灭菌效果。为了了解快速培养生物指示剂培养结果的准确性，我们将快速培养与48 h(A组)培养的结果作对比观察，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 指示剂及分组 将A、B两组，每组包括3M生物指示剂各2支及留点温度计1支共同置于每个测试包的中间位置。A组为3M Attest 1262自含式生物指示剂，培养条件为56℃ 48 h的培养锅培养；B组为3M Attest 1292生物指示剂，培养条件为60℃ 3 h的快速阅读生物检测仪；然后将3个同样的测试包分别置于灭菌器柜内的上层中间(A1，B1)、下层后(A2，B2)、下层前(A3，B3)的位置，在真空度-0.086 MPa/cm2、蒸汽压力0.2 MPa/cm2、温度134℃的条件下分别作用0.5、1、2、3、4 min灭菌。
, 百拇医药
1.2 检测 将指示剂取出，按规定条件观察培养结果。A组肉眼观察指示剂变黄色为阳性，B组以检测仪阅读判别阳性结果，此时阅读结果虽为阳性，但肉眼观察指示剂仍未变黄色，如果经更长时间培养指示剂变黄，表明芽胞及细菌酶全部存活；如仍不变为黄色，表明芽胞已灭活，但酶仍存活。
2 结 果
2.1 指示剂 测试包中的留点温度计每次均显示温度为134±0.5℃。所有作对照的未经灭菌的指示剂芽胞及酶均为阳性。
2.2 灭菌效果 灭菌4 min A，B组共36支全部为阴性反应；灭菌0.5 min A，B组均为阳性反应。
2.3 阳性率 两组检测结果见表1。表1显示灭菌时间越短，阳性率越高。
表1 A，B组检测阳性(支)
, http://www.100md.com
灭菌时间
(min)
A组
B组
-
+
-
+
4.0
18
0
18
0
3.0
, 百拇医药
17
1
13
5
2.0
17
1
12
6
1.0
3
15
1
17
, 百拇医药
0.5
0
18
0
18
2.4 不同部位的测试包 两组阳性率如表2。表2 A，B两组不同位置培养阳性(支)
组 别
上层中
下层后
下层前
A组
14
10
, http://www.100md.com
11
B组
17
15
14
2.5 试剂开始变黄色时间 在观察培养结果过程中，发现试剂开始肉眼变黄色的时间A组为8 h左右、B组为6 h左右。
3 讨 论
3.1 4 min灭菌A组、B组指示剂的芽胞及酶均阴性，从而证实了细菌芽胞在132～134℃下的热死亡时间为3～4 min[1]的有关理论。
3.2 在实际工作中，灭菌后的检测应尽快得出结果，以便能够及时将灭菌物品用于临床。过去的常规培养检测方法需要7 d才有结果。虽然3M普通生物指示剂的检测可缩短至48 h，但是，比起快速仪的3 h出结果，仍然有相当的时间差距。由于快速仪的时间短，其检测的可靠性自然受到质疑。本实验结果表明，快速仪检测单纯芽胞阳性率40%与培养锅38.9%是几乎相同的，指示剂的存活时间与灭活时间完全是一致的，分别为30 s和4 min，因此，在实际工作中完全可以使用快速仪代替培养锅以缩短得出培养结果的时间，提高实际工作效率。
, 百拇医药
3.3 快速仪的检测原理是它能及早识别芽胞生长初始阶段时，某种酶被激活后使非荧光基质转换为荧光物质，通过识别荧光物质来确定阳性结果。如灭菌彻底，芽胞及酶皆被灭活，试剂不会变色；如灭菌不彻底，芽胞及酶都有活性，指示菌进入营养适宜的条件下，经过迟缓期后即进入对数生长期[2]，试剂变为黄色。但是因为酶的热抗力比芽胞强，所以B组在1～3 min的各时段中，有芽胞被灭活，酶仍有活性的状况，这状况亦视为灭菌失败。从表1可以看出，快速仪检测酶活性的变化是培养锅不能检测的。本实验的B组指示剂中，芽胞阴性而酶阳性占21.7%，这一指标能较好的反映灭菌的交界阶段不达标的灭菌过程，也显示了因为快速仪能检测细菌酶的活性，故有比培养锅更加敏感的特性。另外，培养温度愈高芽胞复苏生长所需时间愈短，所以B组快速仪指示剂肉眼变黄时间比培养锅短。
3.4 灭菌器柜内测试包及生物指示剂放置点不同，可能产生不同的灭菌效果，从表2可看出，上层中的位置高于下层后及下层前(接近排气口)，估计灭菌的最难点是在上层中。但本实验未能在实验数据上加以证实，还需要更进一步的观察。
, 百拇医药
何曙云(中山医科大学肿瘤医院， 广东 广州 510060)
邵珍红(中山医科大学肿瘤医院， 广东 广州 510060)
刘宇英(中山医科大学肿瘤医院， 广东 广州 510060)
陈金莲(中山医科大学肿瘤医院， 广东 广州 510060)
温冬梅(中山医科大学肿瘤医院， 广东 广州 510060)
参考文献
1，钟秀玲，程棣妍. 现代医院感染护理学[M]. 北京：人民军医出版社, 1995. 231.
2，杨浏，柴辉，刘细梅. 利用生物发光技术进行高压灭菌效果的快速检测[J]. 中华医院感染学杂志, 1996，6(4)：230.
3，姚楚水, 袁庆霞, 李荣芬, 等. 热损伤嗜热脂肪杆菌芽胞恢复培养基的研究[J]. 中国消毒学杂志, 1997, 4(1): 17., http://www.100md.com