发疹型药疹皮损内浸润淋巴细胞类型和亚类的检测
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中华皮肤科杂志 2000年第33卷第5期
发疹型药疹皮损内浸润淋巴细胞类型和亚类的检测
段昕所 陆洁 张春雷 李世荫
关键词：药疹；淋巴细胞
发疹型药疹的皮损组织病理表现为真皮浅层、中层血管扩张充血,周围有淋巴细胞浸润,为了进一步探讨本病皮损浸润淋巴细胞中以那些细胞类型及亚类为主，我们对本病患者皮损进行了淋巴细胞类型及亚类的免疫组化研究。
一、病例选择
发疹型药疹患者34例,男14例,女20例；年龄(35.55±11.59)岁。为本院门诊及住院患者，临床确诊为发疹型药疹。原发病为阑尾炎、感冒、肺炎或咽峡炎，其致敏药物为氨苄西林、青霉素、头孢菌素、利福平、卡马西平及感冒清等药物，诊断依据文献[1],特异性淋巴细胞转化试验阳性、皮内试验阳性或激发试验阳性。本文中，34例患者有14例特异性淋巴细胞转化试验阳性[2]，19例是皮损消退2周后皮内试验阳性(6～24h皮试部位有斑丘疹发生,同时设生理盐水阴性对照)，有1例皮损消退4周后再次口服感冒清后激发试验阳性。同时，除外感染性发疹性疾病，用环钻在局麻下取患者腹部、背部或四肢红色斑丘疹皮损,一分为二,一份用中性甲醛固定,石蜡包埋切片,另一份OCT包埋,立即液氮冷冻,恒冷切片机切片。对照8例,男2例,女6例；年龄(35.65±13.20)岁,为我院外科手术患者,皮肤无任何发疹,在手术过程中取其正常皮肤,与发疹型药疹患者皮损处理相同。
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二、试剂及方法
CD20单克隆抗体,CD45RO、OPD4单克隆抗体，该3种抗体1∶100稀释；CD8单克隆抗体(邦定生物工程公司，1∶100稀释),免疫组化试剂盒(Histostain-SP-kit)为Zymed公司产品。每一病例切片均常规HE染色。免疫组化采用LSAB法,AEC显色；苏木素复染，甘油明胶封片。石蜡组织切片做B淋巴细胞(CD20)、T淋巴细胞(CD45RO)、Th细胞(OPD4)染色。冰冻组织切片做CD8染色。
对每张组织切片，采用单盲法，任取有细胞浸润的5个高倍视野，进行染色阳性细胞和单一核细胞计数，计算染色阳性细胞占单一核细胞的百分比。并且统计各类阳性细胞在不同组织中的计数。
三、结果
HE染色：在34例发疹型药疹患者皮损中均表现为真皮浅层毛细血管扩张充血,血管周围有淋巴细胞及少量嗜酸粒细胞浸润。而正常对照组织无该炎症反应。
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浸润淋巴细胞类型：用免疫组化LSAB法对34例患者皮损石蜡切片中浸润淋巴细胞进行CD20、CD45RO、CD4+单染及冰冻组织片CD8+单染,同时CD20与CD45RO在石蜡切片上进行了单酶双染，T细胞DAB显色(呈棕黄色),B细胞4-氯-1萘酚显色(呈蓝色)。结果T淋巴细胞占多数，其中以CD4+T细胞浸润为主，并且在表皮的基底层也见有少许CD4+细胞浸润。CD8+T细胞较少。同时也发现有B淋巴细胞浸润，以靠近血管周围分布较多。对各例患者各类型或亚类淋巴细胞所占百分比按计量资料进行统计，结果，T淋巴细胞为(55.77±5.35)%，CD4T淋巴细胞为(44.86±5.96)%，CD8T淋巴细胞为(10.65±3.12)%，B淋巴细胞为(42.67±9.53)%。
另外，各类及亚类淋巴细胞在皮损的不同部位其浸润程度也不同。患者皮损表皮中有少许CD4细胞浸润，少数患者皮损表皮有CD8细胞浸润，无B淋巴细胞浸润。大部分患者真皮浅层有较多的CD4细胞和少许CD8细胞浸润，血管周围B淋巴细胞较多。少部分病例皮下组织中也见有少许各类淋巴细胞浸润。
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四、讨论
通过对34例发疹型药疹患者皮损组织的免疫组化研究发现，浸润的淋巴细胞以T淋巴细胞为主。在浸润的T淋巴细胞中，CD4+T淋巴细胞为最多，CD8+T淋巴细胞较少，在皮损组织中CD4+/CD8+约为(3～4)/1。Carr等[3]报道的HIV感染者所发生的发疹型药疹，其皮损组织中浸润的淋巴细胞是以CD8+T淋巴细胞为主，与我们的研究结果不同，这可能与HIV的感染密切相关，因为在他研究的患者中，外周血中CD4+/CD8+比值倒置，大约0.9∶1，所以，其组织中以CD8+细胞浸润为主。
作者单位：段昕所(067000河北省承德医学院附属医院皮肤科)
陆洁(067000河北省承德医学院附属医院皮肤科)
, 百拇医药
张春雷(北京大学第三医院皮肤科)
李世荫(北京大学第三医院皮肤科)
参考文献
[1]阎伯龄,段昕所.药疹与发疹性疾病的鉴别诊断.第1版.北京：北京出版社,1991.5-6.
[2]段昕所，陆洁，王晶,等.特异性淋巴细胞转化试验对发疹型药疹诊断价值的观察.中华皮肤科杂志,1996，29:269-270.
[3] Carr RR， Vasak E ， Munro C， et al. Immunohistological assessment of cutaneous drug hypersensitivity in patients with HIV infection. Clin Exp Immunol， 1994， 97:260- 265., 百拇医药
段昕所 陆洁 张春雷 李世荫
关键词：药疹；淋巴细胞
发疹型药疹的皮损组织病理表现为真皮浅层、中层血管扩张充血,周围有淋巴细胞浸润,为了进一步探讨本病皮损浸润淋巴细胞中以那些细胞类型及亚类为主，我们对本病患者皮损进行了淋巴细胞类型及亚类的免疫组化研究。
一、病例选择
发疹型药疹患者34例,男14例,女20例；年龄(35.55±11.59)岁。为本院门诊及住院患者，临床确诊为发疹型药疹。原发病为阑尾炎、感冒、肺炎或咽峡炎，其致敏药物为氨苄西林、青霉素、头孢菌素、利福平、卡马西平及感冒清等药物，诊断依据文献[1],特异性淋巴细胞转化试验阳性、皮内试验阳性或激发试验阳性。本文中，34例患者有14例特异性淋巴细胞转化试验阳性[2]，19例是皮损消退2周后皮内试验阳性(6～24h皮试部位有斑丘疹发生,同时设生理盐水阴性对照)，有1例皮损消退4周后再次口服感冒清后激发试验阳性。同时，除外感染性发疹性疾病，用环钻在局麻下取患者腹部、背部或四肢红色斑丘疹皮损,一分为二,一份用中性甲醛固定,石蜡包埋切片,另一份OCT包埋,立即液氮冷冻,恒冷切片机切片。对照8例,男2例,女6例；年龄(35.65±13.20)岁,为我院外科手术患者,皮肤无任何发疹,在手术过程中取其正常皮肤,与发疹型药疹患者皮损处理相同。
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二、试剂及方法
CD20单克隆抗体,CD45RO、OPD4单克隆抗体，该3种抗体1∶100稀释；CD8单克隆抗体(邦定生物工程公司，1∶100稀释),免疫组化试剂盒(Histostain-SP-kit)为Zymed公司产品。每一病例切片均常规HE染色。免疫组化采用LSAB法,AEC显色；苏木素复染，甘油明胶封片。石蜡组织切片做B淋巴细胞(CD20)、T淋巴细胞(CD45RO)、Th细胞(OPD4)染色。冰冻组织切片做CD8染色。
对每张组织切片，采用单盲法，任取有细胞浸润的5个高倍视野，进行染色阳性细胞和单一核细胞计数，计算染色阳性细胞占单一核细胞的百分比。并且统计各类阳性细胞在不同组织中的计数。
三、结果
HE染色：在34例发疹型药疹患者皮损中均表现为真皮浅层毛细血管扩张充血,血管周围有淋巴细胞及少量嗜酸粒细胞浸润。而正常对照组织无该炎症反应。
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浸润淋巴细胞类型：用免疫组化LSAB法对34例患者皮损石蜡切片中浸润淋巴细胞进行CD20、CD45RO、CD4+单染及冰冻组织片CD8+单染,同时CD20与CD45RO在石蜡切片上进行了单酶双染，T细胞DAB显色(呈棕黄色),B细胞4-氯-1萘酚显色(呈蓝色)。结果T淋巴细胞占多数，其中以CD4+T细胞浸润为主，并且在表皮的基底层也见有少许CD4+细胞浸润。CD8+T细胞较少。同时也发现有B淋巴细胞浸润，以靠近血管周围分布较多。对各例患者各类型或亚类淋巴细胞所占百分比按计量资料进行统计，结果，T淋巴细胞为(55.77±5.35)%，CD4T淋巴细胞为(44.86±5.96)%，CD8T淋巴细胞为(10.65±3.12)%，B淋巴细胞为(42.67±9.53)%。
另外，各类及亚类淋巴细胞在皮损的不同部位其浸润程度也不同。患者皮损表皮中有少许CD4细胞浸润，少数患者皮损表皮有CD8细胞浸润，无B淋巴细胞浸润。大部分患者真皮浅层有较多的CD4细胞和少许CD8细胞浸润，血管周围B淋巴细胞较多。少部分病例皮下组织中也见有少许各类淋巴细胞浸润。
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四、讨论
通过对34例发疹型药疹患者皮损组织的免疫组化研究发现，浸润的淋巴细胞以T淋巴细胞为主。在浸润的T淋巴细胞中，CD4+T淋巴细胞为最多，CD8+T淋巴细胞较少，在皮损组织中CD4+/CD8+约为(3～4)/1。Carr等[3]报道的HIV感染者所发生的发疹型药疹，其皮损组织中浸润的淋巴细胞是以CD8+T淋巴细胞为主，与我们的研究结果不同，这可能与HIV的感染密切相关，因为在他研究的患者中，外周血中CD4+/CD8+比值倒置，大约0.9∶1，所以，其组织中以CD8+细胞浸润为主。
作者单位：段昕所(067000河北省承德医学院附属医院皮肤科)
陆洁(067000河北省承德医学院附属医院皮肤科)
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张春雷(北京大学第三医院皮肤科)
李世荫(北京大学第三医院皮肤科)
参考文献
[1]阎伯龄,段昕所.药疹与发疹性疾病的鉴别诊断.第1版.北京：北京出版社,1991.5-6.
[2]段昕所，陆洁，王晶,等.特异性淋巴细胞转化试验对发疹型药疹诊断价值的观察.中华皮肤科杂志,1996，29:269-270.
[3] Carr RR， Vasak E ， Munro C， et al. Immunohistological assessment of cutaneous drug hypersensitivity in patients with HIV infection. Clin Exp Immunol， 1994， 97:260- 265., 百拇医药