孕妇静脉血及其新生儿脐血硒水平及谷胱甘肽过氧化物酶活性与妊娠肝内胆汁淤积症的关系
孕妇静脉血及其新生儿脐血硒水平及谷胱甘肽过氧化物酶活性与妊娠肝内胆汁淤积症的关系
王竹晨 刘淑芸
摘 要 目的 探讨孕妇静脉血及其新生儿脐血硒水平及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)的关系。 方法 采用催化极谱法及5,5＇-二硫代双(二硝基苯甲酸)直接法检测健康未孕妇女30例(健康未孕组)血硒水平及GSH-Px活性；检测ICP孕妇(ICP组)和正常妊娠妇女(正常妊娠组)各30例孕晚期及产后母血、脐血硒水平及母血、脐血GSH-Px活性。 结果 (1)ICP组产前、后母血硒水平分别为(0.038 9±0.009 0)mg/L和(0.046 3±0.009 2)mg/L，GSH-Px活性分别为(59.31±11.42)活力单位(U)和(68.12±11.46) U，正常妊娠组产前、后母血硒水平分别为(0.047 7±0.009 4)mg/L和(0.051 0±0.009 3)mg/L，GSH-Px活性分别为(68.48±10.47) U和(72.67±9.83) U，两组比较，差异均有显著性(P<0.005)。(2)ICP组脐血硒水平为(0.038 7±0.009 3)mg/L，GSH-Px活性为(57.66±12.25) U，正常妊娠组脐血硒水平为(0.046 1±0.008 9)mg/L, GSH-Px活性为(67.46±11.93) U，两组比较，差异均有极显著性(P<0.005)。(3)血硒水平与GSH-Px活性呈正相关(P<0.001)。 结论 ICP患者血硒水平降低，导致GSH-Px活性下降，自由基形成，破坏了肝细胞膜，可能与ICP的发生有关。
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关键词：胆汁郁积,肝内；妊娠；硒；谷胱甘肽过氧化酶
妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy, ICP)的病因不明。临床及实验研究表明,ICP发病与雌激素关系密切，但临床、流行病学及实验研究表明,ICP的发生也有环境诱因的作用[1-3]。为探讨体内硒水平变化与ICP发病的关系，我们对微量元素硒及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与妊娠肝内胆汁淤积症的相关性进行了研究，现报道如下。
资料与方法
一、研究对象
选择1998年10月～1999年2月，华西医科大学附属第二医院妇产科门诊及住院者中ICP患者30例(ICP组)，正常妊娠妇女30例(正常妊娠组)及健康未孕妇女30例(健康未孕组)。ICP组：年龄20～40岁，ICP诊断标准参照文献[1]。正常妊娠组： 年龄、分娩次数与ICP组差异无显著性，孕周与ICP组相差在±7d内，妊娠前身体健康、无妊娠并发症和(或)合并症。健康未孕组：年龄、分娩次数与正常妊娠组差异无显著性，身体健康，无急、慢性疾病。
, 百拇医药
二、方法
1.全血样本的制备：健康未孕组妇女晨起抽空腹静脉血2 ml;ICP组和正常妊娠组妇女产前及产后第3～5天晨起各抽空腹静脉血2 ml；胎儿娩出后即刻抽脐静脉血2 ml。抽血后立即将血样各1 ml分别放入有肝素抗凝的干燥小瓶内(置-20℃冰箱备测全血GSH-Px)及清洁干燥的小烧杯内(置-20℃冰箱备测全血硒)。
2.硒水平及GSH-Px活性测定：采用催化极谱法成批测定全血硒水平，仪器为JP-2型示波极谱仪；全血GSH-Px活性测定采用5,5＇-二硫代双(二硝基苯甲酸)直接法，仪器为岛津UV-2201紫外分光光度计。
三、统计学处理
两组间计量资料比较用配对t检验。不同时期全血硒水平和GSH-Px活性的相关性及母血与脐血硒含量的相关性分析用直线相关分析法。
, 百拇医药
结果
一、 母血及脐血硒水平
ICP组母血及脐血硒水平均低于正常妊娠组，差异有显著性，见表1。正常妊娠组(r=0.975 5)及ICP组(r=0.957 2)母血与脐血硒水平均呈正相关(P<0.001)。
二、母血及脐血GSH-Px活性
ICP组母血、脐血GSH-Px活性在孕晚期及产后均明显低于正常妊娠组，见表2。
三、血硒水平与GSH-Px活性的相关性
母血硒水平与其GSH-Px活性在非孕期(r=0.576 7)、孕晚期(r=0.526 2)及产后(r=0.555 6)均呈正相关(P<0.001)。脐血硒水平也与其GSH-Px 的活性呈正相关(r=0.529 4,P<0.001)。正常妊娠组母血硒水平及GSH-Px活性均明显低于健康未孕组(P<0.05)，产后硒水平及GSH-Px 活性在ICP组及正常妊娠组均较孕晚期有明显升高(P<0.05)。
, 百拇医药
表1 各组妇女不同时期静脉血及其新生儿
脐血硒水平的变化(mg/L，X±s)
组别
例数
母血
脐血
ICP组
孕晚期
30
0.038 9±0.009 0*
产后
, 百拇医药
30
0.046 3±0.009 2**
0.038 7±0.009 3***
正常妊娠组
孕晚期
30
0.047 7±0.009 4
产后
30
, 百拇医药
0.051 0±0.009 3
0.046 1±0.008 9
健康未孕组
30
0.054 9±0.010 1
注：与正常妊娠组比较，*P<0.002 **P<0.05 ***P<0.005表2 各组妇女不同时期静脉血及其新生儿脐血
GSH-Px活性的变化(U，X±s)
组别
例数
母血
, 百拇医药
脐血
ICP组
孕晚期
30
59.31±11.42*
57.66±12.25***
产后
30
68.12±11.46**
正常妊娠组
, 百拇医药
孕晚期
30
68.48±10.47
67.46±11.93
产后
30
72.67± 9.83
健康未孕组
30
76.59±12.67
注：与正常妊娠组比较，*P<0.002 **P<0.005 ***P<0.05讨论
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一、正常妊娠时母血硒水平和GSH-Px活性
关于妊娠期硒水平及GSH-Px活性的报道较多。在“低硒区”及“硒中间区”的研究表明，妊娠妇女血浆(或全血)硒水平及GSH-Px活性在妊娠2～4个月时开始下降，在分娩前达到最低，产后开始上升[1，2]。而在“富硒区”虽观察到妊娠期妇女血硒水平有下降趋势，但无显著性变化。这可能与"富硒区"硒摄入量较高，可以代偿性地满足妊娠的需要有关。正常妊娠时,体内的这种低硒状态可能与下列因素有关：(1)妊娠时体内硒重新分布,由于妊娠时的特殊生理变化，某些组织需要大量的硒，如胎盘硒的水平明显高于母血，并随妊娠的进展，其对硒的需要量逐渐增加[4]。(2)胎儿的生长发育需要向母体摄取硒，特别是在妊娠晚期需要量和积聚量更多，以满足其胎儿期和新生儿期生物代谢的需要[5]。本研究结果表明，脐血硒水平与分娩时的母体血硒水平几乎相同，并呈高度正相关，与文献报道一致。血硒水平与GSH-Px活性的相关性仅在机体血硒水平低于100 μg/L时才可观察到。因为当血硒高于100 μg/L时，机体内硒与血浆及红细胞GSH-Px的结合达到饱和，GSH-Px活性与机体硒水平就不再有浓度依赖性相关关系。本研究结果血硒水平低于100 μg/L，并观察到血硒与GSH-Px活性呈正相关，与文献报道相符[1]。
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二、硒水平及GSH-Px活性的改变与ICP发病的关系
本研究结果表明，ICP组母血硒水平及GSH-Px活性明显低于正常妊娠者，并随产后病情好转低硒状态逐渐改善，与Kauppila等[1]和Ribalta等[2]的报道相似。ICP发病与雌激素关系密切，雌激素可使某些孕妇肝细胞对胆汁摄入、合成及分泌发生障碍而致肝内胆汁淤积,但其机理尚不清楚。有研究表明,肝细胞成分和结构不正常是胆汁淤积的主要原因。ICP患者肝细胞膜的液态流动性降低及膜上Na+-K+-ATP酶功能障碍[6,7]类似于自由基损伤引起的病变[8]。正常妊娠时的抗氧化作用能预防雌激素的氧化损伤，降低类固醇氢化物及其他过氧化物的浓度。而在ICP患者，因其体内低硒水平导致GSH-Px活性降低，抗氧化防御能力降低，加之雌激素负荷增加，从而可能导致自由基的形成，破坏了肝细胞膜并降低胆汁的排泄[9]。低硒与ICP的因果关系尚不十分清楚，ICP时体内这种低硒状态可能与硒代谢增加，饮食硒摄入不足及吸收障碍有关[1]。
, 百拇医药
因此，ICP的发生可能是多因素共同作用的结果。在常染色体显性遗传或不能排除的X-连锁遗传决定肝脏对雌激素的反应异常或应答敏感性过强的基础上(遗传因素决定ICP的易感性)，环境诱因(如饮食硒摄入量不足)可诱发ICP的发生并决定其严重程度[10]。临床上可否通过补硒来提高孕妇机体抗氧化防御能力，以预防和改善ICP的症状，尚待研究。
王竹晨(中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科)
刘淑芸(610041 成都，华西医科大学附属第二医院妇产科)
参考文献
1，Kauppila A, Korpela H, Makila UM. Low serum selenium concentration and glutathione peroxidase activity in intrahepatic cholestasis of pregnancy. BMJ, 1987, 294: 150-152.
, 百拇医药
2，Ribalta J, Reyes H, Hernandez I, et al. Can a deficiency of selenium influence the pathogenesis of cholestasis of pregnancy Gastroenterol Hepatol, 1995, 18: 114-120.
3，Hernandez I, Reyes H,Ruz M, et al. Effect of a selenium-deficient diet on bile formation, in the rat. Gastroenterology, 1996, 110: 1210.
4，Korpela H, Loneniva R, Yrjanheikki E, et al. Selenium concentration in maternal and unbilical cord blood, placenta and amniotic mernbranes. Int J Vitam Nutr Res, 1984,54:257-261.
, 百拇医药
5，Kasik JW, Rice EJ. Selenoprotein P expression in liver, uterus and placenta during late pregnancy. Placenta, 1995,16: 67-74.
6，Reyes H, Simon FR. Intrahepatic cholestasis of pregnancy: an estrogen-related disease. Semin Liver Dis, 1993, 13: 289-301.
7，Vore M. Estrogen cholestasis. Membranes, metabolites, or receptors Gastroenterology, 1987,93:643-649.
8，Stater TF. Free-radical mechanisms in tissue Injury. Biochem J, 1984,222:1-15.
9，Akerboom TPM, Bilzer M, Sies H. Relation between glutathione- redox changes and biliary excretion of taurocholate in perfused rat liver. J Biol Chem, 1984,259:5838-5843.
10，Reyes H. Review: intrahepatic cholestasis: a puzzling disorder of pregnancy. J Gastroenterol Hepatol, 1997, 12: 211-216., http://www.100md.com
王竹晨 刘淑芸
摘 要 目的 探讨孕妇静脉血及其新生儿脐血硒水平及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)的关系。 方法 采用催化极谱法及5,5＇-二硫代双(二硝基苯甲酸)直接法检测健康未孕妇女30例(健康未孕组)血硒水平及GSH-Px活性；检测ICP孕妇(ICP组)和正常妊娠妇女(正常妊娠组)各30例孕晚期及产后母血、脐血硒水平及母血、脐血GSH-Px活性。 结果 (1)ICP组产前、后母血硒水平分别为(0.038 9±0.009 0)mg/L和(0.046 3±0.009 2)mg/L，GSH-Px活性分别为(59.31±11.42)活力单位(U)和(68.12±11.46) U，正常妊娠组产前、后母血硒水平分别为(0.047 7±0.009 4)mg/L和(0.051 0±0.009 3)mg/L，GSH-Px活性分别为(68.48±10.47) U和(72.67±9.83) U，两组比较，差异均有显著性(P<0.005)。(2)ICP组脐血硒水平为(0.038 7±0.009 3)mg/L，GSH-Px活性为(57.66±12.25) U，正常妊娠组脐血硒水平为(0.046 1±0.008 9)mg/L, GSH-Px活性为(67.46±11.93) U，两组比较，差异均有极显著性(P<0.005)。(3)血硒水平与GSH-Px活性呈正相关(P<0.001)。 结论 ICP患者血硒水平降低，导致GSH-Px活性下降，自由基形成，破坏了肝细胞膜，可能与ICP的发生有关。
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关键词：胆汁郁积,肝内；妊娠；硒；谷胱甘肽过氧化酶
妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy, ICP)的病因不明。临床及实验研究表明,ICP发病与雌激素关系密切，但临床、流行病学及实验研究表明,ICP的发生也有环境诱因的作用[1-3]。为探讨体内硒水平变化与ICP发病的关系，我们对微量元素硒及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与妊娠肝内胆汁淤积症的相关性进行了研究，现报道如下。
资料与方法
一、研究对象
选择1998年10月～1999年2月，华西医科大学附属第二医院妇产科门诊及住院者中ICP患者30例(ICP组)，正常妊娠妇女30例(正常妊娠组)及健康未孕妇女30例(健康未孕组)。ICP组：年龄20～40岁，ICP诊断标准参照文献[1]。正常妊娠组： 年龄、分娩次数与ICP组差异无显著性，孕周与ICP组相差在±7d内，妊娠前身体健康、无妊娠并发症和(或)合并症。健康未孕组：年龄、分娩次数与正常妊娠组差异无显著性，身体健康，无急、慢性疾病。
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二、方法
1.全血样本的制备：健康未孕组妇女晨起抽空腹静脉血2 ml;ICP组和正常妊娠组妇女产前及产后第3～5天晨起各抽空腹静脉血2 ml；胎儿娩出后即刻抽脐静脉血2 ml。抽血后立即将血样各1 ml分别放入有肝素抗凝的干燥小瓶内(置-20℃冰箱备测全血GSH-Px)及清洁干燥的小烧杯内(置-20℃冰箱备测全血硒)。
2.硒水平及GSH-Px活性测定：采用催化极谱法成批测定全血硒水平，仪器为JP-2型示波极谱仪；全血GSH-Px活性测定采用5,5＇-二硫代双(二硝基苯甲酸)直接法，仪器为岛津UV-2201紫外分光光度计。
三、统计学处理
两组间计量资料比较用配对t检验。不同时期全血硒水平和GSH-Px活性的相关性及母血与脐血硒含量的相关性分析用直线相关分析法。
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结果
一、 母血及脐血硒水平
ICP组母血及脐血硒水平均低于正常妊娠组，差异有显著性，见表1。正常妊娠组(r=0.975 5)及ICP组(r=0.957 2)母血与脐血硒水平均呈正相关(P<0.001)。
二、母血及脐血GSH-Px活性
ICP组母血、脐血GSH-Px活性在孕晚期及产后均明显低于正常妊娠组，见表2。
三、血硒水平与GSH-Px活性的相关性
母血硒水平与其GSH-Px活性在非孕期(r=0.576 7)、孕晚期(r=0.526 2)及产后(r=0.555 6)均呈正相关(P<0.001)。脐血硒水平也与其GSH-Px 的活性呈正相关(r=0.529 4,P<0.001)。正常妊娠组母血硒水平及GSH-Px活性均明显低于健康未孕组(P<0.05)，产后硒水平及GSH-Px 活性在ICP组及正常妊娠组均较孕晚期有明显升高(P<0.05)。
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表1 各组妇女不同时期静脉血及其新生儿
脐血硒水平的变化(mg/L，X±s)
组别
例数
母血
脐血
ICP组
孕晚期
30
0.038 9±0.009 0*
产后
, 百拇医药
30
0.046 3±0.009 2**
0.038 7±0.009 3***
正常妊娠组
孕晚期
30
0.047 7±0.009 4
产后
30
, 百拇医药
0.051 0±0.009 3
0.046 1±0.008 9
健康未孕组
30
0.054 9±0.010 1
注：与正常妊娠组比较，*P<0.002 **P<0.05 ***P<0.005表2 各组妇女不同时期静脉血及其新生儿脐血
GSH-Px活性的变化(U，X±s)
组别
例数
母血
, 百拇医药
脐血
ICP组
孕晚期
30
59.31±11.42*
57.66±12.25***
产后
30
68.12±11.46**
正常妊娠组
, 百拇医药
孕晚期
30
68.48±10.47
67.46±11.93
产后
30
72.67± 9.83
健康未孕组
30
76.59±12.67
注：与正常妊娠组比较，*P<0.002 **P<0.005 ***P<0.05讨论
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一、正常妊娠时母血硒水平和GSH-Px活性
关于妊娠期硒水平及GSH-Px活性的报道较多。在“低硒区”及“硒中间区”的研究表明，妊娠妇女血浆(或全血)硒水平及GSH-Px活性在妊娠2～4个月时开始下降，在分娩前达到最低，产后开始上升[1，2]。而在“富硒区”虽观察到妊娠期妇女血硒水平有下降趋势，但无显著性变化。这可能与"富硒区"硒摄入量较高，可以代偿性地满足妊娠的需要有关。正常妊娠时,体内的这种低硒状态可能与下列因素有关：(1)妊娠时体内硒重新分布,由于妊娠时的特殊生理变化，某些组织需要大量的硒，如胎盘硒的水平明显高于母血，并随妊娠的进展，其对硒的需要量逐渐增加[4]。(2)胎儿的生长发育需要向母体摄取硒，特别是在妊娠晚期需要量和积聚量更多，以满足其胎儿期和新生儿期生物代谢的需要[5]。本研究结果表明，脐血硒水平与分娩时的母体血硒水平几乎相同，并呈高度正相关，与文献报道一致。血硒水平与GSH-Px活性的相关性仅在机体血硒水平低于100 μg/L时才可观察到。因为当血硒高于100 μg/L时，机体内硒与血浆及红细胞GSH-Px的结合达到饱和，GSH-Px活性与机体硒水平就不再有浓度依赖性相关关系。本研究结果血硒水平低于100 μg/L，并观察到血硒与GSH-Px活性呈正相关，与文献报道相符[1]。
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二、硒水平及GSH-Px活性的改变与ICP发病的关系
本研究结果表明，ICP组母血硒水平及GSH-Px活性明显低于正常妊娠者，并随产后病情好转低硒状态逐渐改善，与Kauppila等[1]和Ribalta等[2]的报道相似。ICP发病与雌激素关系密切，雌激素可使某些孕妇肝细胞对胆汁摄入、合成及分泌发生障碍而致肝内胆汁淤积,但其机理尚不清楚。有研究表明,肝细胞成分和结构不正常是胆汁淤积的主要原因。ICP患者肝细胞膜的液态流动性降低及膜上Na+-K+-ATP酶功能障碍[6,7]类似于自由基损伤引起的病变[8]。正常妊娠时的抗氧化作用能预防雌激素的氧化损伤，降低类固醇氢化物及其他过氧化物的浓度。而在ICP患者，因其体内低硒水平导致GSH-Px活性降低，抗氧化防御能力降低，加之雌激素负荷增加，从而可能导致自由基的形成，破坏了肝细胞膜并降低胆汁的排泄[9]。低硒与ICP的因果关系尚不十分清楚，ICP时体内这种低硒状态可能与硒代谢增加，饮食硒摄入不足及吸收障碍有关[1]。
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因此，ICP的发生可能是多因素共同作用的结果。在常染色体显性遗传或不能排除的X-连锁遗传决定肝脏对雌激素的反应异常或应答敏感性过强的基础上(遗传因素决定ICP的易感性)，环境诱因(如饮食硒摄入量不足)可诱发ICP的发生并决定其严重程度[10]。临床上可否通过补硒来提高孕妇机体抗氧化防御能力，以预防和改善ICP的症状，尚待研究。
王竹晨(中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科)
刘淑芸(610041 成都，华西医科大学附属第二医院妇产科)
参考文献
1，Kauppila A, Korpela H, Makila UM. Low serum selenium concentration and glutathione peroxidase activity in intrahepatic cholestasis of pregnancy. BMJ, 1987, 294: 150-152.
, 百拇医药
2，Ribalta J, Reyes H, Hernandez I, et al. Can a deficiency of selenium influence the pathogenesis of cholestasis of pregnancy Gastroenterol Hepatol, 1995, 18: 114-120.
3，Hernandez I, Reyes H,Ruz M, et al. Effect of a selenium-deficient diet on bile formation, in the rat. Gastroenterology, 1996, 110: 1210.
4，Korpela H, Loneniva R, Yrjanheikki E, et al. Selenium concentration in maternal and unbilical cord blood, placenta and amniotic mernbranes. Int J Vitam Nutr Res, 1984,54:257-261.
, 百拇医药
5，Kasik JW, Rice EJ. Selenoprotein P expression in liver, uterus and placenta during late pregnancy. Placenta, 1995,16: 67-74.
6，Reyes H, Simon FR. Intrahepatic cholestasis of pregnancy: an estrogen-related disease. Semin Liver Dis, 1993, 13: 289-301.
7，Vore M. Estrogen cholestasis. Membranes, metabolites, or receptors Gastroenterology, 1987,93:643-649.
8，Stater TF. Free-radical mechanisms in tissue Injury. Biochem J, 1984,222:1-15.
9，Akerboom TPM, Bilzer M, Sies H. Relation between glutathione- redox changes and biliary excretion of taurocholate in perfused rat liver. J Biol Chem, 1984,259:5838-5843.
10，Reyes H. Review: intrahepatic cholestasis: a puzzling disorder of pregnancy. J Gastroenterol Hepatol, 1997, 12: 211-216., http://www.100md.com