泌尿生殖道嗜血杆菌的感染及临床意义
泌尿生殖道嗜血杆菌的感染及临床意义
王伟平 张仙森 陈丽英 吕火祥 刘建栋
摘 要 目的 了解嗜血杆菌在泌尿生殖道感染患者泌尿生殖道分泌物标本中的分离率及其生物型与临床意义。方法 选用嗜血杆菌专用培养基(HAE)和API NH鉴定系统对5 022份泌尿生殖道感染标本进行分离培养与鉴定。结果 分离出嗜血杆菌198株(3.9%)，其中副流感嗜血杆菌139株、流感嗜血杆菌54株、嗜沫/副嗜沫嗜血杆菌5株。进一步生化分型研究结果提示：Ⅱ型副流感嗜血杆菌分离率最高(29.3%)，其次为Ⅲ型副流感嗜血杆菌(24.8%)与Ⅳ型流感嗜血杆菌(19.2%)。嗜血杆菌阳性检出率在感染标本中以男性尿道分泌物为最高(39.9%)。结论 嗜血杆菌是引起泌尿生殖道感染的病原菌之一，其分离率以副流感嗜血杆菌为主，对其型别的检测有利于对菌株的流行病学调查；我国临床与实验室人员应加强对嗜血杆菌引起泌尿生殖道感染的重视。
, http://www.100md.com
关键词：泌尿生殖系统疾病；嗜血杆菌属；细菌分型技术
嗜血杆菌广泛地寄居于人类上呼吸道，常引起呼吸道的急性感染，如急性鼻咽炎、喉炎、急性支气管炎、肺炎、脑脓肿等[1-3]，已研究证明偶尔也可引起泌尿生殖道炎症。近几年已有些国外文献报道在尿液、生殖道分泌物等感染标本中检出嗜血杆菌，尽管阳性率不高，却有着重要的临床意义[4-6]，而国内文献很少有这方面的报道。为了了解我国泌尿生殖道感染嗜血杆菌的分离率及相应临床意义，我们对来自我院的5 022份泌尿生殖道的标本做了检测，并对这组资料进行统计，结果分析如下。
材料与方法
一、材料
1.标本来源：采集本院门诊与住院泌尿道感染患者的泌尿生殖道分泌物标本5 022份，其中男性尿道分泌物与前列腺炎样本分别为1 212份和1 048份，女性宫颈分泌物与阴道分泌物分别为1 566份和1 176份。
, 百拇医药
2.分离培养基：含有V、X因子的嗜血杆菌专用巧克力平板(chocolat haemophilus，HAE，商品编号43561)、API NH鉴定系统(包括鉴定条及配套的编号软件系统)，均由生物梅里埃公司提供。
3.CO2产气管及气袋为浙江省诸暨市枫桥生化试剂厂产品。
二、方法
1.用无菌拭子参照全国临床检验操作规程取样并及时接种于HAE平板和血平板上，分区划线后，HAE平板置于有5%～10% CO2气袋中，35±0.5℃培养18～24 h观察结果。在HAE平板上出现肉眼可见的0.5～1.0 mm直径的菌落，呈灰白色、圆形、光滑半透明，与呼吸道所分离的嗜血杆菌菌落形态相同。革兰染色可见阴性小杆菌，不同型别形态各异。血平板用于其他细菌培养。
2.菌种鉴定 ：按照API NH鉴定系统奈瑟菌及嗜血杆菌的使用说明挑取纯菌落进行鉴定，依照生化反应谱确定型别[7]。即根据流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌是否产脲酶、鸟氨酸酶，靛基质试验是否阳性来分型，具体分类方法见表1。
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表1 流感/副流感嗜血杆菌的分型
菌 名
生化反应
靛基质
脲酶
鸟氨酸脱羧酶
流感嗜血杆菌Ⅰ
+
+
+
流感嗜血杆菌Ⅱ
+
+
, 百拇医药
-
流感嗜血杆菌Ⅲ
-
+
-
流感嗜血杆菌Ⅳ
-
+
+
流感嗜血杆菌Ⅴ
+
-
+
流感嗜血杆菌Ⅵ
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-
-
+
流感嗜血杆菌Ⅶ
+
-
-
流感嗜血杆菌Ⅷ
-
-
-
副流感嗜血杆菌Ⅰ
-
, http://www.100md.com -
+
副流感嗜血杆菌Ⅱ
-
+
+
副流感嗜血杆菌Ⅲ
-
+
-
副流感嗜血杆菌Ⅳ
+
+
+
, 百拇医药
副流感嗜血杆菌Ⅵ
+
-
+
副流感嗜血杆菌Ⅶ
+
+
-
副流感嗜血杆菌Ⅷ
+
-
-
结果
, 百拇医药 1.在被检测的5 022份标本中，分离到198株(3.9%)嗜血杆菌，其中副流感嗜血杆菌有139株(70.2%)、流感嗜血杆菌54株(27.3%),其他嗜血杆菌属5株(2.5%)。
2.分离到的198株嗜血杆菌其型别在各种泌尿生殖道标本中所占的比例，见表2。
表2 198株嗜血杆菌生物型别与各标本中的分离率(%)
菌名(株数)
标本来源
尿道分
泌物
前列
腺液
宫颈分
, 百拇医药
泌物
阴道分
泌物
合计
副流感嗜血杆菌Ⅰ
6( 7.6)
7(14.9)
5(12.8)
4(12.1)
22(11.0)
副流感嗜血杆菌Ⅱ
20(25.3)
, 百拇医药 15(31.9)
12(30.8)
11(33.3)
58(29.3)
副流感嗜血杆菌Ⅲ
23(29.1)
7(14.9)
8(20.5)
11(33.3)
49(24.8)
流感嗜血杆菌Ⅳ
15(19.0)
, 百拇医药
12(25.5)
6(15.4)
5(15.2)
38(19.3)
其他型别
嗜血杆菌
15(19.0)
6(12.8)
8(20.5)
2( 6.1)
31(15.6)
合计
, 百拇医药
79(39.9)
47(23.7)
39(19.7)
33(16.7)
198
讨论
无论是急性还是慢性泌尿生殖道感染，目前我国临床与实验室一般都重视对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、淋病奈瑟菌、支原体等常见致病菌进行分离培养，而对那些需要添加特殊营养成分才能培养成功的致病菌，嗜血杆菌引起的泌尿生殖道感染未能引起足够的重视，这也影响临床明确诊断病因及治疗。我们选用法国生物梅里埃公司的HAE培养基对我院近期疑有泌尿生殖道感染的门诊或住院患者的5 022份标本做嗜血杆菌的分离培养，此培养基含有嗜血杆菌生长所需的各种营养物质和抑制正常菌群生长的抗生素，既能使各型嗜血杆菌快速、良好生长，同时能抑制革兰阳性菌及部分革兰阴性杆菌的生长，大大提高了嗜血杆菌的分离率。API NH鉴定系统是通过检测嗜血杆菌或奈瑟菌所产生的胞外酶，其检测不必经细菌生长利用反应基质来判读，故鉴定时间较短只需2 h[7]。
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我们用此种方法培养了5 022份泌尿生殖道标本，结果约4%(198/5 022)的标本分离出嗜血杆菌，其中副流感嗜血杆菌占70.2%(139/198)，流感嗜血杆菌占27.3%(54/198)，其他嗜血杆菌为2.5%(5/198)。进一步对分离株生物型研究发现：副流感嗜血杆菌生物Ⅱ型、Ⅲ型在泌尿生殖道分离率较高，分别占分离菌的29.3%和24.8%，而在分离到的流感嗜血杆菌中则以生物型Ⅳ多见,占分离菌的19.2%。从标本来源看，嗜血杆菌的感染以男性尿道分泌物多见(39.9%)，其次是前列腺液和宫颈分泌物(23.7%和19.7%)(表2)；对嗜血杆菌的型别检测有利于了解本地区嗜血杆菌引起感染的菌株流行情况，从我院检测的结果分析，目前在我院及周边地区引起泌尿生殖道感染的嗜血杆菌主要为副流感嗜血杆菌Ⅱ型、Ⅲ型，这与国外文献报道的结果相似[7，8]；是否泌尿生殖道更适合这两型别的寄居，尚有待于进一步研究。来自于泌尿生殖道的嗜血杆菌其药敏结果与来自呼吸道的相似[9-11]，不同型别间其对抗生素的耐药性有一定的差异，具体情况我们正在观察中。
, 百拇医药
在被检测的5 022份患者标本中，检出嗜血杆菌的患者临床上均表现为有不同程度的泌尿生殖道炎症。在检出的198份患者标本中，有121份为单纯的嗜血杆菌感染，尚有77份患者标本合并其他病原体感染，尤其以表皮葡萄球菌多见，大肠埃希菌次之。这种现象表明对疑有泌尿道炎症的患者，在做普通细菌培养时应考虑加做一个嗜血杆菌的培养，以免耽搁治疗，尤其是临床上表现为泌尿生殖道炎症，而普通细菌培养为阴性的病例，嗜血杆菌的培养及检出显得尤为重要。嗜血杆菌在泌尿生殖道的感染率虽比较低(3.9%)，但又不容忽视。现已证明嗜血杆菌确实可以成为某些泌尿生殖道炎症的病原菌[4，5]。嗜血杆菌的非呼吸道感染应引起微生物工作者及临床医生的普遍关注。
作者单位：王伟平(318020 浙江省黄岩第一人民医院检验科)
张仙森(318020 浙江省黄岩第一人民医院检验科)
陈丽英(浙江省武义县中医院检验科)
, 百拇医药
吕火祥(浙江省人民医院检验科)
刘建栋(浙江省人民医院检验科)
参考文献
1，陈菊茂，王诚毅. 流感嗜血杆菌引起脑脓肿1例. 临床检验杂志，1997,15:48.
2，Henry D, Ruoff GE, Rhudy J, et al. Clinical comparison of cefuroxime axetil and amoxicillin/clavulanate in the treatment of patients with secondary bacterial infections of acute bronchitis.Clin Ther,1995,17:861-874.
3，Felmingham D,Gruneberg RN.A multicentre collaborative study of the antimicrobial susceptibility of community-acquired,lower respiratory tract pathogens 1992-1993:the Alexander Project.J Antmicrob Chemother, 1996,38 Suppl A:1-57.
, 百拇医药
4，Vazquez F,Andres MT,Palacio V,et al. [Isolation of Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae in genitourinary infections:a 4-year review]. Enferm Infecc Microbiol Clin,1996,14:181-185.
5，Galan F,Garcia-Martos P, Mira J [Urinary tract infection caused by Haemophilus spp.in pediatrics:a rarely studied disease]. Enferm Infecc Microbiol Clin,1996,14:483-485.
6，Gromkova RC,Mottalini TC,Dove MG.Genetic transformation in Haemophilus parainfluenzae clinical isolates.Curr Microbiol,1998,37:123-126.
, http://www.100md.com
7，Barbe G,Babolat M,Boeufgras JM,et al.Evaluation of API NH,a new 2-hour system for identification of Neisseria and Haemophilus species and Moraxella catarrhalis in a routine clinical laboratory. J Clin Microbiol,1994,32:187-189.
8，Pierard D,De Waele B,Covens L,et al.Haemophilus parainfluenzae biliary tract infections.J Clin Microbiol,1996,34:1866-1867.
9，薛冰，解静平.流感嗜血杆菌抗生素敏感性研究.中华微生物学和免疫学杂志，1996, 16:24.
10，项明洁，江勇，徐蓉，等.两种培养基对嗜血杆菌属分离鉴定的比较.中华医学检验杂志，1997，20：32-34.
11，郑晓天，曹玉璞，袁林，等.流感嗜血杆菌分型及抗菌素敏感性的研究.中华医学检验杂志，1989，12：102-103., 百拇医药
王伟平 张仙森 陈丽英 吕火祥 刘建栋
摘 要 目的 了解嗜血杆菌在泌尿生殖道感染患者泌尿生殖道分泌物标本中的分离率及其生物型与临床意义。方法 选用嗜血杆菌专用培养基(HAE)和API NH鉴定系统对5 022份泌尿生殖道感染标本进行分离培养与鉴定。结果 分离出嗜血杆菌198株(3.9%)，其中副流感嗜血杆菌139株、流感嗜血杆菌54株、嗜沫/副嗜沫嗜血杆菌5株。进一步生化分型研究结果提示：Ⅱ型副流感嗜血杆菌分离率最高(29.3%)，其次为Ⅲ型副流感嗜血杆菌(24.8%)与Ⅳ型流感嗜血杆菌(19.2%)。嗜血杆菌阳性检出率在感染标本中以男性尿道分泌物为最高(39.9%)。结论 嗜血杆菌是引起泌尿生殖道感染的病原菌之一，其分离率以副流感嗜血杆菌为主，对其型别的检测有利于对菌株的流行病学调查；我国临床与实验室人员应加强对嗜血杆菌引起泌尿生殖道感染的重视。
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关键词：泌尿生殖系统疾病；嗜血杆菌属；细菌分型技术
嗜血杆菌广泛地寄居于人类上呼吸道，常引起呼吸道的急性感染，如急性鼻咽炎、喉炎、急性支气管炎、肺炎、脑脓肿等[1-3]，已研究证明偶尔也可引起泌尿生殖道炎症。近几年已有些国外文献报道在尿液、生殖道分泌物等感染标本中检出嗜血杆菌，尽管阳性率不高，却有着重要的临床意义[4-6]，而国内文献很少有这方面的报道。为了了解我国泌尿生殖道感染嗜血杆菌的分离率及相应临床意义，我们对来自我院的5 022份泌尿生殖道的标本做了检测，并对这组资料进行统计，结果分析如下。
材料与方法
一、材料
1.标本来源：采集本院门诊与住院泌尿道感染患者的泌尿生殖道分泌物标本5 022份，其中男性尿道分泌物与前列腺炎样本分别为1 212份和1 048份，女性宫颈分泌物与阴道分泌物分别为1 566份和1 176份。
, 百拇医药
2.分离培养基：含有V、X因子的嗜血杆菌专用巧克力平板(chocolat haemophilus，HAE，商品编号43561)、API NH鉴定系统(包括鉴定条及配套的编号软件系统)，均由生物梅里埃公司提供。
3.CO2产气管及气袋为浙江省诸暨市枫桥生化试剂厂产品。
二、方法
1.用无菌拭子参照全国临床检验操作规程取样并及时接种于HAE平板和血平板上，分区划线后，HAE平板置于有5%～10% CO2气袋中，35±0.5℃培养18～24 h观察结果。在HAE平板上出现肉眼可见的0.5～1.0 mm直径的菌落，呈灰白色、圆形、光滑半透明，与呼吸道所分离的嗜血杆菌菌落形态相同。革兰染色可见阴性小杆菌，不同型别形态各异。血平板用于其他细菌培养。
2.菌种鉴定 ：按照API NH鉴定系统奈瑟菌及嗜血杆菌的使用说明挑取纯菌落进行鉴定，依照生化反应谱确定型别[7]。即根据流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌是否产脲酶、鸟氨酸酶，靛基质试验是否阳性来分型，具体分类方法见表1。
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表1 流感/副流感嗜血杆菌的分型
菌 名
生化反应
靛基质
脲酶
鸟氨酸脱羧酶
流感嗜血杆菌Ⅰ
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流感嗜血杆菌Ⅱ
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, 百拇医药
-
流感嗜血杆菌Ⅲ
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流感嗜血杆菌Ⅳ
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流感嗜血杆菌Ⅴ
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流感嗜血杆菌Ⅵ
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流感嗜血杆菌Ⅶ
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流感嗜血杆菌Ⅷ
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副流感嗜血杆菌Ⅰ
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副流感嗜血杆菌Ⅱ
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副流感嗜血杆菌Ⅲ
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副流感嗜血杆菌Ⅳ
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副流感嗜血杆菌Ⅵ
+
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副流感嗜血杆菌Ⅶ
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-
副流感嗜血杆菌Ⅷ
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结果
, 百拇医药 1.在被检测的5 022份标本中，分离到198株(3.9%)嗜血杆菌，其中副流感嗜血杆菌有139株(70.2%)、流感嗜血杆菌54株(27.3%),其他嗜血杆菌属5株(2.5%)。
2.分离到的198株嗜血杆菌其型别在各种泌尿生殖道标本中所占的比例，见表2。
表2 198株嗜血杆菌生物型别与各标本中的分离率(%)
菌名(株数)
标本来源
尿道分
泌物
前列
腺液
宫颈分
, 百拇医药
泌物
阴道分
泌物
合计
副流感嗜血杆菌Ⅰ
6( 7.6)
7(14.9)
5(12.8)
4(12.1)
22(11.0)
副流感嗜血杆菌Ⅱ
20(25.3)
, 百拇医药 15(31.9)
12(30.8)
11(33.3)
58(29.3)
副流感嗜血杆菌Ⅲ
23(29.1)
7(14.9)
8(20.5)
11(33.3)
49(24.8)
流感嗜血杆菌Ⅳ
15(19.0)
, 百拇医药
12(25.5)
6(15.4)
5(15.2)
38(19.3)
其他型别
嗜血杆菌
15(19.0)
6(12.8)
8(20.5)
2( 6.1)
31(15.6)
合计
, 百拇医药
79(39.9)
47(23.7)
39(19.7)
33(16.7)
198
讨论
无论是急性还是慢性泌尿生殖道感染，目前我国临床与实验室一般都重视对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、淋病奈瑟菌、支原体等常见致病菌进行分离培养，而对那些需要添加特殊营养成分才能培养成功的致病菌，嗜血杆菌引起的泌尿生殖道感染未能引起足够的重视，这也影响临床明确诊断病因及治疗。我们选用法国生物梅里埃公司的HAE培养基对我院近期疑有泌尿生殖道感染的门诊或住院患者的5 022份标本做嗜血杆菌的分离培养，此培养基含有嗜血杆菌生长所需的各种营养物质和抑制正常菌群生长的抗生素，既能使各型嗜血杆菌快速、良好生长，同时能抑制革兰阳性菌及部分革兰阴性杆菌的生长，大大提高了嗜血杆菌的分离率。API NH鉴定系统是通过检测嗜血杆菌或奈瑟菌所产生的胞外酶，其检测不必经细菌生长利用反应基质来判读，故鉴定时间较短只需2 h[7]。
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我们用此种方法培养了5 022份泌尿生殖道标本，结果约4%(198/5 022)的标本分离出嗜血杆菌，其中副流感嗜血杆菌占70.2%(139/198)，流感嗜血杆菌占27.3%(54/198)，其他嗜血杆菌为2.5%(5/198)。进一步对分离株生物型研究发现：副流感嗜血杆菌生物Ⅱ型、Ⅲ型在泌尿生殖道分离率较高，分别占分离菌的29.3%和24.8%，而在分离到的流感嗜血杆菌中则以生物型Ⅳ多见,占分离菌的19.2%。从标本来源看，嗜血杆菌的感染以男性尿道分泌物多见(39.9%)，其次是前列腺液和宫颈分泌物(23.7%和19.7%)(表2)；对嗜血杆菌的型别检测有利于了解本地区嗜血杆菌引起感染的菌株流行情况，从我院检测的结果分析，目前在我院及周边地区引起泌尿生殖道感染的嗜血杆菌主要为副流感嗜血杆菌Ⅱ型、Ⅲ型，这与国外文献报道的结果相似[7，8]；是否泌尿生殖道更适合这两型别的寄居，尚有待于进一步研究。来自于泌尿生殖道的嗜血杆菌其药敏结果与来自呼吸道的相似[9-11]，不同型别间其对抗生素的耐药性有一定的差异，具体情况我们正在观察中。
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在被检测的5 022份患者标本中，检出嗜血杆菌的患者临床上均表现为有不同程度的泌尿生殖道炎症。在检出的198份患者标本中，有121份为单纯的嗜血杆菌感染，尚有77份患者标本合并其他病原体感染，尤其以表皮葡萄球菌多见，大肠埃希菌次之。这种现象表明对疑有泌尿道炎症的患者，在做普通细菌培养时应考虑加做一个嗜血杆菌的培养，以免耽搁治疗，尤其是临床上表现为泌尿生殖道炎症，而普通细菌培养为阴性的病例，嗜血杆菌的培养及检出显得尤为重要。嗜血杆菌在泌尿生殖道的感染率虽比较低(3.9%)，但又不容忽视。现已证明嗜血杆菌确实可以成为某些泌尿生殖道炎症的病原菌[4，5]。嗜血杆菌的非呼吸道感染应引起微生物工作者及临床医生的普遍关注。
作者单位：王伟平(318020 浙江省黄岩第一人民医院检验科)
张仙森(318020 浙江省黄岩第一人民医院检验科)
陈丽英(浙江省武义县中医院检验科)
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吕火祥(浙江省人民医院检验科)
刘建栋(浙江省人民医院检验科)
参考文献
1，陈菊茂，王诚毅. 流感嗜血杆菌引起脑脓肿1例. 临床检验杂志，1997,15:48.
2，Henry D, Ruoff GE, Rhudy J, et al. Clinical comparison of cefuroxime axetil and amoxicillin/clavulanate in the treatment of patients with secondary bacterial infections of acute bronchitis.Clin Ther,1995,17:861-874.
3，Felmingham D,Gruneberg RN.A multicentre collaborative study of the antimicrobial susceptibility of community-acquired,lower respiratory tract pathogens 1992-1993:the Alexander Project.J Antmicrob Chemother, 1996,38 Suppl A:1-57.
, 百拇医药
4，Vazquez F,Andres MT,Palacio V,et al. [Isolation of Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae in genitourinary infections:a 4-year review]. Enferm Infecc Microbiol Clin,1996,14:181-185.
5，Galan F,Garcia-Martos P, Mira J [Urinary tract infection caused by Haemophilus spp.in pediatrics:a rarely studied disease]. Enferm Infecc Microbiol Clin,1996,14:483-485.
6，Gromkova RC,Mottalini TC,Dove MG.Genetic transformation in Haemophilus parainfluenzae clinical isolates.Curr Microbiol,1998,37:123-126.
, http://www.100md.com
7，Barbe G,Babolat M,Boeufgras JM,et al.Evaluation of API NH,a new 2-hour system for identification of Neisseria and Haemophilus species and Moraxella catarrhalis in a routine clinical laboratory. J Clin Microbiol,1994,32:187-189.
8，Pierard D,De Waele B,Covens L,et al.Haemophilus parainfluenzae biliary tract infections.J Clin Microbiol,1996,34:1866-1867.
9，薛冰，解静平.流感嗜血杆菌抗生素敏感性研究.中华微生物学和免疫学杂志，1996, 16:24.
10，项明洁，江勇，徐蓉，等.两种培养基对嗜血杆菌属分离鉴定的比较.中华医学检验杂志，1997，20：32-34.
11，郑晓天，曹玉璞，袁林，等.流感嗜血杆菌分型及抗菌素敏感性的研究.中华医学检验杂志，1989，12：102-103., 百拇医药