Fas细胞凋亡基因与其配体在肺癌组织中表达的意义
Fas细胞凋亡基因与其配体在肺癌组织中表达的意义
李怀臣 王春霞 陶仲为 王洪云 牟晓燕
关键词：Fas；肺癌 位于细胞膜上的Fas细胞凋亡基因受体(亦称为CD95/APO-1)及其 配基FasL(ligand)构 成Fas 系统，能够引起细胞的凋亡。其作用在肿瘤的研究中倍受关注，但在肺癌发生、发展 中的作用尚不十分清楚。为此，我们应用免疫组化的方法对84 例蜡块保存的肺癌组织进行 了检测，以探讨Fas系统在肺癌中表达的意义。
表1 Fas和FasL与肺癌病理类型的关系
组别
例数
Fas阳性例数(%)
, http://www.100md.com
FasL阳性例数(%)
+
++
χ12(P值)
+
++
χ22(P值)
鳞癌
46
12(26)
31(67)
36.7(<0. 001)
, http://www.100md.com
18(39)
14(30)
19.8(<0.001)
腺癌
22
9(40)
11(50)
22.5(<0.001)
11(50)
7(32)
22.7(<0.001)
小细胞癌
, http://www.100md.com
16
5(31)
5(31)
6.8(<0.01)
4(25)
1(6)
2.6(>0.05)
正常组织
20
3(15)
1(5)
1(5)
1(5)
, 百拇医药
注：χ12和χ22分别表示Fas、FasL在肺癌组织和正常组织中表达结果比较的 卡方值 材料与方法 (1)材料来源：所有标本均为1995年5月～1997 年5月 在山东省立医院和山东胸科医院手术切除、蜡块保存的肺癌组织。男69例，女15例，年龄32 ～73岁，平均年龄55岁。其中鳞癌46例，腺癌22例，小细胞癌(SCLC)16例，有纵隔淋巴结转 移者46例，无转移者38例。肺癌TNM分期为Ⅰ期+Ⅱ期53例，Ⅲ期31例。取远离肺癌(≥10 cm )的正常肺组织20份为对照。(2)试剂及染色方法：Fas及FasL链酶亲合素生物素复合物(SABC)免疫组化试剂盒购自武汉 博士德生物工程有限公司。4 μm石蜡切片经二甲苯脱蜡、系列酒精后充分水洗，3% H2O 2灭活内源性酶，微波抗原修复，正常工作血清封闭，1∶100一抗(兔IgG)4℃过夜，1∶10 0二抗(生物素化山羊抗兔IgG)，37℃ 30 min，现配SABC液37℃ 30 min二氨基联苯胺(DAB) 显 色15 min，蒸馏水洗，苏木素复染，脱水，透明，封片，显微镜观察。(3)结果判定：根据 着色程度及阳性细胞百分数分为：阴性(-)：整张切片均无着色或偶有浅黄色细胞，但阳性 细胞<5%；阳性(+)：黄色，阳性细胞5%～25%；强阳性(++)：深黄色，阳性细胞≥26%。
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统计学处理：χ2检验和趋势χ2检验。
结果 (1)Fas、FasL在正常肺组织和肺癌组织中表达的分布：Fas主 要在鳞癌细胞膜上表达(图1)，在正常组织的细胞膜上无表达或弱表达，在腺癌和SCLC的胞 浆中有表达；FasL在正常组织和SCLC无表达或弱表达，在鳞癌和腺癌细胞多在胞浆中表达( 图2 、3)。(2)Fas、FasL与肺癌病理类型的关系：Fas在三种病理类型的肺癌组织中均有显著表达；FasL在鳞癌和腺癌中显著表达，在SCLC中表达与正常肺组织差异无显著性(见表1)。( 3)Fa s、FasL与淋巴结转移、TNM分期的关系：有淋巴结转移且TNM分期为Ⅲ期的癌组织中Fas表达 显著增强，经卡方检验差异有显著性(P<0.05)；FasL与淋巴结转移及TNM分期的关 系差异无显著性(见表2)。(4)Fas和FasL与肺癌病理分级的关系：鳞癌和腺癌中，随着病理 分 级的增加，Fas表达逐步增强，经趋势卡方检验差异有显著性(P<0.05)；而FasL则差异 无显著性；SCLC例数太少，未做统计(见表3)。
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表2 Fas和FasL与淋巴结转移及TNM 分期的关系
组别
例数
Fas阳性例数(%)
FasL阳性例数(%)
+
++
+
++
淋巴结
有转移
46
14(30)
, http://www.100md.com
29(63 )
16(35)
10(22)
无转移
38
12(32)
17(44)*
17(45)
12(32)
TNM分期
Ⅰ+Ⅱ期
53
, 百拇医药 19(35)
23(43)
23(43)
14(26)
Ⅲ期
31
7(22)
23(74)△
10(32)
8(25)
注：与有淋巴结转移的比较，*P<0.05，与Ⅰ期+Ⅱ期比较，△ P<0.05 表3 Fas和FasL与肺癌病理分级的 关系
, http://www.100md.com
组别
例数
Fas阳性例数(%)
FasL阳性例数(%)
+
++
+
++
鳞癌
高分化
7
3(42)
3(42)
, 百拇医药
3(43)
1(14)
中分化
24
7(29)
15(62)*
9(38)
7(29)
低分化
15
2(13)
13(87)*
, http://www.100md.com
6 (40)
4(27)
腺癌
高+中分化
12
6(50)
4(33)
6 (50)
3(25)
低分化
10
3(30)
7(70)△
, 百拇医药
5 (50)
4(40)
注：与相邻的上组数据比较，*P<0.05，与高+中分化比较，△ P <0.05 讨论 Fas/FasL通过诱导凋亡发挥其抑制肿瘤形成和进展的作 用。 但当Fas/FasL表达或功能异常时，可导致Fas系统信号破坏，不能进行正常的诱导凋亡作用 ，从而使异常细胞逃避了机体的免疫监视，发展成恶性肿瘤细胞。目前的研究发现，许多细 胞可以逃逸其凋亡[1，2]。我们的研究结果表明，肺癌细胞对Fas/FasL诱导的凋 亡可能有抵抗作用，不同病理类型的肺癌细胞其抵抗机制可能也有差别。在腺癌细胞中，可 能 由于Fas基因的无效转录、翻译，形成了无功能活性实变体，不能有效地表达在细胞膜上， 却表达在细胞浆中，因而不能与FasL结合诱导凋亡作用；在鳞癌和小细胞癌中，Fas表达显 著增强，而FasL表达较弱，使两者的比例失衡，不能通过Fas诱导肺癌细胞的凋亡。因此， 恶性肿瘤细胞虽然可以广泛表达Fas，但不一定进行FasL介导下的凋亡[3，4]。 另外，研究结果还表明，Fas的表达与肺癌的生物特性有密切联系。通过对Fas的检测，对了解肺癌淋巴结转移的规律以及临床分期有一定的 临床价值。同时，通过表3的结果分析，发现鳞癌和腺癌细胞分化愈差，其Fas表达就愈显 著，这提示Fas与这两种癌细胞的分化状态有一定的联系，这与Gratas等[5]报 道的结果相一致。
, http://www.100md.com
总之，通过对Fas/FasL 系统的深入研究，对了解肺癌的发生、发展及淋巴结转移的规律， 将有重大意义。
图1 鳞癌，细胞膜呈深黄色(++)DAB×200 图2 腺癌，细胞浆呈深黄色(++)DAB×200 图3 小细胞癌，细胞浆呈深黄色(+)DAB×400
, 百拇医药
作者单位：李怀臣(250021 济南,山东省立医院呼吸科)
陶仲为(250021 济南,山东省立医院呼吸科)
牟晓燕(250021 济南,山东省立医院呼吸科)
王春霞(中心实验室)
王洪云(山东省胸科医院病理科)
参考文献
1，O′Connell J, O'Sullivan GC, Collins JK, et al. The Fas counteratt ack: Fas-mediated T cell killing by colon cancer cells expressing Fas ligand. J Exp Med, 1996，184: 1075-1082 .
, 百拇医药
2，Strand S , Hofmann WJ, Hug H, et al. Lymphocyte apoptosi s induced by CD95(APO-1/Fas) ligand-expressing tumor cells-a mechanism of immune evasion? Nat Med,1996，2:1361-1366.
3，Womg GHW, Goeddel DV. Fas antigen and P55 TNF receptor signal apoptosis through distinct pathways. J Immunol，1994, 152: 1751.
4，Owen-Schaub LB, Radinsky R, Kruzel E, et al. Anti-Fas on non hematopietic tu mors: levels of Fas/APO-1 and bcl-2 are not predictive of biological respons iveness. Cancer Res, 1994,54:1580.
5，Gratas C , Tohma Y , Barnas C ,et al. Up-regulation of Fas ( APO-1/CD95) l igand and down-regulation of Fas expression in human esophageal cancer .Cancer Res, 1998，58: 2057-2062., 百拇医药
李怀臣 王春霞 陶仲为 王洪云 牟晓燕
关键词：Fas；肺癌 位于细胞膜上的Fas细胞凋亡基因受体(亦称为CD95/APO-1)及其 配基FasL(ligand)构 成Fas 系统，能够引起细胞的凋亡。其作用在肿瘤的研究中倍受关注，但在肺癌发生、发展 中的作用尚不十分清楚。为此，我们应用免疫组化的方法对84 例蜡块保存的肺癌组织进行 了检测，以探讨Fas系统在肺癌中表达的意义。
表1 Fas和FasL与肺癌病理类型的关系
组别
例数
Fas阳性例数(%)
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FasL阳性例数(%)
+
++
χ12(P值)
+
++
χ22(P值)
鳞癌
46
12(26)
31(67)
36.7(<0. 001)
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18(39)
14(30)
19.8(<0.001)
腺癌
22
9(40)
11(50)
22.5(<0.001)
11(50)
7(32)
22.7(<0.001)
小细胞癌
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16
5(31)
5(31)
6.8(<0.01)
4(25)
1(6)
2.6(>0.05)
正常组织
20
3(15)
1(5)
1(5)
1(5)
, 百拇医药
注：χ12和χ22分别表示Fas、FasL在肺癌组织和正常组织中表达结果比较的 卡方值 材料与方法 (1)材料来源：所有标本均为1995年5月～1997 年5月 在山东省立医院和山东胸科医院手术切除、蜡块保存的肺癌组织。男69例，女15例，年龄32 ～73岁，平均年龄55岁。其中鳞癌46例，腺癌22例，小细胞癌(SCLC)16例，有纵隔淋巴结转 移者46例，无转移者38例。肺癌TNM分期为Ⅰ期+Ⅱ期53例，Ⅲ期31例。取远离肺癌(≥10 cm )的正常肺组织20份为对照。(2)试剂及染色方法：Fas及FasL链酶亲合素生物素复合物(SABC)免疫组化试剂盒购自武汉 博士德生物工程有限公司。4 μm石蜡切片经二甲苯脱蜡、系列酒精后充分水洗，3% H2O 2灭活内源性酶，微波抗原修复，正常工作血清封闭，1∶100一抗(兔IgG)4℃过夜，1∶10 0二抗(生物素化山羊抗兔IgG)，37℃ 30 min，现配SABC液37℃ 30 min二氨基联苯胺(DAB) 显 色15 min，蒸馏水洗，苏木素复染，脱水，透明，封片，显微镜观察。(3)结果判定：根据 着色程度及阳性细胞百分数分为：阴性(-)：整张切片均无着色或偶有浅黄色细胞，但阳性 细胞<5%；阳性(+)：黄色，阳性细胞5%～25%；强阳性(++)：深黄色，阳性细胞≥26%。
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统计学处理：χ2检验和趋势χ2检验。
结果 (1)Fas、FasL在正常肺组织和肺癌组织中表达的分布：Fas主 要在鳞癌细胞膜上表达(图1)，在正常组织的细胞膜上无表达或弱表达，在腺癌和SCLC的胞 浆中有表达；FasL在正常组织和SCLC无表达或弱表达，在鳞癌和腺癌细胞多在胞浆中表达( 图2 、3)。(2)Fas、FasL与肺癌病理类型的关系：Fas在三种病理类型的肺癌组织中均有显著表达；FasL在鳞癌和腺癌中显著表达，在SCLC中表达与正常肺组织差异无显著性(见表1)。( 3)Fa s、FasL与淋巴结转移、TNM分期的关系：有淋巴结转移且TNM分期为Ⅲ期的癌组织中Fas表达 显著增强，经卡方检验差异有显著性(P<0.05)；FasL与淋巴结转移及TNM分期的关 系差异无显著性(见表2)。(4)Fas和FasL与肺癌病理分级的关系：鳞癌和腺癌中，随着病理 分 级的增加，Fas表达逐步增强，经趋势卡方检验差异有显著性(P<0.05)；而FasL则差异 无显著性；SCLC例数太少，未做统计(见表3)。
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表2 Fas和FasL与淋巴结转移及TNM 分期的关系
组别
例数
Fas阳性例数(%)
FasL阳性例数(%)
+
++
+
++
淋巴结
有转移
46
14(30)
, http://www.100md.com
29(63 )
16(35)
10(22)
无转移
38
12(32)
17(44)*
17(45)
12(32)
TNM分期
Ⅰ+Ⅱ期
53
, 百拇医药 19(35)
23(43)
23(43)
14(26)
Ⅲ期
31
7(22)
23(74)△
10(32)
8(25)
注：与有淋巴结转移的比较，*P<0.05，与Ⅰ期+Ⅱ期比较，△ P<0.05 表3 Fas和FasL与肺癌病理分级的 关系
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组别
例数
Fas阳性例数(%)
FasL阳性例数(%)
+
++
+
++
鳞癌
高分化
7
3(42)
3(42)
, 百拇医药
3(43)
1(14)
中分化
24
7(29)
15(62)*
9(38)
7(29)
低分化
15
2(13)
13(87)*
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6 (40)
4(27)
腺癌
高+中分化
12
6(50)
4(33)
6 (50)
3(25)
低分化
10
3(30)
7(70)△
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5 (50)
4(40)
注：与相邻的上组数据比较，*P<0.05，与高+中分化比较，△ P <0.05 讨论 Fas/FasL通过诱导凋亡发挥其抑制肿瘤形成和进展的作 用。 但当Fas/FasL表达或功能异常时，可导致Fas系统信号破坏，不能进行正常的诱导凋亡作用 ，从而使异常细胞逃避了机体的免疫监视，发展成恶性肿瘤细胞。目前的研究发现，许多细 胞可以逃逸其凋亡[1，2]。我们的研究结果表明，肺癌细胞对Fas/FasL诱导的凋 亡可能有抵抗作用，不同病理类型的肺癌细胞其抵抗机制可能也有差别。在腺癌细胞中，可 能 由于Fas基因的无效转录、翻译，形成了无功能活性实变体，不能有效地表达在细胞膜上， 却表达在细胞浆中，因而不能与FasL结合诱导凋亡作用；在鳞癌和小细胞癌中，Fas表达显 著增强，而FasL表达较弱，使两者的比例失衡，不能通过Fas诱导肺癌细胞的凋亡。因此， 恶性肿瘤细胞虽然可以广泛表达Fas，但不一定进行FasL介导下的凋亡[3，4]。 另外，研究结果还表明，Fas的表达与肺癌的生物特性有密切联系。通过对Fas的检测，对了解肺癌淋巴结转移的规律以及临床分期有一定的 临床价值。同时，通过表3的结果分析，发现鳞癌和腺癌细胞分化愈差，其Fas表达就愈显 著，这提示Fas与这两种癌细胞的分化状态有一定的联系，这与Gratas等[5]报 道的结果相一致。
, http://www.100md.com
总之，通过对Fas/FasL 系统的深入研究，对了解肺癌的发生、发展及淋巴结转移的规律， 将有重大意义。
图1 鳞癌，细胞膜呈深黄色(++)DAB×200 图2 腺癌，细胞浆呈深黄色(++)DAB×200 图3 小细胞癌，细胞浆呈深黄色(+)DAB×400
, 百拇医药
作者单位：李怀臣(250021 济南,山东省立医院呼吸科)
陶仲为(250021 济南,山东省立医院呼吸科)
牟晓燕(250021 济南,山东省立医院呼吸科)
王春霞(中心实验室)
王洪云(山东省胸科医院病理科)
参考文献
1，O′Connell J, O'Sullivan GC, Collins JK, et al. The Fas counteratt ack: Fas-mediated T cell killing by colon cancer cells expressing Fas ligand. J Exp Med, 1996，184: 1075-1082 .
, 百拇医药
2，Strand S , Hofmann WJ, Hug H, et al. Lymphocyte apoptosi s induced by CD95(APO-1/Fas) ligand-expressing tumor cells-a mechanism of immune evasion? Nat Med,1996，2:1361-1366.
3，Womg GHW, Goeddel DV. Fas antigen and P55 TNF receptor signal apoptosis through distinct pathways. J Immunol，1994, 152: 1751.
4，Owen-Schaub LB, Radinsky R, Kruzel E, et al. Anti-Fas on non hematopietic tu mors: levels of Fas/APO-1 and bcl-2 are not predictive of biological respons iveness. Cancer Res, 1994,54:1580.
5，Gratas C , Tohma Y , Barnas C ,et al. Up-regulation of Fas ( APO-1/CD95) l igand and down-regulation of Fas expression in human esophageal cancer .Cancer Res, 1998，58: 2057-2062., 百拇医药