树突状细胞在肺腺癌组织中的浸润及其影响
树突状细胞在肺腺癌组织中的浸润及其影响
龚选举 阎玉虎 吴建平
摘 要 目的 研究肺腺癌组织中树突状细胞(DC)的浸润程度及对预后的影响。方法 将S-100蛋白作为DC特异性标记物，应用免疫组织化学方法检测肺腺癌组织中DC分布。结果 46例肺腺癌中，DC显著浸润者19例，5年生存率61%，无或轻度浸润者27例，5年生存率21%。低分化腺癌26例，显著浸润者10例，5年生存率57%，轻度浸润者16例，5年生存率16%。经Log-rank检验，在显著浸润和轻度浸润组二者之间差异有显著性。结论 肺腺癌组织中树突状细胞显著浸润的预后明显好于轻度浸润的病例。
关键词：肺腺癌；树突状细胞；预后
对于树突状细胞(DC)的实验和临床研究，国外甚热，国内近年来开始涉足这一领域[1-3]。S-100蛋白阳性标记的DC主要于肿瘤组织内和癌性间质中散在分布，很少见于周围肺组织。这种细胞同肿瘤细胞紧密接触，呈褐黑色。其形态学上有一个不规则的核，胞浆呈分枝状突起，形似树突状，因此而得名树突状细胞。我们对手术切除的肺腺癌组织中DC的浸润程度及对生存与预后的影响，作了如下研究。
, 百拇医药
材料与方法
一、材料
材料来源于1978年～1994年间湖北省肿瘤医院手术切除的肺腺癌病例共46例。为了便于分析比较，选择的病例在治疗方式及临床分期上均一致(T2N0M0)[4]。所有病例都获得随访及生存时间的统计。全部病例的组织切片均为原发肿瘤病理切片。
二、方法
对肿瘤组织中DC的标记，采用免疫组织化学的方法即S-100蛋白阳性的方法进行研究。由于DC内也存在S-100蛋白，因此，将S-100蛋白作为DC的特异性标记物[5]。免疫学方法采用链霉生物素-过氧化物酶连结法。首先切片脱蜡至水；然后通过3%H2O2在室温下5 min以灭活内源性酶；经血清封闭组织；然后依次滴加S-100抗体，室温下2 h；羊抗IgG室温下15 min；链霉亲和素复合物室温下15 min；每步后经磷酸缓冲液反复冲洗，最后经3，3-二氨基联苯胺显色、封片。所有试剂采用武汉博士德生物公司提供的即用型试剂盒。S-100蛋白阳性标记的树突状细胞在肿瘤组织中的浸润程度是依据Furukawa等[6]提出的分级标准：0～20个阳性细胞为无或轻度浸润；20个以上为显著浸润。生存曲线是通过Kaplan-Meier方法获得[7]。预后因素通过Log-rank检验分析[8]。
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结果
46例肺腺癌中，依据DC浸润的程度分为2组。即DC在瘤组织内显著浸润组和DC在瘤组织内无或轻度浸润组。DC显著浸润者19例,占41%。存活最长8年，最短2年，平均4.3年，5年生存率为61%。DC无或轻度浸润者27例，占59%。存活最长5年，最短不到1年，平均存活2.9年，5年生存率21%(χ2＝6.53，P<0.05)。46例腺癌中高分化腺癌20例，其中显著浸润者9例，占45%，5年生存率为62%。无或轻度浸润者11例，占55%，5年生存率为33%(χ2＝1.80，P>0.05)。低分化腺癌26例，其中显著浸润者10例，占38%，5年生存率为57%。无或轻度浸润者16例，占62%，5年生存率16%(χ2＝4.70，P<0.05)。
本组研究的结果显示，DC显著浸润组与DC无或轻度浸润组5年生存率比较，经Log-rank检验，二者差异有显著性。46例腺癌中低分化腺癌26例，其中显著浸润者与无或轻度浸润者5年生存率比较，经Log-rank检验二者差异有显著性。高分化腺癌20例，其中显著浸润者与无或轻度浸润者5年生存率比较,经Log-rank检验，二者差异无显著性。本研究还对手术切除肺腺癌患者清扫的区域淋巴结进行了研究。结果显示区域淋巴结内DC反应的情况，无论在高分化腺癌或低分化腺癌中对病人的生存均无明显影响(P>0.05)。
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讨论
能够手术切除的肺癌病人，尽管其病理类型及临床分期一样，但术后病人的生存时间却明显不同。这提示机体内部的免疫功能对肿瘤的发生、发展及限制有一定的作用，这一作用随着免疫学研究的不断深入而进一步得到证实。较多的研究发现，大部分外科切除的实体瘤内的DC浸润程度与患者的预后有关。瘤内浸润的DC数量多，则患者的预后好，反之亦然。提示瘤内DC与肿瘤的发生、发展有密切的关系。Tsujitani等[9]研究了210例手术切除的胃腺癌患者，结果表明DC即S-100蛋白阳性显著浸润的82例患者5年生存率为60.4%，而轻度浸润的128例患者5年生存率为18.8%[6]。类似的结果也见于对结、直肠腺癌及食道癌的研究[5]。Furukawa等[6]研究了40例手术切除的肺腺癌组织内DC的浸润情况，结果显示，显著浸润的22例患者中，其5年生存率为86.4%，而无或轻度浸润的18例患者5年生存率为38.9%[5]。
, 百拇医药
关于DC参与肿瘤免疫的机制，据目前研究的材料提示，DC不能直接杀伤肿瘤细胞，但它的最大特点是能够显著刺激初始型T细胞(native T cells)增殖。在机体的细胞免疫和体液免疫中起重要的调控作用[3]。
综上所述,研究结果显示，瘤组织内DC显著浸润的病例其生存与预后要比轻度浸润的病例好，在低分化腺癌更为明显。虽然影响肿瘤病人的预后有诸多因素，但DC的浸润及其对肿瘤的影响，从目前的研究资料来看可能是一个重要的因素。当然对DC的研究还处于实验阶段，进一步的研究将揭示其真正面目。
作者单位：龚选举(430070 武汉，湖北省肿瘤医院病理科)
吴建平(430070 武汉，湖北省肿瘤医院病理科)
阎玉虎(430070 武汉，湖北省肿瘤医院外科)
, 百拇医药
参考文献
[1]Schuler G,Steinman RM.Dendritic cells as adjuvants for immune- mediated resistance to tumor.J Exp Med, 1997,186：1183-1188.
[2]Adema GJ,Hartgers F,Verstraten R,et al.A dendritic-cell-derived c-c chemokine that preferentially attracts native T cell. Nature, 1997,387:713-718.
[3]曹雪涛.树突状细胞的基础与临床研究新进展. 中国免疫学杂志,1998 ,3：161-168.
[4]中华人民共和国卫生部医政司,主编.中国常见恶性肿瘤诊治规范. 第2版.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社出版,1991.17.
, 百拇医药
[5]Lu L,Qian S,Hershberger PA,et al.Fas ligand(CD95L) and B7 expressoin on dendritic cells provide counter-regulatory signals for T cell survival and proliferation. J Immunol,1997,158:5676-5680.
[6]Furukawa T,Watanabe S,Kodama T,et al.T-zone histiocytes in adenocarcinoma of the lung in relation to postoperative prognosis. Cancer, 1985,56:2651-2657.
[7]Kaplan EL，Mejer P. Nonparametric estimation from incomplete observations. J Am Stat Assoc，1958,53:457-481.
, 百拇医药
[8]Peto R,Pike MC,Armitage P,et al. Design and analysis of randomized clinical trials requiring prolonged observation of each patient. Bri J Cancer,1977,35:31-39.
[9]Tsujitani S,Kakeji Y,Watanabe A,et al. Infiltration of dendritic cells in relation to tumor invasion and lymph node metastasis in human gastric cancer. Cancer, 1990,66:2012-2016., 百拇医药
龚选举 阎玉虎 吴建平
摘 要 目的 研究肺腺癌组织中树突状细胞(DC)的浸润程度及对预后的影响。方法 将S-100蛋白作为DC特异性标记物，应用免疫组织化学方法检测肺腺癌组织中DC分布。结果 46例肺腺癌中，DC显著浸润者19例，5年生存率61%，无或轻度浸润者27例，5年生存率21%。低分化腺癌26例，显著浸润者10例，5年生存率57%，轻度浸润者16例，5年生存率16%。经Log-rank检验，在显著浸润和轻度浸润组二者之间差异有显著性。结论 肺腺癌组织中树突状细胞显著浸润的预后明显好于轻度浸润的病例。
关键词：肺腺癌；树突状细胞；预后
对于树突状细胞(DC)的实验和临床研究，国外甚热，国内近年来开始涉足这一领域[1-3]。S-100蛋白阳性标记的DC主要于肿瘤组织内和癌性间质中散在分布，很少见于周围肺组织。这种细胞同肿瘤细胞紧密接触，呈褐黑色。其形态学上有一个不规则的核，胞浆呈分枝状突起，形似树突状，因此而得名树突状细胞。我们对手术切除的肺腺癌组织中DC的浸润程度及对生存与预后的影响，作了如下研究。
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材料与方法
一、材料
材料来源于1978年～1994年间湖北省肿瘤医院手术切除的肺腺癌病例共46例。为了便于分析比较，选择的病例在治疗方式及临床分期上均一致(T2N0M0)[4]。所有病例都获得随访及生存时间的统计。全部病例的组织切片均为原发肿瘤病理切片。
二、方法
对肿瘤组织中DC的标记，采用免疫组织化学的方法即S-100蛋白阳性的方法进行研究。由于DC内也存在S-100蛋白，因此，将S-100蛋白作为DC的特异性标记物[5]。免疫学方法采用链霉生物素-过氧化物酶连结法。首先切片脱蜡至水；然后通过3%H2O2在室温下5 min以灭活内源性酶；经血清封闭组织；然后依次滴加S-100抗体，室温下2 h；羊抗IgG室温下15 min；链霉亲和素复合物室温下15 min；每步后经磷酸缓冲液反复冲洗，最后经3，3-二氨基联苯胺显色、封片。所有试剂采用武汉博士德生物公司提供的即用型试剂盒。S-100蛋白阳性标记的树突状细胞在肿瘤组织中的浸润程度是依据Furukawa等[6]提出的分级标准：0～20个阳性细胞为无或轻度浸润；20个以上为显著浸润。生存曲线是通过Kaplan-Meier方法获得[7]。预后因素通过Log-rank检验分析[8]。
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结果
46例肺腺癌中，依据DC浸润的程度分为2组。即DC在瘤组织内显著浸润组和DC在瘤组织内无或轻度浸润组。DC显著浸润者19例,占41%。存活最长8年，最短2年，平均4.3年，5年生存率为61%。DC无或轻度浸润者27例，占59%。存活最长5年，最短不到1年，平均存活2.9年，5年生存率21%(χ2＝6.53，P<0.05)。46例腺癌中高分化腺癌20例，其中显著浸润者9例，占45%，5年生存率为62%。无或轻度浸润者11例，占55%，5年生存率为33%(χ2＝1.80，P>0.05)。低分化腺癌26例，其中显著浸润者10例，占38%，5年生存率为57%。无或轻度浸润者16例，占62%，5年生存率16%(χ2＝4.70，P<0.05)。
本组研究的结果显示，DC显著浸润组与DC无或轻度浸润组5年生存率比较，经Log-rank检验，二者差异有显著性。46例腺癌中低分化腺癌26例，其中显著浸润者与无或轻度浸润者5年生存率比较，经Log-rank检验二者差异有显著性。高分化腺癌20例，其中显著浸润者与无或轻度浸润者5年生存率比较,经Log-rank检验，二者差异无显著性。本研究还对手术切除肺腺癌患者清扫的区域淋巴结进行了研究。结果显示区域淋巴结内DC反应的情况，无论在高分化腺癌或低分化腺癌中对病人的生存均无明显影响(P>0.05)。
, http://www.100md.com
讨论
能够手术切除的肺癌病人，尽管其病理类型及临床分期一样，但术后病人的生存时间却明显不同。这提示机体内部的免疫功能对肿瘤的发生、发展及限制有一定的作用，这一作用随着免疫学研究的不断深入而进一步得到证实。较多的研究发现，大部分外科切除的实体瘤内的DC浸润程度与患者的预后有关。瘤内浸润的DC数量多，则患者的预后好，反之亦然。提示瘤内DC与肿瘤的发生、发展有密切的关系。Tsujitani等[9]研究了210例手术切除的胃腺癌患者，结果表明DC即S-100蛋白阳性显著浸润的82例患者5年生存率为60.4%，而轻度浸润的128例患者5年生存率为18.8%[6]。类似的结果也见于对结、直肠腺癌及食道癌的研究[5]。Furukawa等[6]研究了40例手术切除的肺腺癌组织内DC的浸润情况，结果显示，显著浸润的22例患者中，其5年生存率为86.4%，而无或轻度浸润的18例患者5年生存率为38.9%[5]。
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关于DC参与肿瘤免疫的机制，据目前研究的材料提示，DC不能直接杀伤肿瘤细胞，但它的最大特点是能够显著刺激初始型T细胞(native T cells)增殖。在机体的细胞免疫和体液免疫中起重要的调控作用[3]。
综上所述,研究结果显示，瘤组织内DC显著浸润的病例其生存与预后要比轻度浸润的病例好，在低分化腺癌更为明显。虽然影响肿瘤病人的预后有诸多因素，但DC的浸润及其对肿瘤的影响，从目前的研究资料来看可能是一个重要的因素。当然对DC的研究还处于实验阶段，进一步的研究将揭示其真正面目。
作者单位：龚选举(430070 武汉，湖北省肿瘤医院病理科)
吴建平(430070 武汉，湖北省肿瘤医院病理科)
阎玉虎(430070 武汉，湖北省肿瘤医院外科)
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参考文献
[1]Schuler G,Steinman RM.Dendritic cells as adjuvants for immune- mediated resistance to tumor.J Exp Med, 1997,186：1183-1188.
[2]Adema GJ,Hartgers F,Verstraten R,et al.A dendritic-cell-derived c-c chemokine that preferentially attracts native T cell. Nature, 1997,387:713-718.
[3]曹雪涛.树突状细胞的基础与临床研究新进展. 中国免疫学杂志,1998 ,3：161-168.
[4]中华人民共和国卫生部医政司,主编.中国常见恶性肿瘤诊治规范. 第2版.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社出版,1991.17.
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[5]Lu L,Qian S,Hershberger PA,et al.Fas ligand(CD95L) and B7 expressoin on dendritic cells provide counter-regulatory signals for T cell survival and proliferation. J Immunol,1997,158:5676-5680.
[6]Furukawa T,Watanabe S,Kodama T,et al.T-zone histiocytes in adenocarcinoma of the lung in relation to postoperative prognosis. Cancer, 1985,56:2651-2657.
[7]Kaplan EL，Mejer P. Nonparametric estimation from incomplete observations. J Am Stat Assoc，1958,53:457-481.
, 百拇医药
[8]Peto R,Pike MC,Armitage P,et al. Design and analysis of randomized clinical trials requiring prolonged observation of each patient. Bri J Cancer,1977,35:31-39.
[9]Tsujitani S,Kakeji Y,Watanabe A,et al. Infiltration of dendritic cells in relation to tumor invasion and lymph node metastasis in human gastric cancer. Cancer, 1990,66:2012-2016., 百拇医药