激光散射法测定网织红细胞的临床应用
激光散射法测定网织红细胞的临床应用
李永红 郭希超 钟步云
关键词：激光散射法；网织红细胞 CD-3500R ○全自动血细胞分析仪根据“多角度激光散射法”的检测原理进行网织红细胞(Ret)计数，即当细胞通过检测器时会受到特定波长的激光照射，感受器从不同的角度得到红细胞的光散射信号，根据这些信号仪器可以判别并计数网织红的绝对值和百分比并能显示各细胞群的光散射强度分布图。我们对该仪器的临床应用进行了分析。
一、试验材料
1.美国Abbott公司CD-3500R ○全自动血细胞分析仪。
2.美国Abbott公司提供的Ret专用试剂和质控品。
, 百拇医药
3.EDTA-2K抗凝剂。
4.1%的天青Ⅰ生理盐水溶液。
5.普通光学显微镜。
二、方法与结果
1.仪器的稳定性试验：每天在进行临床标本的网织红细胞计数之前，先用作试剂空白计数两次，再按常规法测定网织红细胞质控物(批号为PG087-2)，连续监测两周(11个工作日)。结果均符合要求。
2.临床标本测试结果的重复性试验：取新鲜抗凝血5份，每份标本吸20 μl，加入3.7 ml的染液中，室温放置15 min后上机测定，每份标本连续测定20次，计算其X、s、CV%(高、低值各分2组)，高值1分别为17.23%、0.60%、3.48%；高值2分别为：6.63%、0.28%、4.22%；中值分别为：2.21%、0.16%、7.22%；低值1分别为：0.63%、0.06%、9.50%；低值2分别为：0.26%、10.03%、11.5%。
, 百拇医药
3.仪器的携带污染率试验：取Ret高值标本1份(Ret=6.63%, RBC=3.76×1012/L)，连续计数3次后立即进行空白计数3次。根据下列公式计算：携带污染带=(空白读数1-空白读数3)/(标本结果3-空白读数3)×100%，得到CD-3500的平均携带污染率为0.26%。
4.仪器测试的灵敏度及其与显微镜法的相关性试验：收集有代表性的临床标本共10份(其中再障2例，声带息肉2例、原发性血小板减少症2例、缺铁性贫血恢复期1例、溶血性贫血3例)，分别用仪器法和显微镜法进行Ret计数。两种方法Ret对比结果表明：对于低值标本，仪器法的灵敏度和分辨力较好；但Ret<6.0%时仪器法结果比显微镜法偏高，而在Ret>8.0%的区域内仪器法则要低。Ret在0.17%～25.88%的总体范围内，两种方法的对比结果经统计处理，其回归方程为Y=1.2X-0.73，r=0.99。
5.标本保存的时间和染色时间对Ret计数结果的影响试验：将标本放置室温，6 h内定时按常规法测定Ret，同时将此标本与染液混合后室温放置，6 h内定时上机测定，高值标本的Ret结果随着放置时间的延长结果有所下降，6 h内平均降低7.6%；染色时间的延长对高值结果有明显下降趋势，2 h内可降低6.0%，而低值标本变化不大。
, http://www.100md.com
6.高白细胞标本对Ret结果的干扰试验：取WBC在(10～87)×109/L的血标本共6份，分别用仪器法和显微镜法计数Ret，结果显示：当WBC>24×109/L时即对Ret有干扰而且随着WBC值的增高而增高，但这种干扰与WBC的数量以及与WBC/RBC的比值非线性关系。
7.利用该仪器对67名正常成年人的Ret结果调查：来我院实习的大中专学生以及来我院作健康体检的外单位职工共67名其中男35名(年龄在19～49岁)，女32名(年龄在19～32岁)，经检查各项生化指标及血细胞三系结果无异常，用该仪器法测定Ret结果，25名男性成年人为(1.24±0.29)%(1.01%～2.53%)；32名女性为(1.49±0.31)%(0.92%～2.83%)。
三、讨论
目前临床上用于Ret计数的仪器种类较多，大多数都是利用荧光染色原理，根据每个红细胞荧光强度大小(结合的荧光染料多少)来差别并计数Ret值。CD-3500血细胞分析仪则是利用多角度激光散射原理进行计数，仪器可较大程度地排除血小板计数、白细胞、正常红细胞等物质的干扰，但通过试验我们发现高WBC会对Ret结果产生正干扰，使结果偏高。因此对于WBC极度增高的病人不适合用仪器法测定网织红细胞。
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仪器法测定Ret的灵敏度有很大提高，但存在着许多的正干扰因素。有关仪器法Ret的正常参考范围，国内外作者利用不同的仪器所作的报道有些差异，我们利用CD-3500全自动血细胞分析仪对35名健康的成年男性和32名女性的调查，其结果分别为(1.24±0.29)%(1.01%～2.53%)和(1.49±0.31)%(0.92%～2.83%)，比国内报道的一些仪器法参考值略为偏高，与国外某些报道相接近。由于Ret试剂成本较贵，本文的健康人调查例数有限(男女共67名)，结果仅供参考。
作者单位：李永红(310003 杭州，浙江医科大学附属第一医院检验科)
郭希超(310003 杭州，浙江医科大学附属第一医院检验科)
钟步云(310003 杭州，浙江医科大学附属第一医院检验科), 百拇医药
李永红 郭希超 钟步云
关键词：激光散射法；网织红细胞 CD-3500R ○全自动血细胞分析仪根据“多角度激光散射法”的检测原理进行网织红细胞(Ret)计数，即当细胞通过检测器时会受到特定波长的激光照射，感受器从不同的角度得到红细胞的光散射信号，根据这些信号仪器可以判别并计数网织红的绝对值和百分比并能显示各细胞群的光散射强度分布图。我们对该仪器的临床应用进行了分析。
一、试验材料
1.美国Abbott公司CD-3500R ○全自动血细胞分析仪。
2.美国Abbott公司提供的Ret专用试剂和质控品。
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3.EDTA-2K抗凝剂。
4.1%的天青Ⅰ生理盐水溶液。
5.普通光学显微镜。
二、方法与结果
1.仪器的稳定性试验：每天在进行临床标本的网织红细胞计数之前，先用作试剂空白计数两次，再按常规法测定网织红细胞质控物(批号为PG087-2)，连续监测两周(11个工作日)。结果均符合要求。
2.临床标本测试结果的重复性试验：取新鲜抗凝血5份，每份标本吸20 μl，加入3.7 ml的染液中，室温放置15 min后上机测定，每份标本连续测定20次，计算其X、s、CV%(高、低值各分2组)，高值1分别为17.23%、0.60%、3.48%；高值2分别为：6.63%、0.28%、4.22%；中值分别为：2.21%、0.16%、7.22%；低值1分别为：0.63%、0.06%、9.50%；低值2分别为：0.26%、10.03%、11.5%。
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3.仪器的携带污染率试验：取Ret高值标本1份(Ret=6.63%, RBC=3.76×1012/L)，连续计数3次后立即进行空白计数3次。根据下列公式计算：携带污染带=(空白读数1-空白读数3)/(标本结果3-空白读数3)×100%，得到CD-3500的平均携带污染率为0.26%。
4.仪器测试的灵敏度及其与显微镜法的相关性试验：收集有代表性的临床标本共10份(其中再障2例，声带息肉2例、原发性血小板减少症2例、缺铁性贫血恢复期1例、溶血性贫血3例)，分别用仪器法和显微镜法进行Ret计数。两种方法Ret对比结果表明：对于低值标本，仪器法的灵敏度和分辨力较好；但Ret<6.0%时仪器法结果比显微镜法偏高，而在Ret>8.0%的区域内仪器法则要低。Ret在0.17%～25.88%的总体范围内，两种方法的对比结果经统计处理，其回归方程为Y=1.2X-0.73，r=0.99。
5.标本保存的时间和染色时间对Ret计数结果的影响试验：将标本放置室温，6 h内定时按常规法测定Ret，同时将此标本与染液混合后室温放置，6 h内定时上机测定，高值标本的Ret结果随着放置时间的延长结果有所下降，6 h内平均降低7.6%；染色时间的延长对高值结果有明显下降趋势，2 h内可降低6.0%，而低值标本变化不大。
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6.高白细胞标本对Ret结果的干扰试验：取WBC在(10～87)×109/L的血标本共6份，分别用仪器法和显微镜法计数Ret，结果显示：当WBC>24×109/L时即对Ret有干扰而且随着WBC值的增高而增高，但这种干扰与WBC的数量以及与WBC/RBC的比值非线性关系。
7.利用该仪器对67名正常成年人的Ret结果调查：来我院实习的大中专学生以及来我院作健康体检的外单位职工共67名其中男35名(年龄在19～49岁)，女32名(年龄在19～32岁)，经检查各项生化指标及血细胞三系结果无异常，用该仪器法测定Ret结果，25名男性成年人为(1.24±0.29)%(1.01%～2.53%)；32名女性为(1.49±0.31)%(0.92%～2.83%)。
三、讨论
目前临床上用于Ret计数的仪器种类较多，大多数都是利用荧光染色原理，根据每个红细胞荧光强度大小(结合的荧光染料多少)来差别并计数Ret值。CD-3500血细胞分析仪则是利用多角度激光散射原理进行计数，仪器可较大程度地排除血小板计数、白细胞、正常红细胞等物质的干扰，但通过试验我们发现高WBC会对Ret结果产生正干扰，使结果偏高。因此对于WBC极度增高的病人不适合用仪器法测定网织红细胞。
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仪器法测定Ret的灵敏度有很大提高，但存在着许多的正干扰因素。有关仪器法Ret的正常参考范围，国内外作者利用不同的仪器所作的报道有些差异，我们利用CD-3500全自动血细胞分析仪对35名健康的成年男性和32名女性的调查，其结果分别为(1.24±0.29)%(1.01%～2.53%)和(1.49±0.31)%(0.92%～2.83%)，比国内报道的一些仪器法参考值略为偏高，与国外某些报道相接近。由于Ret试剂成本较贵，本文的健康人调查例数有限(男女共67名)，结果仅供参考。
作者单位：李永红(310003 杭州，浙江医科大学附属第一医院检验科)
郭希超(310003 杭州，浙江医科大学附属第一医院检验科)
钟步云(310003 杭州，浙江医科大学附属第一医院检验科), 百拇医药