急性白血病患者白细胞表面分化抗原34的检测
急性白血病患者白细胞表面分化抗原34的检测
岳保红 曹孟德 秦东春 毛红丽 黄波田
摘 要 目的 研究白细胞表面分化抗原(CD)34在急性白血病中的表达情况，探讨CD34与白血病的关系。 方法 采用间接免疫荧光技术对118例初诊为急性白血病患者的骨髓标本进行细胞免疫学表型分析。结果 急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、急性杂合细胞白血病(HAL)、急性未分化细胞白血病(AUL)中高表达CD34抗原的病例分别为45.8%(22/48)、37.5%(18/48)、60.0%(12/20)和100.0%(2/2)。CD34阳性细胞(CD34+)在各型白血病骨髓中的数量，以CD34+细胞数占单个核细胞百分率计：ALL中，B-ALL、T-ALL和T/B-ALL组分别为30.7%、11.0%和16.0%；AML中，M0亚型组为41.2%，M1～M5亚型组为24.3%；HAL和AUL分别为43.0%、35.0%。结论 CD34与急性白血病的发生密切相关，不同亚型之间CD34高表达发生率和CD34+细胞数有很大差异。未分化的AUL、低分化的M0及细胞表型紊乱的HAL的CD34+细胞数高于分化明确的白血病。
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关键词：抗原，分化；白血病；免疫表型分型
白细胞表面分化抗原(CD)34是造血干细胞或(和)祖细胞的特异性标志。正常人骨髓细胞中只有少量的CD34阳性细胞(CD34+)，约占单个核细胞的(1.0%～4.0%[1])。我们为了解急性白血病CD34的表达情况，对118例急性白血病患者的CD34高表达发生率和CD34+细胞数进行了检测。
材料和方法
1.研究对象：118例急性白血病患者，其中男68例，女50例，年龄2.5～79岁， 全部为初诊患者。诊断按参考文献[2]标准进行。经免疫学表型分析，急性淋巴细胞白血病(ALL)48例，急性髓细胞性白血病(AML)48例。为比较髓系细胞已分化与低分化之间CD34表达情况的差别，把AML分为2组，其中M0亚型组5例，M1～M5亚型组共43例；另外，急性杂合细胞白血病(HAL)20例，急性未分化细胞白血病(AUL)2例。
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2.单克隆抗体和荧光二抗来源：抗CD34单克隆抗体(mAb)及异硫氰酸荧光素(FITC)标记的二抗均购自中国医学科学院天津血液学研究所。
3.白血病细胞的分离：取患者骨髓，肝素抗凝。经淋巴细胞分离液梯度离心得单个核细胞，pH7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)将细胞稀释至1×108/ml。
4.免疫学表型标记：取白血病细胞悬液10 μl至40孔微孔板上，加抗CD34的mAb工作液50 μl，混匀，置4℃，30 min。用PBS液洗去未结合的mAb，加入FITC二抗，置4℃，结合30 min，洗去未结合二抗，再加入5 μl 60%的无荧光甘油-PBS液。点片后，计数不少于200个细胞，计算阳性细胞百分率。
结果
以CD34+细胞数超过4.0%的白血病作为高表达病例。不同类型和亚型的急性白血病CD34抗原表达情况见表1，2。
, 百拇医药
表1 不同类型急性白血病高表达CD34抗原发生率
白血病类型
病例
数
高表达CD34
病例数
百分率
(%)
急性淋巴细胞白血病
48
22
45.8
急性髓细胞性白血病
, 百拇医药
48
18
37.5
急性杂合细胞白血病
20
12
60.0
急性未分化细胞白血病
2
2
100.0
合计
118
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54
45.8
表2 ALL和AML亚型高表达CD34抗原发生率
类型
亚型
病例
数
高表达CD34
病例数
百分率
(%)
急性淋巴细胞白血病
B-ALL
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30
17
56.7
T-ALL
14
3
21.4*
T/B-ALL
4
2
50.0**
急性髓细胞性白血病
, 百拇医药
M0
5
5
100.0
M1～M5
43
13
32.3△
合计
96
40
41.8
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*与B-ALL比：t=2.19，P<0.05；△与M0比：t=3.05，P<0.01；**与B-ALL比：t=0.25，与T-ALL比：t=1.12，P均>0.05讨论
CD34分子选择性地表达于造血干细胞或(和)祖细胞，且表达随着细胞分化程度的增高而趋减，直至关闭[3]。目前认为，CD34分子是造血干细胞或(和)祖细胞的标志[4]，更多地表达于未分化或低分化的白血病细胞膜上[5]。
1.急性白血病高表达CD34抗原具有一定的生物学意义。急性白血病免疫学表型的异质性已被国内外学者所公认[5]，正常骨髓仅有1.0%～4.0%的单个核细胞表达CD34抗原。结果显示，有45.8%(54/118)的急性白血病高表达CD34抗原，说明作为干及祖细胞标志又是重要粘附分子的CD34，与急性白血病发生、发展有密切关系，同时白血病细胞存在着严重的抗原表达紊乱。周洁等[5]发现CD34高表达的急性白血病其完全缓解率(CR率)低于CD34低表达的病例，并且首次达到CR所需时间明显长于CD34低表达的病例。
, 百拇医药
2.不同类型和同类型不同亚型急性白血病之间CD34抗原表达存在一定差异。表1显示，不同类型白血病中，AUL白血病细胞属未分化细胞，在本组，全部高表达CD34抗原，其次是表型紊乱的HAL达60.0%，再次是定向清楚的ALL和AML，分别为45.8%和37.5%。表2显示，ALL不同亚型中，B-ALL高表达CD34抗原的发生率明显高于T-ALL。M0型是AML中较特殊的类型，相当于髓系祖细胞阶段，所检测的5例M0型全部高表达CD34抗原。M1～M5组是已明确定向的髓系白血病，CD34高表达率只有32.3%，明显低于M0型。
3.CD34+细胞数在不同类型和亚型急性白血病中有明显差别，在T-ALL中最低(占单个核细胞的11.0%)，HAL中最高(43.0%)。ALL中B-ALL亚型CD34+细胞最多(30.7%)，明显高于T-ALL和T/B-ALL组(16.0% )。AML中M0的CD34+细胞(41.2%)明显高于M1～M5组(24.3%)。AUL的CD34+细胞数也处于较高水平，为35.0%。
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4.综合分析可看出，细胞分化越不明确，白血病高表达CD34发生率和CD34+细胞数就越高。AUL、M0和HAL其白血病发生阶段性比较早，出现未分化、低分化或表型紊乱，细胞异质性高，携带干细胞、祖细胞标志的机会增多，所以CD34抗原高表达易发生，CD34+细胞数量也比较多。但处于同一分化水平、分化明确的B-ALL和T-ALL的CD34表达却不同，值得进一步研究。
基金项目：河南省科技攻关项目(971200277)
作者单位：岳保红(450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)
秦东春(450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)
毛红丽(450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)
, 百拇医药
黄波田(450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)
曹孟德(微生物与免疫学教研室)
参考文献
1，张建忠. CD34+造血细胞的研究进展.国外医学输血及血液学分册，1995,18:224-227.
2，张之南，主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京：科学出版社，1998.168-184.
3，隋建华.CD34分子特征及其表达调控.国外医学输血及血液学分册，1999,22:69-72.
4，裴雪涛，王立生，徐黎，等. CD34+造血祖细胞的定向诱导分化研究.中华血液学杂志，1998,19:289-293.
5，周洁，岑东，薛文韬，等.造血干/祖细胞抗原表达在急性白血病中的意义.北京医科大学学报，1997,29:282-284., 百拇医药
岳保红 曹孟德 秦东春 毛红丽 黄波田
摘 要 目的 研究白细胞表面分化抗原(CD)34在急性白血病中的表达情况，探讨CD34与白血病的关系。 方法 采用间接免疫荧光技术对118例初诊为急性白血病患者的骨髓标本进行细胞免疫学表型分析。结果 急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、急性杂合细胞白血病(HAL)、急性未分化细胞白血病(AUL)中高表达CD34抗原的病例分别为45.8%(22/48)、37.5%(18/48)、60.0%(12/20)和100.0%(2/2)。CD34阳性细胞(CD34+)在各型白血病骨髓中的数量，以CD34+细胞数占单个核细胞百分率计：ALL中，B-ALL、T-ALL和T/B-ALL组分别为30.7%、11.0%和16.0%；AML中，M0亚型组为41.2%，M1～M5亚型组为24.3%；HAL和AUL分别为43.0%、35.0%。结论 CD34与急性白血病的发生密切相关，不同亚型之间CD34高表达发生率和CD34+细胞数有很大差异。未分化的AUL、低分化的M0及细胞表型紊乱的HAL的CD34+细胞数高于分化明确的白血病。
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关键词：抗原，分化；白血病；免疫表型分型
白细胞表面分化抗原(CD)34是造血干细胞或(和)祖细胞的特异性标志。正常人骨髓细胞中只有少量的CD34阳性细胞(CD34+)，约占单个核细胞的(1.0%～4.0%[1])。我们为了解急性白血病CD34的表达情况，对118例急性白血病患者的CD34高表达发生率和CD34+细胞数进行了检测。
材料和方法
1.研究对象：118例急性白血病患者，其中男68例，女50例，年龄2.5～79岁， 全部为初诊患者。诊断按参考文献[2]标准进行。经免疫学表型分析，急性淋巴细胞白血病(ALL)48例，急性髓细胞性白血病(AML)48例。为比较髓系细胞已分化与低分化之间CD34表达情况的差别，把AML分为2组，其中M0亚型组5例，M1～M5亚型组共43例；另外，急性杂合细胞白血病(HAL)20例，急性未分化细胞白血病(AUL)2例。
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2.单克隆抗体和荧光二抗来源：抗CD34单克隆抗体(mAb)及异硫氰酸荧光素(FITC)标记的二抗均购自中国医学科学院天津血液学研究所。
3.白血病细胞的分离：取患者骨髓，肝素抗凝。经淋巴细胞分离液梯度离心得单个核细胞，pH7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)将细胞稀释至1×108/ml。
4.免疫学表型标记：取白血病细胞悬液10 μl至40孔微孔板上，加抗CD34的mAb工作液50 μl，混匀，置4℃，30 min。用PBS液洗去未结合的mAb，加入FITC二抗，置4℃，结合30 min，洗去未结合二抗，再加入5 μl 60%的无荧光甘油-PBS液。点片后，计数不少于200个细胞，计算阳性细胞百分率。
结果
以CD34+细胞数超过4.0%的白血病作为高表达病例。不同类型和亚型的急性白血病CD34抗原表达情况见表1，2。
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表1 不同类型急性白血病高表达CD34抗原发生率
白血病类型
病例
数
高表达CD34
病例数
百分率
(%)
急性淋巴细胞白血病
48
22
45.8
急性髓细胞性白血病
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48
18
37.5
急性杂合细胞白血病
20
12
60.0
急性未分化细胞白血病
2
2
100.0
合计
118
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54
45.8
表2 ALL和AML亚型高表达CD34抗原发生率
类型
亚型
病例
数
高表达CD34
病例数
百分率
(%)
急性淋巴细胞白血病
B-ALL
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30
17
56.7
T-ALL
14
3
21.4*
T/B-ALL
4
2
50.0**
急性髓细胞性白血病
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M0
5
5
100.0
M1～M5
43
13
32.3△
合计
96
40
41.8
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*与B-ALL比：t=2.19，P<0.05；△与M0比：t=3.05，P<0.01；**与B-ALL比：t=0.25，与T-ALL比：t=1.12，P均>0.05讨论
CD34分子选择性地表达于造血干细胞或(和)祖细胞，且表达随着细胞分化程度的增高而趋减，直至关闭[3]。目前认为，CD34分子是造血干细胞或(和)祖细胞的标志[4]，更多地表达于未分化或低分化的白血病细胞膜上[5]。
1.急性白血病高表达CD34抗原具有一定的生物学意义。急性白血病免疫学表型的异质性已被国内外学者所公认[5]，正常骨髓仅有1.0%～4.0%的单个核细胞表达CD34抗原。结果显示，有45.8%(54/118)的急性白血病高表达CD34抗原，说明作为干及祖细胞标志又是重要粘附分子的CD34，与急性白血病发生、发展有密切关系，同时白血病细胞存在着严重的抗原表达紊乱。周洁等[5]发现CD34高表达的急性白血病其完全缓解率(CR率)低于CD34低表达的病例，并且首次达到CR所需时间明显长于CD34低表达的病例。
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2.不同类型和同类型不同亚型急性白血病之间CD34抗原表达存在一定差异。表1显示，不同类型白血病中，AUL白血病细胞属未分化细胞，在本组，全部高表达CD34抗原，其次是表型紊乱的HAL达60.0%，再次是定向清楚的ALL和AML，分别为45.8%和37.5%。表2显示，ALL不同亚型中，B-ALL高表达CD34抗原的发生率明显高于T-ALL。M0型是AML中较特殊的类型，相当于髓系祖细胞阶段，所检测的5例M0型全部高表达CD34抗原。M1～M5组是已明确定向的髓系白血病，CD34高表达率只有32.3%，明显低于M0型。
3.CD34+细胞数在不同类型和亚型急性白血病中有明显差别，在T-ALL中最低(占单个核细胞的11.0%)，HAL中最高(43.0%)。ALL中B-ALL亚型CD34+细胞最多(30.7%)，明显高于T-ALL和T/B-ALL组(16.0% )。AML中M0的CD34+细胞(41.2%)明显高于M1～M5组(24.3%)。AUL的CD34+细胞数也处于较高水平，为35.0%。
, http://www.100md.com
4.综合分析可看出，细胞分化越不明确，白血病高表达CD34发生率和CD34+细胞数就越高。AUL、M0和HAL其白血病发生阶段性比较早，出现未分化、低分化或表型紊乱，细胞异质性高，携带干细胞、祖细胞标志的机会增多，所以CD34抗原高表达易发生，CD34+细胞数量也比较多。但处于同一分化水平、分化明确的B-ALL和T-ALL的CD34表达却不同，值得进一步研究。
基金项目：河南省科技攻关项目(971200277)
作者单位：岳保红(450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)
秦东春(450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)
毛红丽(450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)
, 百拇医药
黄波田(450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)
曹孟德(微生物与免疫学教研室)
参考文献
1，张建忠. CD34+造血细胞的研究进展.国外医学输血及血液学分册，1995,18:224-227.
2，张之南，主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京：科学出版社，1998.168-184.
3，隋建华.CD34分子特征及其表达调控.国外医学输血及血液学分册，1999,22:69-72.
4，裴雪涛，王立生，徐黎，等. CD34+造血祖细胞的定向诱导分化研究.中华血液学杂志，1998,19:289-293.
5，周洁，岑东，薛文韬，等.造血干/祖细胞抗原表达在急性白血病中的意义.北京医科大学学报，1997,29:282-284., 百拇医药