病毒感染与成人哮喘发病关系的研究
病毒感染与成人哮喘发病关系的研究
黄升海 史百芬 李京培 阎怀士 王明丽 胡勇
摘 要 目的 探讨病毒感染与成人哮喘的关系及在其发病机制中的作用，为临床诊断和治疗提供有利的线索和依据。方法 应用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对130例成人哮喘患者(哮喘组)和20名健康体检者(正常对照组)的血清进行呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV 3、7)、副流感病毒(PIVⅠ、Ⅲ)和巨细胞病毒(CMV)特异性IgG、IgM抗体检测；同时对17例RSV-IgM阳性病例和正常对照组作RSV-IgE检测并用微量细胞病变抑制法测定其血清干扰素(IFN)水平。结果 几乎所有病例中均有1种或1种以上病毒感染，其中以RSV感染率最高，IgG和IgM总阳性率为78%，与正常对照组比较差异有极显著性(P<0.000 01)，且急性感染者哮喘症状加重。17例RSV-IgM阳性病例中血清RSV-IgE浓度平均A值为(0.36±0.06)与正常组(0.14±0.03)比较，差异有显著性(P<0.05)，而哮喘组IFN水平[(0.81±0.39)×103 IU/L]与正常对照组[(2.23±0.44)×103 IU/L]比较，差异亦有显著性(P<0.01)。 结论 成人哮喘的发作或加重与呼吸道病毒感染关系密切，尤以RSV为甚，其机制与病毒感染损伤呼吸道粘膜、Ⅰ型变态反应的发生和免疫调节因子IFN水平低下等有关。
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关键词：哮喘；感染
呼吸道病毒感染往往是引起或诱发哮喘的主要病因。哮喘可累及各年龄组，目前国内对病毒感染与儿童哮喘的关系报道较多[1，2]，但与成人哮喘关系的研究尚少。我们从1997年1月～1998年2月对130例成人哮喘患者的血清进行了呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV 3、7)、副流感病毒(PIVⅠ、Ⅲ)、巨细胞病毒(CMV)IgG和IgM特异性抗体的检测，并对RSV近期感染哮喘患者进一步检测了IgE和干扰素(IFN)水平，以探讨哮喘与病毒感染的关系及发病机制。
对象与方法
临床确诊的哮喘患者130例(1997年1月～1998年2月期间由安徽省立医院内科确诊)，男82例，女48例，年龄30～70岁，收集血清于-30 ℃保存待测，哮喘诊断标准根据中华医学会呼吸病学分会哮喘学组制定的标准执行[3]。。同时收集相应年龄组近1个月内无呼吸道感染史、既往无心肺疾病和过敏性疾病史的健康体检者为正常对照组，男12名，女8名，年龄20～35岁。
, 百拇医药
各种病毒抗原及酶标抗体均由北京中国预防医学中心提供，干扰素测定用水疱性口炎病毒(VSV)和Hep-2细胞由北京军事医学科学院惠赠，干扰素参考标准盒购自北京药品生物制品检定所。
病毒特异性IgG、IgM、IgE抗体检测以间接酶联免疫法(ELISA)进行，显色并终止反应后在DG5030型酶联免疫检测仪450 nm处读数，以空白孔A值(曾称光密度OD)为0，检测孔A值与对照孔之比(P/N)>2.1判为阳性孔。IgG以1∶1600称为IgG阳性，表示病毒曾经感染过；IgM以1∶100称为IgM阳性，表示病毒近期感染。
IFN效价测定用微量细胞病变抑制法[4]。
统计学处理：采用χ2检验和t检验。
结果
一、病毒特异性IgG、IgM检测结果
, 百拇医药
所检130例成人哮喘患者血清对4种病毒共6个型别(RSV、ADV3，7、PIV Ⅰ，Ⅲ、CMV)的感染情况表明，以RSV感染率最高，IgG、IgM总阳性率为78%，与正常对照组比较差异有极显著性(χ2=47.6，P<0.000 01)，并发现同一病例中有2种或2种以上病毒同时感染的情况。84例(84/130，65%)RSV-IgG阳性病例中，合并ADV3-IgG阳性8例(8/130，6%)；ADV7-IgM阳性2例(2/130，2%)；PIV I-IgG阳性2例(3/130，2%)。17例(17/130，13%)RSV-IgM阳性病例中有ADV3-IgM阳性2例(2/130，1.5%)；ADV7-IgM阳性1例(1/130，0.77%)；RSV-IgG、IgM皆阳性者5例(5/130，4%)。而正常对照组中所测病毒特异性IgG、IgM均为阴性(表1)。
表1 130例成人哮喘患者血清病毒特异性IgG、IgM阳性率(%)
组别
, 百拇医药
例数PIVⅠ
抗体类型
总阳性率
IgG*
IgM△
RSV
ADV3
ADV7
PIV1
PIVⅢ
CMV
RSV
, 百拇医药 ADV3
ADV7
PIVⅠ
PIVⅢ
CMV
RSV
ADV3
ADV7
PIVⅠ
PIVⅢ
CMV
哮喘组
130
, 百拇医药
65
22
26
7
2
4
13
7
0.8
5
0.8
3
78
28
, 百拇医药
27
12
2
7
对照组
20
0
0
0
0
0
0
0
0
, 百拇医药
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
注：* ≥1∶1600，Δ≥1∶100 二、RSV-IgE检测结果
对17例RSV-IgM阳性近期感染患者血清作RSV-IgE检测，其平均A值与正常对照组比较，差异有显著性(t=2.45，P<0.05，表2)。
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表2 RSV近期感染哮喘患者血清
特异性IgE平均水平(X±s)
组 别
例数
血清RSV-IgE(平均A值)
RSV感染组
17
0.36±0.06*
对照组
20
0.14±0.03
注：与正常对照组比较* P<0.05 三、IFN水平测定
, 百拇医药
对17例RSV近期感染患者的血清以微量细胞病变抑制法测定其IFN效价，其平均IU/L值与正常对照组比较差异有显著性(t=2.83，P<0.01，表3)。
表3 RSV近期感染哮喘患者血清IFN平均水平(X±s)
组 别
例数
血清IFN平均水平(IU/L)
RSV感染组
17
(0.81±0.39)×103△
对照组
20
, 百拇医药
(2.23±0.44)×103
注：与正常对照组比较△ P<0.01
讨论
我们的研究发现，成人哮喘患者病毒感染非常普遍，绝大多数病例中都有1种或1种以上病毒感染，以RSV感染率最高为78%，这可能与患者儿童时期即受RSV感染至成年后发生哮喘，或RSV感染一直存在于不同年龄的哮喘患者中有关。研究发现，病毒近期感染者其哮喘呈急性发作或症状严重，在17例RSV-IgM阳性患者中，有10例在近1个月内喘息连续发作达2～4次之多，且病程较长；另有哮喘持续状态2例和咳嗽连续>1个月者2例。这可能是因为病毒感染直接或间接损伤呼吸道粘膜上皮，激发了紧密连接于气道粘膜上皮下的支气管刺激感受器，使其敏感性增高而致气道高反应性，激发哮喘发作，甚至哮喘呈持续状态[1]。由于气道高反应状态的存在，患者又更易受呼吸道病毒侵袭。哮喘患者机体免疫力下降，致潜伏病毒CMV被激活而再感染，本组研究发现，CMV感染率为7%(9/130)，因此哮喘患者更应注意防治病毒感染。
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有作者报道[5]，儿童哮喘可能与病毒特异性IgE诱导的Ⅰ型变态反应有关，我们在成人哮喘检测结果中亦发现，血清IgE浓度较正常对照组明显升高。其机制可能为病毒感染导致机体的细胞免疫功能紊乱，作为IgE受体的CD23表达增加，可促进病毒特异性IgE的大量生成，引起组胺等化学介质释放，从而诱导和放大了Ⅰ型变态反应。在对近期RSV感染患者作血清IFN检测时发现，IFN效价较正常对照组显著降低，并观察到IFN水平低下者，其症状重、体质差，哮喘反复发作。我们认为与病毒感染时改变了淋巴细胞种类、数量和功能，使机体产生IFN的细胞受抑制有关。而IFN是一种重要的非特异性免疫调节因子，它不仅能抗病毒感染，还对IgE介导的过敏反应有抑制作用[6]，因此IFN血浓度减少时，会导致机体一系列免疫调节功能紊乱，同时降低了对IgE介导的过敏反应的抑制作用，从而患者出现病情加重。
本组研究表明，成人哮喘的发生或加重多与病毒感染致机体免疫功能异常有关，其中以RSV感染率最高。Clark[7]认为，鼻病毒在儿童及成人喘息发作中起主要作用，我们未做此方面的研究。只是测定了RSV-IgM阳性者血清特异性IgE和IFN水平，未作进一步的IgM阳性IgG阴性、IgM阴性IgG阳性、IgM阳性IgG阳性分组检测，这些将有待进一步探讨。
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作者单位：黄升海(230032 合肥，安徽医科大学病原生物学教研室)
史百芬(230032 合肥，安徽医科大学病原生物学教研室)
李京培(230032 合肥，安徽医科大学病原生物学教研室)
王明丽(230032 合肥，安徽医科大学病原生物学教研室)
胡勇(230032 合肥，安徽医科大学病原生物学教研室)
阎怀士(安徽省立医院内科)
参考文献
[1]张卫平，肖曼琳，李剑涛.呼吸道合胞病毒对小儿哮喘的诱发作用.实用儿科临床杂志，196，11：218.
, 百拇医药
[2]陈育智，韩秀兰，王之梁，等.哮喘患儿呼吸道病毒抗体调查.实用儿科杂志，1990，5：32-33.
[3]中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘防治指南《支气管哮喘的定义、诊断、治疗、疗效判断标准及教育和管理方案》.中华结核和呼吸杂志，1997，20：261-267.
[4]李京培，史百芬.在慢性哮喘患者血清中测定干扰素水平及其意义.中华医学检验杂志，1992，15：212-213.
[5]刘有恃.呼吸道合胞病毒与哮喘.国外医学微生物学分册，1996，19：6-7.
[6]高美华，编.现代免疫学.济南：山东科学技术出版社，1989.310-312.
[7]Clark TJH. Asthma. 2nd ed. London: Chapman and Hall, 1983. 171-172., 百拇医药
黄升海 史百芬 李京培 阎怀士 王明丽 胡勇
摘 要 目的 探讨病毒感染与成人哮喘的关系及在其发病机制中的作用，为临床诊断和治疗提供有利的线索和依据。方法 应用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对130例成人哮喘患者(哮喘组)和20名健康体检者(正常对照组)的血清进行呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV 3、7)、副流感病毒(PIVⅠ、Ⅲ)和巨细胞病毒(CMV)特异性IgG、IgM抗体检测；同时对17例RSV-IgM阳性病例和正常对照组作RSV-IgE检测并用微量细胞病变抑制法测定其血清干扰素(IFN)水平。结果 几乎所有病例中均有1种或1种以上病毒感染，其中以RSV感染率最高，IgG和IgM总阳性率为78%，与正常对照组比较差异有极显著性(P<0.000 01)，且急性感染者哮喘症状加重。17例RSV-IgM阳性病例中血清RSV-IgE浓度平均A值为(0.36±0.06)与正常组(0.14±0.03)比较，差异有显著性(P<0.05)，而哮喘组IFN水平[(0.81±0.39)×103 IU/L]与正常对照组[(2.23±0.44)×103 IU/L]比较，差异亦有显著性(P<0.01)。 结论 成人哮喘的发作或加重与呼吸道病毒感染关系密切，尤以RSV为甚，其机制与病毒感染损伤呼吸道粘膜、Ⅰ型变态反应的发生和免疫调节因子IFN水平低下等有关。
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关键词：哮喘；感染
呼吸道病毒感染往往是引起或诱发哮喘的主要病因。哮喘可累及各年龄组，目前国内对病毒感染与儿童哮喘的关系报道较多[1，2]，但与成人哮喘关系的研究尚少。我们从1997年1月～1998年2月对130例成人哮喘患者的血清进行了呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV 3、7)、副流感病毒(PIVⅠ、Ⅲ)、巨细胞病毒(CMV)IgG和IgM特异性抗体的检测，并对RSV近期感染哮喘患者进一步检测了IgE和干扰素(IFN)水平，以探讨哮喘与病毒感染的关系及发病机制。
对象与方法
临床确诊的哮喘患者130例(1997年1月～1998年2月期间由安徽省立医院内科确诊)，男82例，女48例，年龄30～70岁，收集血清于-30 ℃保存待测，哮喘诊断标准根据中华医学会呼吸病学分会哮喘学组制定的标准执行[3]。。同时收集相应年龄组近1个月内无呼吸道感染史、既往无心肺疾病和过敏性疾病史的健康体检者为正常对照组，男12名，女8名，年龄20～35岁。
, 百拇医药
各种病毒抗原及酶标抗体均由北京中国预防医学中心提供，干扰素测定用水疱性口炎病毒(VSV)和Hep-2细胞由北京军事医学科学院惠赠，干扰素参考标准盒购自北京药品生物制品检定所。
病毒特异性IgG、IgM、IgE抗体检测以间接酶联免疫法(ELISA)进行，显色并终止反应后在DG5030型酶联免疫检测仪450 nm处读数，以空白孔A值(曾称光密度OD)为0，检测孔A值与对照孔之比(P/N)>2.1判为阳性孔。IgG以1∶1600称为IgG阳性，表示病毒曾经感染过；IgM以1∶100称为IgM阳性，表示病毒近期感染。
IFN效价测定用微量细胞病变抑制法[4]。
统计学处理：采用χ2检验和t检验。
结果
一、病毒特异性IgG、IgM检测结果
, 百拇医药
所检130例成人哮喘患者血清对4种病毒共6个型别(RSV、ADV3，7、PIV Ⅰ，Ⅲ、CMV)的感染情况表明，以RSV感染率最高，IgG、IgM总阳性率为78%，与正常对照组比较差异有极显著性(χ2=47.6，P<0.000 01)，并发现同一病例中有2种或2种以上病毒同时感染的情况。84例(84/130，65%)RSV-IgG阳性病例中，合并ADV3-IgG阳性8例(8/130，6%)；ADV7-IgM阳性2例(2/130，2%)；PIV I-IgG阳性2例(3/130，2%)。17例(17/130，13%)RSV-IgM阳性病例中有ADV3-IgM阳性2例(2/130，1.5%)；ADV7-IgM阳性1例(1/130，0.77%)；RSV-IgG、IgM皆阳性者5例(5/130，4%)。而正常对照组中所测病毒特异性IgG、IgM均为阴性(表1)。
表1 130例成人哮喘患者血清病毒特异性IgG、IgM阳性率(%)
组别
, 百拇医药
例数PIVⅠ
抗体类型
总阳性率
IgG*
IgM△
RSV
ADV3
ADV7
PIV1
PIVⅢ
CMV
RSV
, 百拇医药 ADV3
ADV7
PIVⅠ
PIVⅢ
CMV
RSV
ADV3
ADV7
PIVⅠ
PIVⅢ
CMV
哮喘组
130
, 百拇医药
65
22
26
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2
4
13
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5
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27
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对照组
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注：* ≥1∶1600，Δ≥1∶100 二、RSV-IgE检测结果
对17例RSV-IgM阳性近期感染患者血清作RSV-IgE检测，其平均A值与正常对照组比较，差异有显著性(t=2.45，P<0.05，表2)。
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表2 RSV近期感染哮喘患者血清
特异性IgE平均水平(X±s)
组 别
例数
血清RSV-IgE(平均A值)
RSV感染组
17
0.36±0.06*
对照组
20
0.14±0.03
注：与正常对照组比较* P<0.05 三、IFN水平测定
, 百拇医药
对17例RSV近期感染患者的血清以微量细胞病变抑制法测定其IFN效价，其平均IU/L值与正常对照组比较差异有显著性(t=2.83，P<0.01，表3)。
表3 RSV近期感染哮喘患者血清IFN平均水平(X±s)
组 别
例数
血清IFN平均水平(IU/L)
RSV感染组
17
(0.81±0.39)×103△
对照组
20
, 百拇医药
(2.23±0.44)×103
注：与正常对照组比较△ P<0.01
讨论
我们的研究发现，成人哮喘患者病毒感染非常普遍，绝大多数病例中都有1种或1种以上病毒感染，以RSV感染率最高为78%，这可能与患者儿童时期即受RSV感染至成年后发生哮喘，或RSV感染一直存在于不同年龄的哮喘患者中有关。研究发现，病毒近期感染者其哮喘呈急性发作或症状严重，在17例RSV-IgM阳性患者中，有10例在近1个月内喘息连续发作达2～4次之多，且病程较长；另有哮喘持续状态2例和咳嗽连续>1个月者2例。这可能是因为病毒感染直接或间接损伤呼吸道粘膜上皮，激发了紧密连接于气道粘膜上皮下的支气管刺激感受器，使其敏感性增高而致气道高反应性，激发哮喘发作，甚至哮喘呈持续状态[1]。由于气道高反应状态的存在，患者又更易受呼吸道病毒侵袭。哮喘患者机体免疫力下降，致潜伏病毒CMV被激活而再感染，本组研究发现，CMV感染率为7%(9/130)，因此哮喘患者更应注意防治病毒感染。
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有作者报道[5]，儿童哮喘可能与病毒特异性IgE诱导的Ⅰ型变态反应有关，我们在成人哮喘检测结果中亦发现，血清IgE浓度较正常对照组明显升高。其机制可能为病毒感染导致机体的细胞免疫功能紊乱，作为IgE受体的CD23表达增加，可促进病毒特异性IgE的大量生成，引起组胺等化学介质释放，从而诱导和放大了Ⅰ型变态反应。在对近期RSV感染患者作血清IFN检测时发现，IFN效价较正常对照组显著降低，并观察到IFN水平低下者，其症状重、体质差，哮喘反复发作。我们认为与病毒感染时改变了淋巴细胞种类、数量和功能，使机体产生IFN的细胞受抑制有关。而IFN是一种重要的非特异性免疫调节因子，它不仅能抗病毒感染，还对IgE介导的过敏反应有抑制作用[6]，因此IFN血浓度减少时，会导致机体一系列免疫调节功能紊乱，同时降低了对IgE介导的过敏反应的抑制作用，从而患者出现病情加重。
本组研究表明，成人哮喘的发生或加重多与病毒感染致机体免疫功能异常有关，其中以RSV感染率最高。Clark[7]认为，鼻病毒在儿童及成人喘息发作中起主要作用，我们未做此方面的研究。只是测定了RSV-IgM阳性者血清特异性IgE和IFN水平，未作进一步的IgM阳性IgG阴性、IgM阴性IgG阳性、IgM阳性IgG阳性分组检测，这些将有待进一步探讨。
, http://www.100md.com
作者单位：黄升海(230032 合肥，安徽医科大学病原生物学教研室)
史百芬(230032 合肥，安徽医科大学病原生物学教研室)
李京培(230032 合肥，安徽医科大学病原生物学教研室)
王明丽(230032 合肥，安徽医科大学病原生物学教研室)
胡勇(230032 合肥，安徽医科大学病原生物学教研室)
阎怀士(安徽省立医院内科)
参考文献
[1]张卫平，肖曼琳，李剑涛.呼吸道合胞病毒对小儿哮喘的诱发作用.实用儿科临床杂志，196，11：218.
, 百拇医药
[2]陈育智，韩秀兰，王之梁，等.哮喘患儿呼吸道病毒抗体调查.实用儿科杂志，1990，5：32-33.
[3]中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘防治指南《支气管哮喘的定义、诊断、治疗、疗效判断标准及教育和管理方案》.中华结核和呼吸杂志，1997，20：261-267.
[4]李京培，史百芬.在慢性哮喘患者血清中测定干扰素水平及其意义.中华医学检验杂志，1992，15：212-213.
[5]刘有恃.呼吸道合胞病毒与哮喘.国外医学微生物学分册，1996，19：6-7.
[6]高美华，编.现代免疫学.济南：山东科学技术出版社，1989.310-312.
[7]Clark TJH. Asthma. 2nd ed. London: Chapman and Hall, 1983. 171-172., 百拇医药