精索静脉曲张患者的减数分裂分析
刘永章 竺海波
摘 要 目的:探讨造成精索静脉曲张患者的生育力减弱的机理。 方法:对54例精索静脉曲张患者的睾丸作活检减数分裂分析，对其29例同时作精液标本的减数分裂分析。 结果:54例患者睾丸活检减数分裂分析阻滞在粗线期45例，单价体6例，多价体2例，正常减数分裂1例。其中29例患者睾丸活检、精液标本减数分裂分析阻滞在粗线期28例，单价体1例，两者结果一致。结论:精索静脉曲张患者的生育力减弱大多受染色体不育效应的影响。
关键词：精索静脉曲张；减数分裂；生育力
目前一些资料表明，在男性不育症中，由体细胞染色体畸变而造成的约占2%～5%，还有高达6.6%的不育男性体细胞染色体正常而由生殖细胞减数分裂异常行为造成[1]。本实验通过对睾丸活检组织和精液的减数分裂研究，观察睾丸组织和精液的减数分裂行为，提供精子生成过程的动态状况，明确减数分裂的障碍发生在哪一时期，这比常规睾丸活检病理检查更为可靠。同时，从生物学角度来探讨造成精索静脉曲张患者生育力减弱的机理。
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1 材料和方法
1.1 对象 精索静脉曲张患者54例，年龄18～44岁，平均28岁。不育40例，不育时间为2～10年不等，因阴囊部下坠或疼痛就诊14例，平均病程38个月。精索静脉曲张度数分别为Ⅰ度10例、Ⅱ度18例、Ⅲ度26例。54例均有不同程度精液异常，其中少精症19例(精子总数<2千万/毫升)，精子无力症25例(精子总数2～4千万/毫升，精子活动率<30%)，还有10例精子总数在4～6千万/毫升。
1.2 材料 取54例患者的睾丸组织(>3mm×3mm×3mm)作活检睾丸的减数分裂分析，其中29例同时作精液标本的减数分裂分析；32例取外周血液进行培养作淋巴细胞染色体分析。
1.3 方法
1.3.1 精液减数分裂染色体标本[2]：将精液标本置室温下液化，加0.25ml(1μg/ml)秋水仙素，37℃ 30min。加1∶1(V∶V)0.075M KCl溶液置37℃低渗30min，室温沉淀30min。去除粘液离心，取沉淀物置0.075M KCl溶液中置37℃低渗30min，再离心，在4℃用2ml固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)固定30min，再离心，固定并重复数次。制片，染色。
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1.3.2 睾丸减数分裂染色体标本[3]：取睾丸组织剥掉精小管鞘，置0.88%KCl溶液中低渗8～10h，然后固定(甲醇∶冰醋酸=3∶1)12～18h，离心，取沉淀物置于的5ml 45%的冰醋酸溶液中立即离心5min，制片，火焰干燥，4%～10% Giemsa染色。
1.3.3 外周血淋巴细胞染色体标本：按常规方法进行。
2 结果和讨论
减数分裂是生殖细胞所特有的。精索静脉曲张可以造成睾丸生精功能不同程度的影响，睾丸生精细胞减数分裂受阻。本实验对54例精索静脉曲张患者作睾丸活检的减数分裂分析，结果有45例减数分裂阻滞在粗线期(图2)，同时可见数目较多的粗线期细胞和粗线期之前各阶段的幼稚细胞，也有少数的中期Ⅰ细胞和退化的减数分裂Ⅰ细胞，但不能供分析染色体之用，从患者的睾丸组织生精细胞象即可断此类病例精子发生过程受阻在初级精母细胞减数分裂的粗线期。另外还有6例出现单价染色体(图3)。在正常男性减数分裂Ⅰ中，同源染色体配对形成22个常染色体二价体和一个X-Y二价体，总数为23个二价体。当同源染色体不配对或提前分离时就在减数分裂Ⅰ中出现单独分散存在的单价染色体的单价体。出现的单价体有2个或4个以上，多数为常染色体的单价体。还有2例出现多价体(图4)，可见有22个染色体成分，可能包含有一个环状四价体RIV(ring IV)，系体细胞染色体相互易位；Chandley 等[4]曾提出部分不育男性减数分裂异常者会产生多价体和单价体，而体细胞染色体仍表现为正常，这与本实验结果一致。
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图1 正常
图2 粗线期
图3 单价休(箭头u所指)
图4 多价体
从上述实验结果可以看出，造成患者生育力减弱的有两个原因：一是生精细胞成熟过程发生阻滞现象，导致精子数目减少或无精子症，或者精子活力降低；二是由于染色体组的不平衡分离(如易位或其他结构重排)产生精子异常，从而导致不受精或受精后流产或死胎，或者出生有遗传缺陷的不平衡杂合子婴儿。这两种方式都可以引起男性不育或生育力降低。男性不育的这种效应通常称为是来源于染色体的不育，Chandley[4]称这种效应为男性不育的染色体效应；从本组研究结果可以看出，这54例精索静脉曲张患者大多数是受染色体不育效应的影响。
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目前人类减数分裂标本除了直接用睾丸组织制备外，Sperling等和Templado等[5]发展了用精液标本制作减数分裂染色体标本的新技术，两者各有优缺点，前者准确性高，但取材困难，不易被病人所接受。后者解决了取材困难，同时也能准确地反映睾丸内精子发生过程的功能状态，但阳性率不如前者，精液标本中的减数分裂图像质量略低于睾丸活检，我们做了29例，结果两者一致，28例阻滞在粗线期，1例单价体，说明精液可代替睾丸活检进行减数分裂分析，但由于例数不多，有待于今后进一步深入研究探讨。
作者简介：刘永章(1964-)男，浙江浦江人，讲师。
刘永章(温州医学院 生物学教研室，浙江 温州 325027)
竺海波(温州医学院附属第二医院泌尿外科，浙江 温州 325027)
参考文献
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[1] Egozcue J,Templado C,Vidal F,et al. Meiotic studies in a series of 1100 infertile and sterile males[J]. Hun Genet, 1983,65 :185.
[2] 徐鸣.辐射诱发精卵细胞染色体畸变研究进展[J]. 国外医学遗传学分册，1991，2：66.
[3] Evans EP,Breckon G,Ford CE. An air drying method for meiotic preparations from mammalian testes[J]. Cytogenetics,1964,3:289.
[4] Chandely AC. Male infertility and meiosis in man[A]. In:Frajese G,Hafez EFE,Conti C Fabbrini A Ceds oligozoos permia:Recent Progress in andrology[M]. New York:Raven Press,1981,247-265.
[5] Templado C,Marina S,Coll MD,et al. Meiotic studies in human semen :Report of 180 cases[J]. Hum Genet,1980,53:335., http://www.100md.com
摘 要 目的:探讨造成精索静脉曲张患者的生育力减弱的机理。 方法:对54例精索静脉曲张患者的睾丸作活检减数分裂分析，对其29例同时作精液标本的减数分裂分析。 结果:54例患者睾丸活检减数分裂分析阻滞在粗线期45例，单价体6例，多价体2例，正常减数分裂1例。其中29例患者睾丸活检、精液标本减数分裂分析阻滞在粗线期28例，单价体1例，两者结果一致。结论:精索静脉曲张患者的生育力减弱大多受染色体不育效应的影响。
关键词：精索静脉曲张；减数分裂；生育力
目前一些资料表明，在男性不育症中，由体细胞染色体畸变而造成的约占2%～5%，还有高达6.6%的不育男性体细胞染色体正常而由生殖细胞减数分裂异常行为造成[1]。本实验通过对睾丸活检组织和精液的减数分裂研究，观察睾丸组织和精液的减数分裂行为，提供精子生成过程的动态状况，明确减数分裂的障碍发生在哪一时期，这比常规睾丸活检病理检查更为可靠。同时，从生物学角度来探讨造成精索静脉曲张患者生育力减弱的机理。
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1 材料和方法
1.1 对象 精索静脉曲张患者54例，年龄18～44岁，平均28岁。不育40例，不育时间为2～10年不等，因阴囊部下坠或疼痛就诊14例，平均病程38个月。精索静脉曲张度数分别为Ⅰ度10例、Ⅱ度18例、Ⅲ度26例。54例均有不同程度精液异常，其中少精症19例(精子总数<2千万/毫升)，精子无力症25例(精子总数2～4千万/毫升，精子活动率<30%)，还有10例精子总数在4～6千万/毫升。
1.2 材料 取54例患者的睾丸组织(>3mm×3mm×3mm)作活检睾丸的减数分裂分析，其中29例同时作精液标本的减数分裂分析；32例取外周血液进行培养作淋巴细胞染色体分析。
1.3 方法
1.3.1 精液减数分裂染色体标本[2]：将精液标本置室温下液化，加0.25ml(1μg/ml)秋水仙素，37℃ 30min。加1∶1(V∶V)0.075M KCl溶液置37℃低渗30min，室温沉淀30min。去除粘液离心，取沉淀物置0.075M KCl溶液中置37℃低渗30min，再离心，在4℃用2ml固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)固定30min，再离心，固定并重复数次。制片，染色。
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1.3.2 睾丸减数分裂染色体标本[3]：取睾丸组织剥掉精小管鞘，置0.88%KCl溶液中低渗8～10h，然后固定(甲醇∶冰醋酸=3∶1)12～18h，离心，取沉淀物置于的5ml 45%的冰醋酸溶液中立即离心5min，制片，火焰干燥，4%～10% Giemsa染色。
1.3.3 外周血淋巴细胞染色体标本：按常规方法进行。
2 结果和讨论
减数分裂是生殖细胞所特有的。精索静脉曲张可以造成睾丸生精功能不同程度的影响，睾丸生精细胞减数分裂受阻。本实验对54例精索静脉曲张患者作睾丸活检的减数分裂分析，结果有45例减数分裂阻滞在粗线期(图2)，同时可见数目较多的粗线期细胞和粗线期之前各阶段的幼稚细胞，也有少数的中期Ⅰ细胞和退化的减数分裂Ⅰ细胞，但不能供分析染色体之用，从患者的睾丸组织生精细胞象即可断此类病例精子发生过程受阻在初级精母细胞减数分裂的粗线期。另外还有6例出现单价染色体(图3)。在正常男性减数分裂Ⅰ中，同源染色体配对形成22个常染色体二价体和一个X-Y二价体，总数为23个二价体。当同源染色体不配对或提前分离时就在减数分裂Ⅰ中出现单独分散存在的单价染色体的单价体。出现的单价体有2个或4个以上，多数为常染色体的单价体。还有2例出现多价体(图4)，可见有22个染色体成分，可能包含有一个环状四价体RIV(ring IV)，系体细胞染色体相互易位；Chandley 等[4]曾提出部分不育男性减数分裂异常者会产生多价体和单价体，而体细胞染色体仍表现为正常，这与本实验结果一致。
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图1 正常
图2 粗线期
图3 单价休(箭头u所指)
图4 多价体
从上述实验结果可以看出，造成患者生育力减弱的有两个原因：一是生精细胞成熟过程发生阻滞现象，导致精子数目减少或无精子症，或者精子活力降低；二是由于染色体组的不平衡分离(如易位或其他结构重排)产生精子异常，从而导致不受精或受精后流产或死胎，或者出生有遗传缺陷的不平衡杂合子婴儿。这两种方式都可以引起男性不育或生育力降低。男性不育的这种效应通常称为是来源于染色体的不育，Chandley[4]称这种效应为男性不育的染色体效应；从本组研究结果可以看出，这54例精索静脉曲张患者大多数是受染色体不育效应的影响。
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目前人类减数分裂标本除了直接用睾丸组织制备外，Sperling等和Templado等[5]发展了用精液标本制作减数分裂染色体标本的新技术，两者各有优缺点，前者准确性高，但取材困难，不易被病人所接受。后者解决了取材困难，同时也能准确地反映睾丸内精子发生过程的功能状态，但阳性率不如前者，精液标本中的减数分裂图像质量略低于睾丸活检，我们做了29例，结果两者一致，28例阻滞在粗线期，1例单价体，说明精液可代替睾丸活检进行减数分裂分析，但由于例数不多，有待于今后进一步深入研究探讨。
作者简介：刘永章(1964-)男，浙江浦江人，讲师。
刘永章(温州医学院 生物学教研室，浙江 温州 325027)
竺海波(温州医学院附属第二医院泌尿外科，浙江 温州 325027)
参考文献
, 百拇医药
[1] Egozcue J,Templado C,Vidal F,et al. Meiotic studies in a series of 1100 infertile and sterile males[J]. Hun Genet, 1983,65 :185.
[2] 徐鸣.辐射诱发精卵细胞染色体畸变研究进展[J]. 国外医学遗传学分册，1991，2：66.
[3] Evans EP,Breckon G,Ford CE. An air drying method for meiotic preparations from mammalian testes[J]. Cytogenetics,1964,3:289.
[4] Chandely AC. Male infertility and meiosis in man[A]. In:Frajese G,Hafez EFE,Conti C Fabbrini A Ceds oligozoos permia:Recent Progress in andrology[M]. New York:Raven Press,1981,247-265.
[5] Templado C,Marina S,Coll MD,et al. Meiotic studies in human semen :Report of 180 cases[J]. Hum Genet,1980,53:335., http://www.100md.com