80例大鼠异位心脏移植的体会
80例大鼠异位心脏移植的体会
李温斌 许秀芳 董然 陈宝田 马海波
摘 要 为研究心脏移植后急性排异反应及心脏缺血再灌注损伤，我们建立了大鼠异位心脏移植模型。Wistar大鼠心脏的升主动脉及主肺动脉分别与SD大鼠的腹主动脉和后腔静脉做端侧吻合，将Wistar大鼠心脏移植于SD大鼠腹腔内。80例大鼠异位心脏移植模型成功建立，手术成功率90.0%。我们从以下方面作了总结：1.麻醉；2.供心的摘取及保存；3.受体的准备；4.心脏移植；5.术后处理。
关键词：大鼠；异位心脏移植模型
大鼠异位心脏移植模型是Ono[1]于1964年率先创立的。该模型不断被改进，广泛应用于心脏移植后急性排异反应及心脏缺血再灌注损伤等研究。我们自1992年建立该模型，现已应用于多项有关心脏移植的急性排异反应的研究[2～3]，共建立该模型80例。现将我们建立模型的初步体会总结如下。
, 百拇医药
材料与方法
一、实验用药的配制 2%戊巴比妥钠：用戊巴比妥钠2g加100ml生理盐水溶解。1：100肝素钠：取1支肝素钠(12500u)溶于125ml生理盐水中，低温保存。
二、实验动物 受体大鼠：SD系，130～180g，北京医科大学实验动物部提供。供体大鼠：Wistar系，110～160g，北京医科大学实验动物部提供。
三、心脏移植动物模型的制备 1.麻醉 供受体术前均用2%戊巴比妥钠腹腔注射，45mg/kg。2.供心摘取 麻醉满意后，将Wistar大鼠固定于鼠台，胸腹部酒精消毒，打开腹腔，经肝静脉或下腔静脉注入1：100肝素盐水(3～5ml/kg)，供体肝素化后“U”字形打开胸腔，剪去胸腺，剪断前后腔静脉，同时用冰屑包埋心脏局部降温，经升主动脉弓部灌注0～4℃安贞Ⅱ号心脏停跳液5～10ml，待心脏完全停跳，呈灰白色，柔软状为止。游离并尽可能远地剪断升主动脉及主肺动脉，游离右前腔静脉并“0”号丝线结扎，将左前腔静脉、后腔静脉、左右肺静脉一起结扎，于结扎远端剪断，取出心脏置0～4℃安贞Ⅱ号停跳液中保存备用。取供心时间为5min左右。3.受体准备及心脏移植 SD大鼠麻醉后固定于鼠台，消毒腹部后，取正中切口，暴露并游离腹主动脉及后腔静脉，(二者不做分离)，根据需要决定是否结扎双侧腰静脉，游离长度约0.5～1cm，用微型无创血管夹夹住上下两端，置手术显微镜下做腹主动脉及后腔静脉侧切口，开始心脏移植(图1)。将供心的升主动脉及主肺动脉分别与受体的腹主动脉和后腔静脉端侧吻合(8/0丝线连续吻合)。吻合完毕后放开阻断夹即见冠脉充血，30秒至1min左右心脏复跳。检查无出血、心跳规律、有力即可关腹，用“0”号丝线连续缝合关腹。术后注意保温，待动物清醒后送回动物室分笼饲养，术中术后均不用抗生素。手术在洁净条件下操作。
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图1 移植模型示意图
结 果
自1992年至1997年共建立了80例大鼠异位心脏移植模型，手术总时间(供心消毒开始至受体关腹为止)52±6.56min。供心总缺血时间最长40min(指供心停跳至复跳时间)。手术成功率90.0%。在不用任何抗排异反应药物情况下，供心存活时间为11.7±0.80天。
体 会
1.麻醉 麻醉剂量要合适，过量可导致大鼠死亡，量少麻醉浅，给手术造成困难，首次剂量要足够，如不足，反复给药不易掌握麻醉效果，给手术造成困难甚至致大鼠死亡；我们最初给2%戊巴比妥钠，2ml/kg，效果不佳，考虑麻醉药质量问题，换药后麻醉较好，所以要确保麻醉药不过期不失效；腹腔注射时，应注射于右下腹，避免注入腹壁肌肉，麻醉效果的判断：呼吸正常，对疼痛有轻微的反应，切腹壁时可有抬头，但躯体不动，不影响手术，心脏移植完成后大鼠基本清醒，肢体能活动，表明麻醉合适；如呼吸深慢意味着麻醉过深；如呼吸浅快、大鼠躁动表明麻醉过浅。
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2.供心摘取及保存 摘取心脏时注意：(1)供体肝素化。经肝静脉或下腔静脉注射肝素盐水时应缓慢注射，注射太快会造成心脏过胀损伤心肌；(2)开胸后应立即剪断后腔静脉放血(放血的目的是减轻心脏前负荷)，并同时用冰屑置于心脏表面降温，快速剪除胸腺，充分显露升主动脉，经升主动脉根部灌注安贞Ⅱ号心脏停跳液，用镊子夹住升主动脉远端以提高灌注压；(3)前腔静脉单独结扎，结扎处离右心房3～5mm远以免损伤窦房结；(4)用眼科剪插入心包横窦尽可能远地剪断升主动脉，为手术提供方便；(5)供心取下后放入保存液中应轻轻挤压心脏，将心腔内残余血液挤出以免形成血栓；(6)修整供心时应尽可能在镜下游离升主动脉和肺动脉，切忌损伤主肺动脉，应剪去分叉部，保留肺动脉主干，剪去有碍手术的脂肪组织。
3.受体准备 (1)把大鼠肠管取出后用温生理盐水纱布包裹，术中滴1～2ml温盐水于其表面，减少体液丢失；(2)后腔静脉和腹主动脉彼此不游离开，但应将2条血管一块游离出来，游离时用钝性剥离，避免损伤血管，去除部分血管外的结缔组织，留下部分用于牵拉血管。(3)用微型无创血管夹阻断肾动脉与髂动脉分叉处之间的腹主动脉和后腔静脉，阻断一定要确切，后腔静脉切口于腹主动脉切口前，切口边缘要整齐。
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4.心脏异位移植的术式 (1)供心用冷湿纱布包裹置于受体腹腔左侧，先吻合升主动脉与腹主动脉，缝合时应用8/0丝线从切口5点处开始吻合，大约缝合8～10针，连续外翻缝合；(2)吻合肺动脉和后腔静脉时一定要轻柔，以免撕破血管壁；(3)缝合完毕后应同时开放上下阻断夹，如有出血可压迫止血，如出血量超过1～2ml受体大鼠一般不易存活。
5.术后处理 术后可用灯泡照射保温，观察大鼠后肢的供血情况，确定有无截瘫的发生，另外触摸腹部观察供心的搏动情况。
李温斌(北京安贞医院 心外科 100029)
许秀芳(北京安贞医院 心外科 100029)
董然(北京安贞医院 心外科 100029)
陈宝田(北京安贞医院 心外科 100029)
, 百拇医药
马海波(北京安贞医院 心外科 100029)
参考文献
1，Ono K,Lindsey ES.Improved technique of heart transplantation in rats.J Thoracic Cardiovas Surg,1969,57(2):225～229.
2，李温斌，陈宝田，石镜，等.心脏移植后急性排异反应体外模型的建立及应用研究.中国免疫学杂志，1997，13(2)：104～108.
3，李温斌，陈宝田，石镜，等.精浆免疫抑制因子抗大鼠心脏移植后急性排异反应的实验研究.首都医科大学学报，1995，16(1)：48～52., 百拇医药
李温斌 许秀芳 董然 陈宝田 马海波
摘 要 为研究心脏移植后急性排异反应及心脏缺血再灌注损伤，我们建立了大鼠异位心脏移植模型。Wistar大鼠心脏的升主动脉及主肺动脉分别与SD大鼠的腹主动脉和后腔静脉做端侧吻合，将Wistar大鼠心脏移植于SD大鼠腹腔内。80例大鼠异位心脏移植模型成功建立，手术成功率90.0%。我们从以下方面作了总结：1.麻醉；2.供心的摘取及保存；3.受体的准备；4.心脏移植；5.术后处理。
关键词：大鼠；异位心脏移植模型
大鼠异位心脏移植模型是Ono[1]于1964年率先创立的。该模型不断被改进，广泛应用于心脏移植后急性排异反应及心脏缺血再灌注损伤等研究。我们自1992年建立该模型，现已应用于多项有关心脏移植的急性排异反应的研究[2～3]，共建立该模型80例。现将我们建立模型的初步体会总结如下。
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材料与方法
一、实验用药的配制 2%戊巴比妥钠：用戊巴比妥钠2g加100ml生理盐水溶解。1：100肝素钠：取1支肝素钠(12500u)溶于125ml生理盐水中，低温保存。
二、实验动物 受体大鼠：SD系，130～180g，北京医科大学实验动物部提供。供体大鼠：Wistar系，110～160g，北京医科大学实验动物部提供。
三、心脏移植动物模型的制备 1.麻醉 供受体术前均用2%戊巴比妥钠腹腔注射，45mg/kg。2.供心摘取 麻醉满意后，将Wistar大鼠固定于鼠台，胸腹部酒精消毒，打开腹腔，经肝静脉或下腔静脉注入1：100肝素盐水(3～5ml/kg)，供体肝素化后“U”字形打开胸腔，剪去胸腺，剪断前后腔静脉，同时用冰屑包埋心脏局部降温，经升主动脉弓部灌注0～4℃安贞Ⅱ号心脏停跳液5～10ml，待心脏完全停跳，呈灰白色，柔软状为止。游离并尽可能远地剪断升主动脉及主肺动脉，游离右前腔静脉并“0”号丝线结扎，将左前腔静脉、后腔静脉、左右肺静脉一起结扎，于结扎远端剪断，取出心脏置0～4℃安贞Ⅱ号停跳液中保存备用。取供心时间为5min左右。3.受体准备及心脏移植 SD大鼠麻醉后固定于鼠台，消毒腹部后，取正中切口，暴露并游离腹主动脉及后腔静脉，(二者不做分离)，根据需要决定是否结扎双侧腰静脉，游离长度约0.5～1cm，用微型无创血管夹夹住上下两端，置手术显微镜下做腹主动脉及后腔静脉侧切口，开始心脏移植(图1)。将供心的升主动脉及主肺动脉分别与受体的腹主动脉和后腔静脉端侧吻合(8/0丝线连续吻合)。吻合完毕后放开阻断夹即见冠脉充血，30秒至1min左右心脏复跳。检查无出血、心跳规律、有力即可关腹，用“0”号丝线连续缝合关腹。术后注意保温，待动物清醒后送回动物室分笼饲养，术中术后均不用抗生素。手术在洁净条件下操作。
, 百拇医药
图1 移植模型示意图
结 果
自1992年至1997年共建立了80例大鼠异位心脏移植模型，手术总时间(供心消毒开始至受体关腹为止)52±6.56min。供心总缺血时间最长40min(指供心停跳至复跳时间)。手术成功率90.0%。在不用任何抗排异反应药物情况下，供心存活时间为11.7±0.80天。
体 会
1.麻醉 麻醉剂量要合适，过量可导致大鼠死亡，量少麻醉浅，给手术造成困难，首次剂量要足够，如不足，反复给药不易掌握麻醉效果，给手术造成困难甚至致大鼠死亡；我们最初给2%戊巴比妥钠，2ml/kg，效果不佳，考虑麻醉药质量问题，换药后麻醉较好，所以要确保麻醉药不过期不失效；腹腔注射时，应注射于右下腹，避免注入腹壁肌肉，麻醉效果的判断：呼吸正常，对疼痛有轻微的反应，切腹壁时可有抬头，但躯体不动，不影响手术，心脏移植完成后大鼠基本清醒，肢体能活动，表明麻醉合适；如呼吸深慢意味着麻醉过深；如呼吸浅快、大鼠躁动表明麻醉过浅。
, 百拇医药
2.供心摘取及保存 摘取心脏时注意：(1)供体肝素化。经肝静脉或下腔静脉注射肝素盐水时应缓慢注射，注射太快会造成心脏过胀损伤心肌；(2)开胸后应立即剪断后腔静脉放血(放血的目的是减轻心脏前负荷)，并同时用冰屑置于心脏表面降温，快速剪除胸腺，充分显露升主动脉，经升主动脉根部灌注安贞Ⅱ号心脏停跳液，用镊子夹住升主动脉远端以提高灌注压；(3)前腔静脉单独结扎，结扎处离右心房3～5mm远以免损伤窦房结；(4)用眼科剪插入心包横窦尽可能远地剪断升主动脉，为手术提供方便；(5)供心取下后放入保存液中应轻轻挤压心脏，将心腔内残余血液挤出以免形成血栓；(6)修整供心时应尽可能在镜下游离升主动脉和肺动脉，切忌损伤主肺动脉，应剪去分叉部，保留肺动脉主干，剪去有碍手术的脂肪组织。
3.受体准备 (1)把大鼠肠管取出后用温生理盐水纱布包裹，术中滴1～2ml温盐水于其表面，减少体液丢失；(2)后腔静脉和腹主动脉彼此不游离开，但应将2条血管一块游离出来，游离时用钝性剥离，避免损伤血管，去除部分血管外的结缔组织，留下部分用于牵拉血管。(3)用微型无创血管夹阻断肾动脉与髂动脉分叉处之间的腹主动脉和后腔静脉，阻断一定要确切，后腔静脉切口于腹主动脉切口前，切口边缘要整齐。
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4.心脏异位移植的术式 (1)供心用冷湿纱布包裹置于受体腹腔左侧，先吻合升主动脉与腹主动脉，缝合时应用8/0丝线从切口5点处开始吻合，大约缝合8～10针，连续外翻缝合；(2)吻合肺动脉和后腔静脉时一定要轻柔，以免撕破血管壁；(3)缝合完毕后应同时开放上下阻断夹，如有出血可压迫止血，如出血量超过1～2ml受体大鼠一般不易存活。
5.术后处理 术后可用灯泡照射保温，观察大鼠后肢的供血情况，确定有无截瘫的发生，另外触摸腹部观察供心的搏动情况。
李温斌(北京安贞医院 心外科 100029)
许秀芳(北京安贞医院 心外科 100029)
董然(北京安贞医院 心外科 100029)
陈宝田(北京安贞医院 心外科 100029)
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马海波(北京安贞医院 心外科 100029)
参考文献
1，Ono K,Lindsey ES.Improved technique of heart transplantation in rats.J Thoracic Cardiovas Surg,1969,57(2):225～229.
2，李温斌，陈宝田，石镜，等.心脏移植后急性排异反应体外模型的建立及应用研究.中国免疫学杂志，1997，13(2)：104～108.
3，李温斌，陈宝田，石镜，等.精浆免疫抑制因子抗大鼠心脏移植后急性排异反应的实验研究.首都医科大学学报，1995，16(1)：48～52., 百拇医药