SCP合剂治疗血吸虫病患者前后超声影像及特异性抗体水平的变化
抗体水平的变化
李允鹤 何永康 龚唯 李石桂 骆伟
庞智 夏超明 周卫芳 胡永德
摘 要 目的:研究用SCP合剂治疗日本血吸虫病患者的效果。方法:30例血吸虫病患者服用SCP合剂前后，观察超声影像及检测血清抗体IgG和IgG4水平，以确定该合剂的临床效果。结果:经治疗后1.5～3个月，肝实质超声影像显著改善者15例；血清特异性抗体IgG水平显著上升，IgG4水平明显下降。结论:用SCP合剂治疗血吸虫病患者，其肝实质病变显著减弱，抗体应答也表明SCP合剂能诱导出明显的免疫调节作用。
关键词：日本血吸虫病；中药SCP合剂；超声影像；特异性抗体
, 百拇医药
前已报道〔1〕，日本血吸虫病患者服用SCP(鲨鱼软骨粉)合剂后1～2个月超声影像改善的有效率高达88.9%，且患者体征也有所好转。本文在以往临床应用SCP合剂取得较好效果的基础上，在湖南岳阳地区用SCP合剂治疗血吸虫患者后，观察肝实质超声影像及检测血清特异性抗体水平的变化情况，以进一步确定该合剂的临床效果。
1 材料和方法
1.1 病例 在岳阳市君山地区，选择COPT(环沉率≥3)和IHA(阳性滴度≥1∶20)检测阳性，肝脏超声影像显示网状及(或)龟背状者30例，作为血吸虫病治疗对象。其中，男20例(30～62岁)，女10例(26～56岁)，均排除了肝炎等非血吸虫病性疾病。
1.2 治疗方法 SCP合剂的用量和疗程，按前文〔1,2〕介绍方法。
1.3 肝、脾B超检查 患者口服SCP合剂前及后1.5个月和3个月分别检查肝、脾大小，脾厚度及肝实质病变情况。B超仪：日本岛津SDL-32C型，探头频率3.5MHz。
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1.4 血清特异性抗体检测 30例患者服药前及后1.5个月和3个月分别抽血，分离血清，保存于-20℃，用于检测IgG和IgG4。
1.4.1 主要试剂 日本血吸虫卵源性47kDd蛋白分子抗原(SjR47)为我室自制。辣根过氧化物酶标记物：羊抗人IgG购自上海华美试剂公司；IgG4由中国预防医学科学院寄生虫病研究所裘丽姝教授惠赠。抗原包被液：0.1mol/L、pH9.5碳酸缓冲液。底物用邻苯二胺(OPD)。底物溶液：pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。洗涤液：pH7.2PBS(含0.05%Tween-20)。
1.4.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) SjR47分子抗原的包被浓度为10μg/ml，反应板每孔100μl包被，4℃过夜。充分洗涤后加1%BSA100μl/孔，37℃封闭1h，洗涤后加1∶40患者稀释血清，37℃1h，同上洗涤后，加1∶500稀释的酶标记IgG(或1∶100酶标记IgG4)100μl/孔，37℃40min，同上处理，加OPD底物系统显色，用2mol/L H2SO4终止反应后，在酶标仪上读取OD值。
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2 结果
2.1 患者口服SCP合剂前后肝、脾大小及其厚度的B超检查结果 治疗前左叶肝大小和斜径(mm)分别为60.67±9.94和123.00±5.76，治疗后1.5个月和3个月时，分别为60.50±10.68和121.37±5.78及58.03±9.15和120.27±6.50；治疗前脾厚度和垂直径分别为35.27±9.38和65.97±24.33，治疗后1.5个月和3个月时，分别为31.77±8.72和59.37±27.00及32.40±8.75和56.20±25.18。治疗前后比较，虽均有下降趋势，但均无显著性差异(均P>0.05)。
2.2 患者口服SCP合剂前后肝脏实质回声的超声影像变化情况 30例患者服用SCP合剂1.5个月和3个月时肝脏实质超声影像改善(由治疗前网状、龟背状转为光点状)者分别有7例和15例，有效率为23.3%和50.0%。
2.3 患者口服SCP合剂前后血清抗体IgG及IgG4水平的变化情况 30例患者治疗前及治疗后1.5个月和3个月的IgG水平(x±s)分别为0.15±0.10、0.31±0.23和0.16±0.14，治疗前与治疗后1.5个月之间有非常显著性差异(P<0.01)；IgG4水平(x±s)分别为0.13±0.08、0.12±0.08和0.09±0.08，治疗前与治疗后3个月之间有显著性差异(P<0.05)。
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3 讨论
本文检测结果表明，30例血吸虫病患者服用SCP合剂后1.5个月和3个月的肝脏实质回声减弱，超声影像改善的有效率分别为23.3%(7例)和50%(15例)；治疗后3个月时，其肝实质病变的改善，与治疗前比较，有非常显著性差异(P<0.01)；治疗后1.5个月时，虽肝实质超声影像改善的有效率与治疗前比较，无显著性差异(P>0.05)，但其肝实质回声减弱，超声影像的好转情况已很清楚(7例网状转为光点状)。前文报道〔3〕，SCP能诱导感染小鼠产生明显的抗肝脏血吸虫性纤维化作用，且有抗血吸虫卵肉芽肿病变的效应，其机制与细胞免疫应答密切相关。本文研究结果进一步证明SCP合剂对血吸虫病患者肝脏病变具有明显的免疫调节效应。
患者口服SCP合剂前后血清特异性抗体检测结果表明，IgG水平在治疗后1.5个月时(0.31±0.23)非常显著(P<0.01)高于治疗前(0.15±0.10)，3个月时已下降；IgG4水平在治疗后3个月时(0.09±0.08)明显(P<0.05)低于治疗前(0.13±0.08)，1.5个月时无显著性差异。前文〔3〕已报道，血吸虫病患者服用SCP合剂后既能诱导细胞免疫，又能增强体液免疫，IgG和IgG1水平显著升高。特异性抗体IgG1在日本血吸虫感染宿主肝内虫卵肉芽肿的发病机制中起着抗体封闭的免疫调节作用〔4〕。血吸虫卵原性抗原的同型抗体，即短期抗体IgG4水平下降，可作为考核疗效的指标，也是对再感染具有抵抗力的反映〔5,6〕。曼氏血吸虫易感人群呈现高水平IgG4，而有抵抗力的人群，则出现高水平IgG1〔7〕。本实验患者口服SCP合剂后1.5个月时，血清抗体IgG水平(其中也含IgG1)显著上升，而在治疗后3个月时，IgG4水平明显下降，表明SCP合剂能诱导血吸虫病患者产生明显的免疫调节作用，使患者肝内病变显著改善。本研究再次证明了SCP合剂对血吸虫病肝实质病变具有明显的临床效果。SCP合剂已经过系列实验研究〔8〕，均已证明该合剂对血吸虫性肝病变具有显著效果，其机制与细胞免疫和体液免疫紧密相关。综上所述，可以认为SCP合剂具有明显的应用价值和应用前景。
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[本研究得到复旦大学医学院(原上海医科大学)药理学教研室褚云鸿教授的帮助和支持，特此致谢]
李允鹤(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
何永康(湖南省寄生虫病防治研究所)
龚唯(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
李石桂(岳阳市君山血吸虫病防治站)
骆伟(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
庞智(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
夏超明(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
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周卫芳(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
胡永德(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
参考文献
1，陈家旭，李允鹤，骆 伟，等.鲨鱼软骨粉合剂治疗血吸虫病患者前后肝脾病变的超声影像观察.苏州医学院学报，1999，19(9)∶948～950
2，李允鹤，陈家旭，庞 智，等.中药“425”合剂诱导的抗血吸虫卵肉芽肿效应及机制研究.苏州医学院学报，1998，18(11)∶1111～1114
3，陈家旭，骆 伟，李允鹤，等.鲨鱼软骨粉合剂诱导的抗肝内血吸虫性纤维化效应的研究.中国寄生虫病防治杂志，1999，12(2)：137～139
, 百拇医药
4，刘述先.血吸虫病免疫发病机制中的几种免疫调节作用.见∶李允鹤，主编.寄生虫病免疫学及免疫诊断.南京∶江苏科学技术出版社，1991∶184～185
5，李允鹤.血清学试验在寄生虫病诊断中的价值.中国实用内科杂志，1998，18(3)∶134～136
6，Caldas IR,Correa-oliveira R,Colosimo E,et al,Susceptibility and resistance to Schistosoma mansoni reinfection: parallel cellular and isotypic immunologic assessment.Am J Trop Med Hyg,2000,62(1)∶57～64
7，Satti MZ Lind P,Vennervald BJ,et al.Specific immunoglobulin measurements related to exposure and resistance to Schistosoma mansoni infection in Sudanese canal cleaners. Clin Exp Immunol,1996,106∶45
8，李允鹤.血吸虫卵肉芽肿病变的形成机制及免疫调节作用.苏州医学院学报，1999，19(11)∶1141～1144, 百拇医药
李允鹤 何永康 龚唯 李石桂 骆伟
庞智 夏超明 周卫芳 胡永德
摘 要 目的:研究用SCP合剂治疗日本血吸虫病患者的效果。方法:30例血吸虫病患者服用SCP合剂前后，观察超声影像及检测血清抗体IgG和IgG4水平，以确定该合剂的临床效果。结果:经治疗后1.5～3个月，肝实质超声影像显著改善者15例；血清特异性抗体IgG水平显著上升，IgG4水平明显下降。结论:用SCP合剂治疗血吸虫病患者，其肝实质病变显著减弱，抗体应答也表明SCP合剂能诱导出明显的免疫调节作用。
关键词：日本血吸虫病；中药SCP合剂；超声影像；特异性抗体
, 百拇医药
前已报道〔1〕，日本血吸虫病患者服用SCP(鲨鱼软骨粉)合剂后1～2个月超声影像改善的有效率高达88.9%，且患者体征也有所好转。本文在以往临床应用SCP合剂取得较好效果的基础上，在湖南岳阳地区用SCP合剂治疗血吸虫患者后，观察肝实质超声影像及检测血清特异性抗体水平的变化情况，以进一步确定该合剂的临床效果。
1 材料和方法
1.1 病例 在岳阳市君山地区，选择COPT(环沉率≥3)和IHA(阳性滴度≥1∶20)检测阳性，肝脏超声影像显示网状及(或)龟背状者30例，作为血吸虫病治疗对象。其中，男20例(30～62岁)，女10例(26～56岁)，均排除了肝炎等非血吸虫病性疾病。
1.2 治疗方法 SCP合剂的用量和疗程，按前文〔1,2〕介绍方法。
1.3 肝、脾B超检查 患者口服SCP合剂前及后1.5个月和3个月分别检查肝、脾大小，脾厚度及肝实质病变情况。B超仪：日本岛津SDL-32C型，探头频率3.5MHz。
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1.4 血清特异性抗体检测 30例患者服药前及后1.5个月和3个月分别抽血，分离血清，保存于-20℃，用于检测IgG和IgG4。
1.4.1 主要试剂 日本血吸虫卵源性47kDd蛋白分子抗原(SjR47)为我室自制。辣根过氧化物酶标记物：羊抗人IgG购自上海华美试剂公司；IgG4由中国预防医学科学院寄生虫病研究所裘丽姝教授惠赠。抗原包被液：0.1mol/L、pH9.5碳酸缓冲液。底物用邻苯二胺(OPD)。底物溶液：pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。洗涤液：pH7.2PBS(含0.05%Tween-20)。
1.4.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) SjR47分子抗原的包被浓度为10μg/ml，反应板每孔100μl包被，4℃过夜。充分洗涤后加1%BSA100μl/孔，37℃封闭1h，洗涤后加1∶40患者稀释血清，37℃1h，同上洗涤后，加1∶500稀释的酶标记IgG(或1∶100酶标记IgG4)100μl/孔，37℃40min，同上处理，加OPD底物系统显色，用2mol/L H2SO4终止反应后，在酶标仪上读取OD值。
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2 结果
2.1 患者口服SCP合剂前后肝、脾大小及其厚度的B超检查结果 治疗前左叶肝大小和斜径(mm)分别为60.67±9.94和123.00±5.76，治疗后1.5个月和3个月时，分别为60.50±10.68和121.37±5.78及58.03±9.15和120.27±6.50；治疗前脾厚度和垂直径分别为35.27±9.38和65.97±24.33，治疗后1.5个月和3个月时，分别为31.77±8.72和59.37±27.00及32.40±8.75和56.20±25.18。治疗前后比较，虽均有下降趋势，但均无显著性差异(均P>0.05)。
2.2 患者口服SCP合剂前后肝脏实质回声的超声影像变化情况 30例患者服用SCP合剂1.5个月和3个月时肝脏实质超声影像改善(由治疗前网状、龟背状转为光点状)者分别有7例和15例，有效率为23.3%和50.0%。
2.3 患者口服SCP合剂前后血清抗体IgG及IgG4水平的变化情况 30例患者治疗前及治疗后1.5个月和3个月的IgG水平(x±s)分别为0.15±0.10、0.31±0.23和0.16±0.14，治疗前与治疗后1.5个月之间有非常显著性差异(P<0.01)；IgG4水平(x±s)分别为0.13±0.08、0.12±0.08和0.09±0.08，治疗前与治疗后3个月之间有显著性差异(P<0.05)。
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3 讨论
本文检测结果表明，30例血吸虫病患者服用SCP合剂后1.5个月和3个月的肝脏实质回声减弱，超声影像改善的有效率分别为23.3%(7例)和50%(15例)；治疗后3个月时，其肝实质病变的改善，与治疗前比较，有非常显著性差异(P<0.01)；治疗后1.5个月时，虽肝实质超声影像改善的有效率与治疗前比较，无显著性差异(P>0.05)，但其肝实质回声减弱，超声影像的好转情况已很清楚(7例网状转为光点状)。前文报道〔3〕，SCP能诱导感染小鼠产生明显的抗肝脏血吸虫性纤维化作用，且有抗血吸虫卵肉芽肿病变的效应，其机制与细胞免疫应答密切相关。本文研究结果进一步证明SCP合剂对血吸虫病患者肝脏病变具有明显的免疫调节效应。
患者口服SCP合剂前后血清特异性抗体检测结果表明，IgG水平在治疗后1.5个月时(0.31±0.23)非常显著(P<0.01)高于治疗前(0.15±0.10)，3个月时已下降；IgG4水平在治疗后3个月时(0.09±0.08)明显(P<0.05)低于治疗前(0.13±0.08)，1.5个月时无显著性差异。前文〔3〕已报道，血吸虫病患者服用SCP合剂后既能诱导细胞免疫，又能增强体液免疫，IgG和IgG1水平显著升高。特异性抗体IgG1在日本血吸虫感染宿主肝内虫卵肉芽肿的发病机制中起着抗体封闭的免疫调节作用〔4〕。血吸虫卵原性抗原的同型抗体，即短期抗体IgG4水平下降，可作为考核疗效的指标，也是对再感染具有抵抗力的反映〔5,6〕。曼氏血吸虫易感人群呈现高水平IgG4，而有抵抗力的人群，则出现高水平IgG1〔7〕。本实验患者口服SCP合剂后1.5个月时，血清抗体IgG水平(其中也含IgG1)显著上升，而在治疗后3个月时，IgG4水平明显下降，表明SCP合剂能诱导血吸虫病患者产生明显的免疫调节作用，使患者肝内病变显著改善。本研究再次证明了SCP合剂对血吸虫病肝实质病变具有明显的临床效果。SCP合剂已经过系列实验研究〔8〕，均已证明该合剂对血吸虫性肝病变具有显著效果，其机制与细胞免疫和体液免疫紧密相关。综上所述，可以认为SCP合剂具有明显的应用价值和应用前景。
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[本研究得到复旦大学医学院(原上海医科大学)药理学教研室褚云鸿教授的帮助和支持，特此致谢]
李允鹤(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
何永康(湖南省寄生虫病防治研究所)
龚唯(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
李石桂(岳阳市君山血吸虫病防治站)
骆伟(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
庞智(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
夏超明(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
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周卫芳(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
胡永德(苏州大学基础医学部寄生虫学教研室，苏州，215007)
参考文献
1，陈家旭，李允鹤，骆 伟，等.鲨鱼软骨粉合剂治疗血吸虫病患者前后肝脾病变的超声影像观察.苏州医学院学报，1999，19(9)∶948～950
2，李允鹤，陈家旭，庞 智，等.中药“425”合剂诱导的抗血吸虫卵肉芽肿效应及机制研究.苏州医学院学报，1998，18(11)∶1111～1114
3，陈家旭，骆 伟，李允鹤，等.鲨鱼软骨粉合剂诱导的抗肝内血吸虫性纤维化效应的研究.中国寄生虫病防治杂志，1999，12(2)：137～139
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4，刘述先.血吸虫病免疫发病机制中的几种免疫调节作用.见∶李允鹤，主编.寄生虫病免疫学及免疫诊断.南京∶江苏科学技术出版社，1991∶184～185
5，李允鹤.血清学试验在寄生虫病诊断中的价值.中国实用内科杂志，1998，18(3)∶134～136
6，Caldas IR,Correa-oliveira R,Colosimo E,et al,Susceptibility and resistance to Schistosoma mansoni reinfection: parallel cellular and isotypic immunologic assessment.Am J Trop Med Hyg,2000,62(1)∶57～64
7，Satti MZ Lind P,Vennervald BJ,et al.Specific immunoglobulin measurements related to exposure and resistance to Schistosoma mansoni infection in Sudanese canal cleaners. Clin Exp Immunol,1996,106∶45
8，李允鹤.血吸虫卵肉芽肿病变的形成机制及免疫调节作用.苏州医学院学报，1999，19(11)∶1141～1144, 百拇医药