普萘洛尔(心得安)对灰鼠噪声性聋的影响
董明敏 王建波 汤文学 Shivapuja-BG
摘要 目的：研究噪声和β受体阻滞剂普萘洛尔(心得安)对灰鼠耳蜗复合动作电位和耳蜗血流的影响。方法：使用1/2倍频程窄带,噪声其中心频率1 500 Hz，强度115 dB SPL，持续刺激90分钟。观察不同浓度普萘洛尔对灰鼠耳蜗复合动作电位和耳蜗血流的影响。结果：在噪声刺激期腹膜内注射不同浓度普萘洛尔，对耳蜗血流和噪声暂时性阈移无影响。结论：耳蜗微循环中可能无β受体，β受体阻滞剂普萘洛尔对噪声性耳聋无保护作用。
关键词： 噪声；普萘洛尔(心得安)；β受体；复合动作电位；耳蜗血流
在噪声性聋的发展过程中，耳蜗的氧运输和血流供应改变起着重要作用[1]。尽管噪声损伤后对耳蜗血流的影响已有广泛的研究，但仍有些不一致的观点。一些研究表明噪声能减少耳蜗血流，从而减少柯替器氧供，导致毛细胞损伤。相反Prazmal[2]等提出高强度噪声导致内耳血流加快。1995年，Shivapuia[3]研究了α1肾上腺素能受体阻滞剂Prazosin对灰鼠听神经复合动作电位的影响。Carrasco[4]研究表明耳蜗微循环中存在肾上腺素能受体，在α1和α2受体分布上以α2受体占优势，但对是否存在β受体尚未见报道。为此，我们研究β肾上腺素能受体阻滞剂普萘洛尔(心得安)对噪声性聋耳蜗复合动作电位和耳蜗血流的影响。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物及手术方法：选用耳廓反射正常，体重在500～650 g的健康灰鼠16只，雌雄兼用。使用Ketamin(氯胺酮，2.5 mg/kg)麻醉，皮下注射阿托品0.04 mg/kg。热毯保温，使体温维持在37.0℃，用直肠探针测定。首先行气管切开，然后采用股动脉插管方法以测定血压。在显微镜下切开暴露听泡，将聚四氟乙烯(Teflon)绝缘银球电极固定在圆窗处，近鼓膜处使用耳印膜材料包裹的耳机，以减少声音的损失。实验动物腹膜内注射心得安，分三组：低浓度组(0.1 mg/kg) ，中浓度组(0.5 mg/kg)，高浓度组(1.0 mg/kg)。低浓度用生理盐水溶解稀释；高浓度心得安用20%聚乙二醇(PEG)溶解。对照组使用生理盐水或20%PEG溶液，生理盐水或20%PEG溶液均不引起生理变化。
1.2 声刺激：短纯音(tone burst)刺激(刺激上升时间5 ms，时程为15 ms)，刺激频率为1、4和8 kHz。声刺激发生器机型为Tucker-Davis,AP2。在实验前使用微电极(Etymotic,Model ER-7c)校准刺激级。开始刺激阶段将声刺激调到耳蜗微音器最小值。带宽为1/2 倍频程的窄带噪声，其中心频率为1.5 kHz，强度为115 dB SPL持续90 min。
, 百拇医药
1.3 数据记录：圆窗外置电极连接放大器(GRASS,Model P511H,50X增益,30 Hz～30 kHz 带通)、谱分析仪(Model TMS320C25)和平均N1应答值。放大器外端连于示波器(Hewlett packard,model＃54602B)。平均波形储存计算机中作上限分析。平均256个灰度。每个灰度开始刺激时自然反应15秒。使用1、4和8 kHz短纯音来测定动作电位振幅。激光多普勒流速计探头与耳蜗底转直贴管壁测定耳蜗血流。两组分别在给药后即刻、10 min、1 h、2 h、3 h、4 h进行测试。实验组和对照组分别接受三种频率即1、4和8 kHz，不同强度(20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80 dB SPL)的刺激，记录并计算出在三种频率不同强度刺激下获得的动作电位的振幅的平均值。
1.4 统计学处理：用SAS统计软件包进行统计学分析。
2 结果
, http://www.100md.com
实验组和对照组的灰鼠在强噪声作用后，复合动作电位振幅随时间的推移均呈减小的趋势，但经统计学处理后无显著性差异(P>0.05)；实验组和对照组耳蜗血流量在强噪声作用后随时间的推移无明显变化，统计学处理后无显著性差异(P>0.05)。其结果见表4。
表1 频率为1 kHz时各组的不同时间动作电位平均振幅的比较(x±s，dB SPL)*
组别
例数
给药后时间
即刻
10 min
1 h
2 h
, 百拇医药
3 h
4 h
对照组
4
18.59±20.04
19.13±19.98
17.56±18.68
16.59±17.24
15.38±16.51
14.30±15.38
低浓度组
4
, 百拇医药
17.56±18.32
21.56±20.01
18.64±19.21
17.49±18.56
16.56±17.04
15.09±16.09
中浓度组
4
16.58±19.64
20.25±21.76
17.98±18.02
, http://www.100md.com 16.84±17.31
14.98±15.26
13.25±14.58
高浓度组
4
19.21±20.01
19.98±20.15
18.36±19.51
18.01±19.46
15.97±16.34
14.34±15.06
*各浓度与对照组不同时间动作电位平均振幅无显著性差异(P>0.05)表2 频率为4 kHz时各组的不同时间动作电位平均振幅的比较(x±s，dB SPL)*
, http://www.100md.com
组别
例数
给药后时间
即刻
10 min
1 h
2 h
3 h
4 h
对照组
4
12.31±13.02
11.79±12.07
, http://www.100md.com
10.16±11.18
9.89±1.06
8.68±9.34
7.34±8.16
低浓度组
4
13.05±14.00
12.04±16.56
12.56±13.06
11.25±12.35
9.26±10.23
8.14±9.06
, http://www.100md.com
中浓度组
4
13.28±14.26
11.23±11.98
9.97±10.08
8.99±10.01
8.16±9.24
9.26±10.18
高浓度组
4
12.46±13.18
12.34±13.05
, 百拇医药
10.65±11.84
9.19±10.67
9.19±10.67
6.79±7.46
*各浓度与对照组不同时间动作电位平均振幅无显著性差异(P>0.05)表3 频率为8 kHz时各组的不同时间动作电位平均振幅的比较(x±s，dB SPL)*
组别
例数
给药后时间
即刻
10 min
, http://www.100md.com
1 h
2 h
3 h
4 h
对照组
4
11.27±11.82
10.63±10.01
9.44±9.00
9.06±9.22
8.85±8.72
7.80±7.96
, 百拇医药
低浓度组
4
10.89±9.42
9.52±10.32
9.85±9.75
8.93±7.07
10.06±10.17
10.50±10.09
中浓度组
4
13.85±15.24
14.31±15.43
, 百拇医药
12.53±13.61
8.04±9.08
7.63±8.97
9.75±10.55
高浓度组
4
11.51±12.33
10.45±10.88
7.91±8.13
10.14±11.54
5.15±7.23
9.17±7.6
, 百拇医药
*各浓度与对照组不同时间动作电位平均振幅无显著性差异(P>0.05)表4 两组在不同时间的耳蜗平均血流比较(x±s)*
分组
例数
给药后时间
即刻
10 min
1 h
2 h
实验组
4
58.70±7.59
, http://www.100md.com 57.51±2.84
55.77±4.90
58.06±3.82
对照组
4
49.68±9.22
58.41±6.27
56.19±8.14
57.14±5.19
*两组比较无显著性差异(P>0.05)
3 讨论
1998年Miller[5]报道了内耳微循环可能的调控机理。噪声暴露可损坏耳蜗内的微循环，导致耳蜗缺血缺氧，造成毛细胞和螺旋器的退行性变。肾上腺素能受体广泛分布于支配血管的神经未梢突触前膜，在血管调节中起重要作用。有学者[6]证实内耳微循环中微动脉受肾上腺素能神经支配，肾上腺素能神经有两种受体：α受体(使血管收缩)和β受体(使血管舒张)。有研究表明[4]：耳蜗微循环中，微动脉上存在α1和α2受体，并以α2受体占优势。那么耳蜗微循环是否存在β受体目前尚未见报道。普萘洛尔是β受体阻滞剂，其药理作用为阻断血管运动中枢β受体，降低外周交感神经张力而降压。阻断支配血管的肾上腺素神经突触前膜的β受体，抑制其正反馈作用，减少递质的释放。本实验发现，普萘洛尔实验组中高、中和低浓度分组与对照组比较，复合动作电位振幅和耳蜗血流量统计学处理后均无显著性差异。提示耳蜗微循环中可能无β受体，普萘洛尔对噪声暴露所致耳聋损伤无保护作用。
, 百拇医药
作者简介：董明敏(1944-)，女，浙江人，教授，博士生导师，主要从事听力学及耳鼻咽喉科临床研究。
董明敏(河南医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科 郑州 450052)
王建波(山东济宁第一人民医院耳鼻咽喉科)
汤文学(Henry Ford Hospital,Otolaryngology Research Labs,dtroit,M18202,USA)
Shivapuja-BG(Henry Ford Hospital,Otolaryngology Research Labs,dtroit,M18202,USA)
参考文献
1，Axelsson A,Borg E,Hornstrand C.Noise effects on the cochlear vasculature in normotensive and spontaneously hypertensive rats[J].Acta Otolaryngol(Stockh),1983,96;215.
, 百拇医药
2，Prazma J,Rodgers GK,Pillsbury HC.Cochlear blood flow.Effect of noise[J].Arch Otolaryngol.1983,109:611.
3，Shivapuja BG.Alphal-adrenergic receptor antagonist blocks acute cocaine action on the compound action potential of auditory nerve in the chinchilla[J].Drug Alcohol Depend,1995,40:43.
4，Carrasco VN,Prazma J,Faber JE,et al.Cochlear microcirculation[J].Arch Otolryngol Head Neck Surg,1990,116:411.
5，Miller JM,Dengerink H.Control of inner ear blood flow[J].Am J Otolaryngol,1998,9:302.
6，Spendlin H.Autonomic innervation of the inner ear[J].Ann Otolaryngol Rhinol Laryngol,1981,27:1., 百拇医药
摘要 目的：研究噪声和β受体阻滞剂普萘洛尔(心得安)对灰鼠耳蜗复合动作电位和耳蜗血流的影响。方法：使用1/2倍频程窄带,噪声其中心频率1 500 Hz，强度115 dB SPL，持续刺激90分钟。观察不同浓度普萘洛尔对灰鼠耳蜗复合动作电位和耳蜗血流的影响。结果：在噪声刺激期腹膜内注射不同浓度普萘洛尔，对耳蜗血流和噪声暂时性阈移无影响。结论：耳蜗微循环中可能无β受体，β受体阻滞剂普萘洛尔对噪声性耳聋无保护作用。
关键词： 噪声；普萘洛尔(心得安)；β受体；复合动作电位；耳蜗血流
在噪声性聋的发展过程中，耳蜗的氧运输和血流供应改变起着重要作用[1]。尽管噪声损伤后对耳蜗血流的影响已有广泛的研究，但仍有些不一致的观点。一些研究表明噪声能减少耳蜗血流，从而减少柯替器氧供，导致毛细胞损伤。相反Prazmal[2]等提出高强度噪声导致内耳血流加快。1995年，Shivapuia[3]研究了α1肾上腺素能受体阻滞剂Prazosin对灰鼠听神经复合动作电位的影响。Carrasco[4]研究表明耳蜗微循环中存在肾上腺素能受体，在α1和α2受体分布上以α2受体占优势，但对是否存在β受体尚未见报道。为此，我们研究β肾上腺素能受体阻滞剂普萘洛尔(心得安)对噪声性聋耳蜗复合动作电位和耳蜗血流的影响。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物及手术方法：选用耳廓反射正常，体重在500～650 g的健康灰鼠16只，雌雄兼用。使用Ketamin(氯胺酮，2.5 mg/kg)麻醉，皮下注射阿托品0.04 mg/kg。热毯保温，使体温维持在37.0℃，用直肠探针测定。首先行气管切开，然后采用股动脉插管方法以测定血压。在显微镜下切开暴露听泡，将聚四氟乙烯(Teflon)绝缘银球电极固定在圆窗处，近鼓膜处使用耳印膜材料包裹的耳机，以减少声音的损失。实验动物腹膜内注射心得安，分三组：低浓度组(0.1 mg/kg) ，中浓度组(0.5 mg/kg)，高浓度组(1.0 mg/kg)。低浓度用生理盐水溶解稀释；高浓度心得安用20%聚乙二醇(PEG)溶解。对照组使用生理盐水或20%PEG溶液，生理盐水或20%PEG溶液均不引起生理变化。
1.2 声刺激：短纯音(tone burst)刺激(刺激上升时间5 ms，时程为15 ms)，刺激频率为1、4和8 kHz。声刺激发生器机型为Tucker-Davis,AP2。在实验前使用微电极(Etymotic,Model ER-7c)校准刺激级。开始刺激阶段将声刺激调到耳蜗微音器最小值。带宽为1/2 倍频程的窄带噪声，其中心频率为1.5 kHz，强度为115 dB SPL持续90 min。
, 百拇医药
1.3 数据记录：圆窗外置电极连接放大器(GRASS,Model P511H,50X增益,30 Hz～30 kHz 带通)、谱分析仪(Model TMS320C25)和平均N1应答值。放大器外端连于示波器(Hewlett packard,model＃54602B)。平均波形储存计算机中作上限分析。平均256个灰度。每个灰度开始刺激时自然反应15秒。使用1、4和8 kHz短纯音来测定动作电位振幅。激光多普勒流速计探头与耳蜗底转直贴管壁测定耳蜗血流。两组分别在给药后即刻、10 min、1 h、2 h、3 h、4 h进行测试。实验组和对照组分别接受三种频率即1、4和8 kHz，不同强度(20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80 dB SPL)的刺激，记录并计算出在三种频率不同强度刺激下获得的动作电位的振幅的平均值。
1.4 统计学处理：用SAS统计软件包进行统计学分析。
2 结果
, http://www.100md.com
实验组和对照组的灰鼠在强噪声作用后，复合动作电位振幅随时间的推移均呈减小的趋势，但经统计学处理后无显著性差异(P>0.05)；实验组和对照组耳蜗血流量在强噪声作用后随时间的推移无明显变化，统计学处理后无显著性差异(P>0.05)。其结果见表4。
表1 频率为1 kHz时各组的不同时间动作电位平均振幅的比较(x±s，dB SPL)*
组别
例数
给药后时间
即刻
10 min
1 h
2 h
, 百拇医药
3 h
4 h
对照组
4
18.59±20.04
19.13±19.98
17.56±18.68
16.59±17.24
15.38±16.51
14.30±15.38
低浓度组
4
, 百拇医药
17.56±18.32
21.56±20.01
18.64±19.21
17.49±18.56
16.56±17.04
15.09±16.09
中浓度组
4
16.58±19.64
20.25±21.76
17.98±18.02
, http://www.100md.com 16.84±17.31
14.98±15.26
13.25±14.58
高浓度组
4
19.21±20.01
19.98±20.15
18.36±19.51
18.01±19.46
15.97±16.34
14.34±15.06
*各浓度与对照组不同时间动作电位平均振幅无显著性差异(P>0.05)表2 频率为4 kHz时各组的不同时间动作电位平均振幅的比较(x±s，dB SPL)*
, http://www.100md.com
组别
例数
给药后时间
即刻
10 min
1 h
2 h
3 h
4 h
对照组
4
12.31±13.02
11.79±12.07
, http://www.100md.com
10.16±11.18
9.89±1.06
8.68±9.34
7.34±8.16
低浓度组
4
13.05±14.00
12.04±16.56
12.56±13.06
11.25±12.35
9.26±10.23
8.14±9.06
, http://www.100md.com
中浓度组
4
13.28±14.26
11.23±11.98
9.97±10.08
8.99±10.01
8.16±9.24
9.26±10.18
高浓度组
4
12.46±13.18
12.34±13.05
, 百拇医药
10.65±11.84
9.19±10.67
9.19±10.67
6.79±7.46
*各浓度与对照组不同时间动作电位平均振幅无显著性差异(P>0.05)表3 频率为8 kHz时各组的不同时间动作电位平均振幅的比较(x±s，dB SPL)*
组别
例数
给药后时间
即刻
10 min
, http://www.100md.com
1 h
2 h
3 h
4 h
对照组
4
11.27±11.82
10.63±10.01
9.44±9.00
9.06±9.22
8.85±8.72
7.80±7.96
, 百拇医药
低浓度组
4
10.89±9.42
9.52±10.32
9.85±9.75
8.93±7.07
10.06±10.17
10.50±10.09
中浓度组
4
13.85±15.24
14.31±15.43
, 百拇医药
12.53±13.61
8.04±9.08
7.63±8.97
9.75±10.55
高浓度组
4
11.51±12.33
10.45±10.88
7.91±8.13
10.14±11.54
5.15±7.23
9.17±7.6
, 百拇医药
*各浓度与对照组不同时间动作电位平均振幅无显著性差异(P>0.05)表4 两组在不同时间的耳蜗平均血流比较(x±s)*
分组
例数
给药后时间
即刻
10 min
1 h
2 h
实验组
4
58.70±7.59
, http://www.100md.com 57.51±2.84
55.77±4.90
58.06±3.82
对照组
4
49.68±9.22
58.41±6.27
56.19±8.14
57.14±5.19
*两组比较无显著性差异(P>0.05)
3 讨论
1998年Miller[5]报道了内耳微循环可能的调控机理。噪声暴露可损坏耳蜗内的微循环，导致耳蜗缺血缺氧，造成毛细胞和螺旋器的退行性变。肾上腺素能受体广泛分布于支配血管的神经未梢突触前膜，在血管调节中起重要作用。有学者[6]证实内耳微循环中微动脉受肾上腺素能神经支配，肾上腺素能神经有两种受体：α受体(使血管收缩)和β受体(使血管舒张)。有研究表明[4]：耳蜗微循环中，微动脉上存在α1和α2受体，并以α2受体占优势。那么耳蜗微循环是否存在β受体目前尚未见报道。普萘洛尔是β受体阻滞剂，其药理作用为阻断血管运动中枢β受体，降低外周交感神经张力而降压。阻断支配血管的肾上腺素神经突触前膜的β受体，抑制其正反馈作用，减少递质的释放。本实验发现，普萘洛尔实验组中高、中和低浓度分组与对照组比较，复合动作电位振幅和耳蜗血流量统计学处理后均无显著性差异。提示耳蜗微循环中可能无β受体，普萘洛尔对噪声暴露所致耳聋损伤无保护作用。
, 百拇医药
作者简介：董明敏(1944-)，女，浙江人，教授，博士生导师，主要从事听力学及耳鼻咽喉科临床研究。
董明敏(河南医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科 郑州 450052)
王建波(山东济宁第一人民医院耳鼻咽喉科)
汤文学(Henry Ford Hospital,Otolaryngology Research Labs,dtroit,M18202,USA)
Shivapuja-BG(Henry Ford Hospital,Otolaryngology Research Labs,dtroit,M18202,USA)
参考文献
1，Axelsson A,Borg E,Hornstrand C.Noise effects on the cochlear vasculature in normotensive and spontaneously hypertensive rats[J].Acta Otolaryngol(Stockh),1983,96;215.
, 百拇医药
2，Prazma J,Rodgers GK,Pillsbury HC.Cochlear blood flow.Effect of noise[J].Arch Otolaryngol.1983,109:611.
3，Shivapuja BG.Alphal-adrenergic receptor antagonist blocks acute cocaine action on the compound action potential of auditory nerve in the chinchilla[J].Drug Alcohol Depend,1995,40:43.
4，Carrasco VN,Prazma J,Faber JE,et al.Cochlear microcirculation[J].Arch Otolryngol Head Neck Surg,1990,116:411.
5，Miller JM,Dengerink H.Control of inner ear blood flow[J].Am J Otolaryngol,1998,9:302.
6，Spendlin H.Autonomic innervation of the inner ear[J].Ann Otolaryngol Rhinol Laryngol,1981,27:1., 百拇医药