痔科熏洗方对大鼠术后伤口愈合的实验研究
上海中医药大学附属曙光医院肛肠科(200021) 张雅明 叶伟成 杨巍 段旭东
指 导 柏连松
提 要：痔科熏洗方用于实验大鼠背部伤口，观察用药前后伤口肉芽组织中炎症介质的变化情况，并与中药洁尔阴洗液对照，结果：①术后各组肉芽组织中TNF-α含量较洁尔阴组明显降低，接近正常组(P<0.01)，而洁尔阴组无明显变化；②术后各组肉芽组织中Fn含量逐渐增高趋势，术后第7天熏洗组Fn含量明显高于洁尔阴组与模型组大鼠(P<0.05)；③术后伤口肉芽组织中MDA含量逐渐降低，说明氧自由基引起的创面损伤逐渐减轻，术后第5天模型组MDA含量较其他组为高(P<0.01)，第7天熏洗组MDA含量明显低于洁尔阴组(P<0.05)而各组SOD、GSH-PX无明显变化。说明痔科熏洗方抗炎、促愈合作用与调节肉芽组织中炎症因子、氧自由基含量有关。
关键词：痔科熏洗方；大鼠；伤口；肛肠病
, http://www.100md.com
痔科熏洗方是柏连松教授集数十年临床经验拟制而成，由虎杖、蒲公英、黄柏、苦参等中药组成，具有清热利湿、活血化瘀的功效，经我院多年临床运用于肛瘘术后病人，证实该方具有很好的加速伤口愈合、消除伤口不适症状的作用，优于目前临床常用的一些药物。从许多文献报道中可以看出，影响术后伤口愈合的因素众多，其中与炎症因子和氧自由基关系密切。本文旨在通过痔科熏洗方对背部开放伤口的实验大鼠的治疗作用，观察伤口肉芽组织增生与炎症因子、氧自由基的变化，对熏洗方的疗效机理进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物 清洁级SD大鼠均为雄性，8～10周龄，体重200～240g，由上海中医药大学动物中心提供。
1.2 模型制作 动物模型参照王亚平和李秀兰法予以改良[1，2]
1.2.1 全层皮肤缺损开放模型：术前2天于鼠背部手术部位用8%硫化钠脱毛，术时腹腔注射氯氨酮15mg/100g麻醉，手术部位用新洁尔灭消毒，鼠背部正中偏上部位作一直径2cm左右的圆形切口，发除皮肤全层及皮下浅筋膜直至肌肉，止血，无菌纱布覆盖，橡皮胶包扎，单笼饲养，正常饲料和饮水。
, 百拇医药
1.2.2 全层皮肤缺损开放感染模型：在开放模型大鼠的创面上加粪液1ml(人新鲜粪便10g，加生理盐水5ml，混匀，离心，取上清液，现配现用)于棉球上，覆盖创面，其上纱布覆盖，橡皮胶固定，48h后去除覆盖物，见伤口有脓水、有粪臭味者为造模成功。
1.3 分组及处理
1.3.1 正常愈合组：取全层皮肤缺损开放模型大鼠16只，每日用1:5000呋喃西林清洁创面，无菌纱布覆盖，橡皮胶包扎，每日换药1次。
1.3.2 感染模型组：取全层皮肤缺损开放感染模型大鼠16只，暴露创面不作任何处理。
1.3.3 感染模型熏洗方治疗组(简称熏洗组)、感染模型洁尔阴缺损开放感染模型大鼠16只，分别用熏洗方、洁尔阴洗液浸浴治疗，药缸置入40℃恒温水箱内保持温度。
1.4 观测指标
, http://www.100md.com
1.4.1 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)测定：用ELISA法，药盒由法国ImmunoTECH公司提供，测定第5、7天肉芽组织中的含量。
1.4.2 纤维连接蛋白(Fn)的测定：用化学比色法，由BeckermanCX-4型自动生化分析仪测定术后第5、7天肉芽组织中Fn含量。
1.4.3 氧自由基(包括SOD、GSH-PX、MDA)的测定：药盒由南京建成生物工程研究所提供，分别测定术后第5、7天含量。
2 结果
2.1 术后第5、7天伤口肉芽组织中TNF-α含量的比较 见表1。
表1 术后第5、7天伤口肉芽组织中TNF-α含量比较
组别
, 百拇医药
例数
TNF-α(pg/g组织)
第5天
第7天
正常愈合组
8
6032±2309★
2615±1337☆
模型对照组
8
9807±2365
7822±1680
, http://www.100md.com 熏洗治疗组
8
6875±1344★
3066±2026☆
洁尔阴组
8
7973±1630
7473±911
★P<0.01 VS模型对照组
☆P<0.01 VS模型对照组、洁尔阴组
2.2 术后第5、7天伤口肉芽组织中Fn含量的比较 见表2。
, 百拇医药 表2 术后第5、7天伤口肉芽组织中Fn含量比较
组别
例数
TNF-α(pg/g组织)
第5天
第7天
正常愈合组
8
532.1±181.9
848.3±198.3☆
模型对照组
8
, http://www.100md.com
419.5±112.7
195.5±63.5
熏洗治疗组
8
454.8±71.2
803.5±309.7☆
洁尔阴组
8
400.0±105.6
518.0±128.3
☆P<0.05 VS模型对照组、洁尔阴组
2.3 术后伤口第5、7天肉芽组织中氧自由基含量的比较 见表3。
, http://www.100md.com
表3 术后第5、7天伤口肉芽组织中氧自由基含量比较
组别
例数
SOD(Nu/g组织)
GSH-PX(U/g组织)
MDA(nM/g组织)
第5天
第7天
第5天
第7天
第5天
第7天
, 百拇医药
正常愈合组
8
200±97.5
218±55.6
112±45.5
660±103.6
27±8.0★
17±3.4☆
模型对照组
8
177±63.2
226±88.8
, http://www.100md.com
105±25.2
621±85.9
37±2.3
33±9.8
熏洗治疗组
8
181±79.9
261±74.1
124±39.5
683±127.6
30±3.6★
20±7.3☆
, 百拇医药
洁尔阴组
8
257±78.0
274±70.0
33±48.3
675±157.3
32±4.5★
31±9.0
★P<0.05 VS模型对照组
☆P<0.01 VS模型对照组、洁尔阴组
3 讨 论
, 百拇医药 痔科术后伤口多采取开放处理，因创伤刺激及肠内细菌所造成的伤口炎症的影响，存在着伤口愈合时间长，创面易感染、疼痛、渗液等不适。西药治疗虽对消除伤口不适症状具有良好的效果，但也有一定的副作用[3,4]，目前对加速伤口愈合还缺乏行之有效的方法[5]。中药具有良好的消除患者不适症状、加速伤口愈合的作用，熏洗法即是一种常用方法。
影响创面愈合的因素有多种，如感染、局部营养等，目前研究较多的是炎症因子与伤口修复的关系。肿瘤坏死因子TNF-α是一种分子量为17kD的多肽，主要由细菌及其内毒素激活的巨噬细胞产生，在炎症的发生、发展过程中具有重要作用。有研究表明，伤口肉芽组织中TNF-α含量高者，伤口愈合缓慢[6]。纤维连接蛋白(Fn)是一种分子量为450kD的糖蛋白，主要由微血管内皮细胞及成纤维细胞产生，它可参与细胞与细胞间、细胞与细胞外间质的连接，参与细胞的修复、运动等功能。氧自由基包括超氧阴离子(O2-)、羟自由基(OH)、单线态氧(O2)和过氧化氢(H2O2)等。主要由嗜中性粒细胞受到刺激后呼吸爆发所产生，是介导组织损伤重要毒性物质。它易与细胞结构中脂肪酸发生反应，产生丙二醛(DNA)等一系列毒性物质，破坏膜结构，导致细胞崩解、坏死[6]，从而延迟伤口愈合。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)是机体内两种重要的抗自由基酶，能消除自由在的损害，保护机体。
, 百拇医药
我们将痔科熏洗方用于实验大鼠背部伤口，随着时间的推移，肉芽组织中TNF-α呈递减趋势，术后第5天，模型组TNF-α含量明显高于其他各组，第7天熏洗组TNF-α含量明显较洁尔阴组为低，接近正常组，推测熏洗方促愈合作用与其降低伤口肉芽组织中TNF-α含量存在一定联系。同时我们发现伤口肉芽组织中Fn呈逐渐增高趋势，术后第7天熏洗组Fn含量明显高于洁尔阴组，与正常组接近。我们还观察到，Fn含量高者伤口面积小、创面肉芽组织含量高，因此可以推测，提高伤口Fn含量可能是熏洗方促进伤口愈合的作用机理之一。在实验中还观察到，伤口肉芽组织中MDA含量逐渐降低，说明自由基引起的创面损伤逐渐减轻，术后第5天，模型组MDA含量较其他组为高(P<0.01)，说明伤口氧化反应较重。第7天熏洗组MDA含量明显低于洁尔阴组(P<0.05)，可能是由于：①熏洗 方可以抑制炎症反应，减少创面炎症细胞数量，防止自由基的生成；②直接消除创面自由基，伤口中自由基含量降低，有利于伤口愈合。
参考文献
, 百拇医药
1.王亚平，等.中华烧伤整形外科杂志 1996；12(1)：45.
2.李秀兰，等.中国骨伤 1995；8(4)：10.
3.刘建民.国外医学创伤与外科基本问题分册 1991；12(3)：146.
4.谢力子，等.中国肛肠病杂志 1995；5：3.
5.聂旭光，等.国外医学创伤与外科基本问题分册 1995：16(4)：208.
6.毕涉，等主编.炎症与抗炎症药.北京：人民卫生出版社，1993：82., 百拇医药
指 导 柏连松
提 要：痔科熏洗方用于实验大鼠背部伤口，观察用药前后伤口肉芽组织中炎症介质的变化情况，并与中药洁尔阴洗液对照，结果：①术后各组肉芽组织中TNF-α含量较洁尔阴组明显降低，接近正常组(P<0.01)，而洁尔阴组无明显变化；②术后各组肉芽组织中Fn含量逐渐增高趋势，术后第7天熏洗组Fn含量明显高于洁尔阴组与模型组大鼠(P<0.05)；③术后伤口肉芽组织中MDA含量逐渐降低，说明氧自由基引起的创面损伤逐渐减轻，术后第5天模型组MDA含量较其他组为高(P<0.01)，第7天熏洗组MDA含量明显低于洁尔阴组(P<0.05)而各组SOD、GSH-PX无明显变化。说明痔科熏洗方抗炎、促愈合作用与调节肉芽组织中炎症因子、氧自由基含量有关。
关键词：痔科熏洗方；大鼠；伤口；肛肠病
, http://www.100md.com
痔科熏洗方是柏连松教授集数十年临床经验拟制而成，由虎杖、蒲公英、黄柏、苦参等中药组成，具有清热利湿、活血化瘀的功效，经我院多年临床运用于肛瘘术后病人，证实该方具有很好的加速伤口愈合、消除伤口不适症状的作用，优于目前临床常用的一些药物。从许多文献报道中可以看出，影响术后伤口愈合的因素众多，其中与炎症因子和氧自由基关系密切。本文旨在通过痔科熏洗方对背部开放伤口的实验大鼠的治疗作用，观察伤口肉芽组织增生与炎症因子、氧自由基的变化，对熏洗方的疗效机理进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物 清洁级SD大鼠均为雄性，8～10周龄，体重200～240g，由上海中医药大学动物中心提供。
1.2 模型制作 动物模型参照王亚平和李秀兰法予以改良[1，2]
1.2.1 全层皮肤缺损开放模型：术前2天于鼠背部手术部位用8%硫化钠脱毛，术时腹腔注射氯氨酮15mg/100g麻醉，手术部位用新洁尔灭消毒，鼠背部正中偏上部位作一直径2cm左右的圆形切口，发除皮肤全层及皮下浅筋膜直至肌肉，止血，无菌纱布覆盖，橡皮胶包扎，单笼饲养，正常饲料和饮水。
, 百拇医药
1.2.2 全层皮肤缺损开放感染模型：在开放模型大鼠的创面上加粪液1ml(人新鲜粪便10g，加生理盐水5ml，混匀，离心，取上清液，现配现用)于棉球上，覆盖创面，其上纱布覆盖，橡皮胶固定，48h后去除覆盖物，见伤口有脓水、有粪臭味者为造模成功。
1.3 分组及处理
1.3.1 正常愈合组：取全层皮肤缺损开放模型大鼠16只，每日用1:5000呋喃西林清洁创面，无菌纱布覆盖，橡皮胶包扎，每日换药1次。
1.3.2 感染模型组：取全层皮肤缺损开放感染模型大鼠16只，暴露创面不作任何处理。
1.3.3 感染模型熏洗方治疗组(简称熏洗组)、感染模型洁尔阴缺损开放感染模型大鼠16只，分别用熏洗方、洁尔阴洗液浸浴治疗，药缸置入40℃恒温水箱内保持温度。
1.4 观测指标
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1.4.1 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)测定：用ELISA法，药盒由法国ImmunoTECH公司提供，测定第5、7天肉芽组织中的含量。
1.4.2 纤维连接蛋白(Fn)的测定：用化学比色法，由BeckermanCX-4型自动生化分析仪测定术后第5、7天肉芽组织中Fn含量。
1.4.3 氧自由基(包括SOD、GSH-PX、MDA)的测定：药盒由南京建成生物工程研究所提供，分别测定术后第5、7天含量。
2 结果
2.1 术后第5、7天伤口肉芽组织中TNF-α含量的比较 见表1。
表1 术后第5、7天伤口肉芽组织中TNF-α含量比较
组别
, 百拇医药
例数
TNF-α(pg/g组织)
第5天
第7天
正常愈合组
8
6032±2309★
2615±1337☆
模型对照组
8
9807±2365
7822±1680
, http://www.100md.com 熏洗治疗组
8
6875±1344★
3066±2026☆
洁尔阴组
8
7973±1630
7473±911
★P<0.01 VS模型对照组
☆P<0.01 VS模型对照组、洁尔阴组
2.2 术后第5、7天伤口肉芽组织中Fn含量的比较 见表2。
, 百拇医药 表2 术后第5、7天伤口肉芽组织中Fn含量比较
组别
例数
TNF-α(pg/g组织)
第5天
第7天
正常愈合组
8
532.1±181.9
848.3±198.3☆
模型对照组
8
, http://www.100md.com
419.5±112.7
195.5±63.5
熏洗治疗组
8
454.8±71.2
803.5±309.7☆
洁尔阴组
8
400.0±105.6
518.0±128.3
☆P<0.05 VS模型对照组、洁尔阴组
2.3 术后伤口第5、7天肉芽组织中氧自由基含量的比较 见表3。
, http://www.100md.com
表3 术后第5、7天伤口肉芽组织中氧自由基含量比较
组别
例数
SOD(Nu/g组织)
GSH-PX(U/g组织)
MDA(nM/g组织)
第5天
第7天
第5天
第7天
第5天
第7天
, 百拇医药
正常愈合组
8
200±97.5
218±55.6
112±45.5
660±103.6
27±8.0★
17±3.4☆
模型对照组
8
177±63.2
226±88.8
, http://www.100md.com
105±25.2
621±85.9
37±2.3
33±9.8
熏洗治疗组
8
181±79.9
261±74.1
124±39.5
683±127.6
30±3.6★
20±7.3☆
, 百拇医药
洁尔阴组
8
257±78.0
274±70.0
33±48.3
675±157.3
32±4.5★
31±9.0
★P<0.05 VS模型对照组
☆P<0.01 VS模型对照组、洁尔阴组
3 讨 论
, 百拇医药 痔科术后伤口多采取开放处理，因创伤刺激及肠内细菌所造成的伤口炎症的影响，存在着伤口愈合时间长，创面易感染、疼痛、渗液等不适。西药治疗虽对消除伤口不适症状具有良好的效果，但也有一定的副作用[3,4]，目前对加速伤口愈合还缺乏行之有效的方法[5]。中药具有良好的消除患者不适症状、加速伤口愈合的作用，熏洗法即是一种常用方法。
影响创面愈合的因素有多种，如感染、局部营养等，目前研究较多的是炎症因子与伤口修复的关系。肿瘤坏死因子TNF-α是一种分子量为17kD的多肽，主要由细菌及其内毒素激活的巨噬细胞产生，在炎症的发生、发展过程中具有重要作用。有研究表明，伤口肉芽组织中TNF-α含量高者，伤口愈合缓慢[6]。纤维连接蛋白(Fn)是一种分子量为450kD的糖蛋白，主要由微血管内皮细胞及成纤维细胞产生，它可参与细胞与细胞间、细胞与细胞外间质的连接，参与细胞的修复、运动等功能。氧自由基包括超氧阴离子(O2-)、羟自由基(OH)、单线态氧(O2)和过氧化氢(H2O2)等。主要由嗜中性粒细胞受到刺激后呼吸爆发所产生，是介导组织损伤重要毒性物质。它易与细胞结构中脂肪酸发生反应，产生丙二醛(DNA)等一系列毒性物质，破坏膜结构，导致细胞崩解、坏死[6]，从而延迟伤口愈合。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)是机体内两种重要的抗自由基酶，能消除自由在的损害，保护机体。
, 百拇医药
我们将痔科熏洗方用于实验大鼠背部伤口，随着时间的推移，肉芽组织中TNF-α呈递减趋势，术后第5天，模型组TNF-α含量明显高于其他各组，第7天熏洗组TNF-α含量明显较洁尔阴组为低，接近正常组，推测熏洗方促愈合作用与其降低伤口肉芽组织中TNF-α含量存在一定联系。同时我们发现伤口肉芽组织中Fn呈逐渐增高趋势，术后第7天熏洗组Fn含量明显高于洁尔阴组，与正常组接近。我们还观察到，Fn含量高者伤口面积小、创面肉芽组织含量高，因此可以推测，提高伤口Fn含量可能是熏洗方促进伤口愈合的作用机理之一。在实验中还观察到，伤口肉芽组织中MDA含量逐渐降低，说明自由基引起的创面损伤逐渐减轻，术后第5天，模型组MDA含量较其他组为高(P<0.01)，说明伤口氧化反应较重。第7天熏洗组MDA含量明显低于洁尔阴组(P<0.05)，可能是由于：①熏洗 方可以抑制炎症反应，减少创面炎症细胞数量，防止自由基的生成；②直接消除创面自由基，伤口中自由基含量降低，有利于伤口愈合。
参考文献
, 百拇医药
1.王亚平，等.中华烧伤整形外科杂志 1996；12(1)：45.
2.李秀兰，等.中国骨伤 1995；8(4)：10.
3.刘建民.国外医学创伤与外科基本问题分册 1991；12(3)：146.
4.谢力子，等.中国肛肠病杂志 1995；5：3.
5.聂旭光，等.国外医学创伤与外科基本问题分册 1995：16(4)：208.
6.毕涉，等主编.炎症与抗炎症药.北京：人民卫生出版社，1993：82., 百拇医药