两种干扰素α治疗慢性丙型肝炎抗干扰素Na与Ba检测及临床意义
吴勤，付体权，鞠连才 解放军第302医院，北京市100039
中图分类号:R392 文献标志码:B 文章编号:1001-0408(2000)05-0221-02
摘要：目的：探讨干扰素α1b(IFNα1b)和干扰素α2a(IFNα2a)治疗慢性丙型肝炎抗干扰素中和抗体(NA)和结合抗体(BA)的产生及临床意义。方法：采用抗病毒中和生物测定法(ANB)和酶联免疫法检测30例用IFNα1b治疗和27例用IFNα2a治疗的慢性丙型肝炎患者治疗前后血清中NA和BA。结果：健康者及IFNα治疗前患者血清中未检测出NA和BA，27例IFNα2a治疗后9例(33.33%)检出NA，30例IFNα1b治疗后4例(13.33%)检出NA。NA阳性的13例中12例(92.31%)为无效病例。IFNα1b治疗组8例(26.67%)BA阳性，IFNα2a治疗组9例(33.33%)BA阳性。BA阳性的17例中1例显效，7例有效，9例无效。结论IFNα治疗慢性丙型肝炎能诱导机体产生NA和BA，IFNα的不同亚型治疗后NA发生率不同。NA的产生影响IFNα治疗慢性丙型肝炎的疗效。BA的产生对疗效无影响。
, 百拇医药
关键词：病毒性肝炎；慢性丙型；干扰素；抗干扰素抗体
ABSTRACT：OBJECTIVE： To present the detection and clinical significance of neutralizing and binding antiinterferon antibodies( NA， BA) during treatment of chronic hepatitis C with IFNα 1b and IFNα 2a. METHODS： The antiviral neutralizing bioassay( ANB) and ELISA test were used to detect serum NA and BA in 30 cases of chronic hepatitis C before and after treatment with IFNα 1b and 27 cases treated with IFNα 2a， respectively. RESULTS： No positive results of NA and BA were found in both healthy subjects and patients before treatment. NAs were present in 9 of 27 patients treated with IFNα 2a( 33. 33% ) and in 4 of 20 patients treated with IFNα 1b( 13. 33% ) . 12 of 13 NA positive cases showed no clinical effectiveness. BAs were positive in 9 of 27 cases treated with IFNα 2a( 33. 33% ) and in 8 of 30 cases treated with IFNα 1b( 26. 67% ) ， respectively. of 17 patients with positive BA， one was satisfactory， 7 improved and 9 unsatisfactory clinically. CONCLUSION： The IFNα in treating chronic hepatitis C can induce production of NA and NB， the rates of which are related with subtypes of IFN used. The production of NA might be a factor affecting the response to IFN therapy for chronic hepatitis C， however， the production of BA seems to have no influence on clinical effect.
, 百拇医药
KEY WORDS： chronic viral hepatitis C； interferon； antiinterferon antibody
目前认为治疗慢性丙型肝炎的首选药物为干扰素α(IFNα)，但IFNα能刺激机体产生抗干扰素抗体[1，2]。为探讨两种IFNα治疗慢性丙肝产生抗干扰素中和抗体(NA)与结合抗体(BA)及与疗效的关系，本文检测分别用IFNα2a和IFNα1b治疗的57例慢性丙肝患者治疗前、后血清中的两种抗体。
1 资料与方法
1.1研究对象
57例慢性丙肝患者为1998年1月～1999年5月我院住院及门诊病人，男45例，女12例；年龄18岁～54岁。诊断符合1995年5月第五届全国传染病寄生虫学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准[3]。全部患者丙肝病毒学指标均为阴性。病例共分两组，第1组30例，用重组IFNα1b(赛若金，深圳科兴生物制品有限公司出品)；第2组27例，用重组IFNα2a(罗扰素，瑞士Roche公司出品)，治疗方法均为300万IU/次，前2周每日1次，以后隔日1次，皮下注射，疗程3个月～6个月，随访3个月。对照组10例，均为健康献血员。
, 百拇医药
1.2材料和方法
中和抗体(NA)的检测：人羊膜细胞(Wish细胞，北京生物制品研究所提供)；人口腔炎病毒VSV(中国医学科学院病毒所提供)；RPMI-1640培养基及胎牛血清(美国GIBCO产品)。NA检测采用抗病毒中和生物法(ANB)，参考国内外文献[4～6]， 将病人血清稀释后置56℃温箱30分钟灭活补体，然后分别与等量IFNα1b或IFNα2a(1.25IU/μl)混匀，37℃孵育1小时，加入长成单层Wish细胞的96孔培养板中继续孵育6小时，加入1∶500稀释的VSV病毒100μl/孔，置37℃培养箱中过夜，次日观察结果。结果判断：将培养板置倒置显微镜下，如每孔中细胞出现3级或3级以上病变，则为NA阳性。
结合抗体(BA)的检测：分别用IFNα1b和IFNα2a包板，4℃过夜，次日小牛血清封闭，分别加入患者血清孵育1小时后洗涤，加酶标兔抗人IgG-HRP孵育后洗涤显色，酶标仪测定OD值，判断结果。
, http://www.100md.com
血清丙氨酸酶(ALT)：我院生化室应用全自动生化分析仪检测。
HCV-RNA：采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)由我院免疫室操作。
1.3疗效判定
显效：症状消失或明显改善，ALT完全恢复正常，HCV-RNA转阴；有效：症状消失或改善，ALT下降，HCV-RNA转阴或定量数值下降；无效：未达到上述标准。
2 结果
2.1两种干扰素治疗效果
两种干扰素治疗效果见表1，两者比较差异无显著性(P>0.05)。 表1两种干扰素治疗效果比较
2.2NA检测结果及与疗效的关系
, 百拇医药
正常对照组和治疗前全部病例NA均阴性，治疗后，IFNα1b组NA阳性4例，检出率为13.33%(4/30)，均为无效病例。IFNα2a组NA阳性9例，检出率为33.33%(9/27)，其中1例为有效，8例为无效。两者阳性率比较差异有显著性(P<0.05)。13例NA阳性者中12例治疗无效，占全部无效病例的41.38%(12/29)。随访3个月，2例抗体消失，此2例均为无效病例。
2.3 BA检测结果及与疗效的关系
正常对照组及治疗前全部病例均为阴性。治疗后，IFNα1b组BA阳性8例，检出率为26.67%(8/30)，其中1例显效，4例有效，3例无效。IFNα2a组BA阳性9例，检出率为33.33%(9/27)，其中3例有效，6例无效，两者阳性率比较差异无显著性(P>0.05)。随访3个月，抗体持续存在。
3 讨论
, 百拇医药 干扰素是一类具有强大的免疫调节作用和抗病毒活性的物质。对于治疗慢性病毒性肝炎尤其是慢性丙型肝炎有一定的疗效。但干扰素作为一种蛋白质，具有一定的免疫原性，可以刺激机体的免疫系统产生相应的抗体。而抗干扰素抗体又分为中和抗体和结合抗体。本文结果显示，正常人和干扰素治疗前慢性丙型肝炎病人血清中不含抗干扰素中和抗体与结合抗体，治疗后的部分慢性丙型肝炎病人血清中出现抗干扰素中和抗体与结合抗体，应用IFNα2a治疗组的中和抗体检出率明显高于IFNα1b治疗组[7]，其机理可能与两者的分子结构和制备过程不同有关。IFNα1b是采用中国人基因克隆和表达的产物，中国人白细胞在受到病毒攻击后，产生的多种IFNα亚型中也以α1型为主[8]。而IFNα2a系人骨髓瘤细胞经刺激后所分泌，在正常人体内不存在此型干扰素。中和抗体阳性的13例病人12例治疗无效，说明中和抗体可以中和干扰素的生物活性并影响其疗效[9]。而结合抗体的出现不影响干扰素的疗效，与Giannelli等报道相似[1]。由于干扰素抗体存在于患者血中较长时间，在此期间如需继续应用干扰素治疗时，应考虑更换其它亚型的干扰素，以避免治疗失败。应用两种干扰素治疗，虽然干扰素中和抗体检出率不同，但疗效却无明显差异，其机理考虑可能为应用干扰素(300万IU/次)剂量小，疗程(3个月～6个月)短。若干扰素加大剂量、延长疗程并联合用药，则疗效可能显示出差异。
摘自：中国药房, 百拇医药
中图分类号:R392 文献标志码:B 文章编号:1001-0408(2000)05-0221-02
摘要：目的：探讨干扰素α1b(IFNα1b)和干扰素α2a(IFNα2a)治疗慢性丙型肝炎抗干扰素中和抗体(NA)和结合抗体(BA)的产生及临床意义。方法：采用抗病毒中和生物测定法(ANB)和酶联免疫法检测30例用IFNα1b治疗和27例用IFNα2a治疗的慢性丙型肝炎患者治疗前后血清中NA和BA。结果：健康者及IFNα治疗前患者血清中未检测出NA和BA，27例IFNα2a治疗后9例(33.33%)检出NA，30例IFNα1b治疗后4例(13.33%)检出NA。NA阳性的13例中12例(92.31%)为无效病例。IFNα1b治疗组8例(26.67%)BA阳性，IFNα2a治疗组9例(33.33%)BA阳性。BA阳性的17例中1例显效，7例有效，9例无效。结论IFNα治疗慢性丙型肝炎能诱导机体产生NA和BA，IFNα的不同亚型治疗后NA发生率不同。NA的产生影响IFNα治疗慢性丙型肝炎的疗效。BA的产生对疗效无影响。
, 百拇医药
关键词：病毒性肝炎；慢性丙型；干扰素；抗干扰素抗体
ABSTRACT：OBJECTIVE： To present the detection and clinical significance of neutralizing and binding antiinterferon antibodies( NA， BA) during treatment of chronic hepatitis C with IFNα 1b and IFNα 2a. METHODS： The antiviral neutralizing bioassay( ANB) and ELISA test were used to detect serum NA and BA in 30 cases of chronic hepatitis C before and after treatment with IFNα 1b and 27 cases treated with IFNα 2a， respectively. RESULTS： No positive results of NA and BA were found in both healthy subjects and patients before treatment. NAs were present in 9 of 27 patients treated with IFNα 2a( 33. 33% ) and in 4 of 20 patients treated with IFNα 1b( 13. 33% ) . 12 of 13 NA positive cases showed no clinical effectiveness. BAs were positive in 9 of 27 cases treated with IFNα 2a( 33. 33% ) and in 8 of 30 cases treated with IFNα 1b( 26. 67% ) ， respectively. of 17 patients with positive BA， one was satisfactory， 7 improved and 9 unsatisfactory clinically. CONCLUSION： The IFNα in treating chronic hepatitis C can induce production of NA and NB， the rates of which are related with subtypes of IFN used. The production of NA might be a factor affecting the response to IFN therapy for chronic hepatitis C， however， the production of BA seems to have no influence on clinical effect.
, 百拇医药
KEY WORDS： chronic viral hepatitis C； interferon； antiinterferon antibody
目前认为治疗慢性丙型肝炎的首选药物为干扰素α(IFNα)，但IFNα能刺激机体产生抗干扰素抗体[1，2]。为探讨两种IFNα治疗慢性丙肝产生抗干扰素中和抗体(NA)与结合抗体(BA)及与疗效的关系，本文检测分别用IFNα2a和IFNα1b治疗的57例慢性丙肝患者治疗前、后血清中的两种抗体。
1 资料与方法
1.1研究对象
57例慢性丙肝患者为1998年1月～1999年5月我院住院及门诊病人，男45例，女12例；年龄18岁～54岁。诊断符合1995年5月第五届全国传染病寄生虫学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准[3]。全部患者丙肝病毒学指标均为阴性。病例共分两组，第1组30例，用重组IFNα1b(赛若金，深圳科兴生物制品有限公司出品)；第2组27例，用重组IFNα2a(罗扰素，瑞士Roche公司出品)，治疗方法均为300万IU/次，前2周每日1次，以后隔日1次，皮下注射，疗程3个月～6个月，随访3个月。对照组10例，均为健康献血员。
, 百拇医药
1.2材料和方法
中和抗体(NA)的检测：人羊膜细胞(Wish细胞，北京生物制品研究所提供)；人口腔炎病毒VSV(中国医学科学院病毒所提供)；RPMI-1640培养基及胎牛血清(美国GIBCO产品)。NA检测采用抗病毒中和生物法(ANB)，参考国内外文献[4～6]， 将病人血清稀释后置56℃温箱30分钟灭活补体，然后分别与等量IFNα1b或IFNα2a(1.25IU/μl)混匀，37℃孵育1小时，加入长成单层Wish细胞的96孔培养板中继续孵育6小时，加入1∶500稀释的VSV病毒100μl/孔，置37℃培养箱中过夜，次日观察结果。结果判断：将培养板置倒置显微镜下，如每孔中细胞出现3级或3级以上病变，则为NA阳性。
结合抗体(BA)的检测：分别用IFNα1b和IFNα2a包板，4℃过夜，次日小牛血清封闭，分别加入患者血清孵育1小时后洗涤，加酶标兔抗人IgG-HRP孵育后洗涤显色，酶标仪测定OD值，判断结果。
, http://www.100md.com
血清丙氨酸酶(ALT)：我院生化室应用全自动生化分析仪检测。
HCV-RNA：采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)由我院免疫室操作。
1.3疗效判定
显效：症状消失或明显改善，ALT完全恢复正常，HCV-RNA转阴；有效：症状消失或改善，ALT下降，HCV-RNA转阴或定量数值下降；无效：未达到上述标准。
2 结果
2.1两种干扰素治疗效果
两种干扰素治疗效果见表1，两者比较差异无显著性(P>0.05)。 表1两种干扰素治疗效果比较
2.2NA检测结果及与疗效的关系
, 百拇医药
正常对照组和治疗前全部病例NA均阴性，治疗后，IFNα1b组NA阳性4例，检出率为13.33%(4/30)，均为无效病例。IFNα2a组NA阳性9例，检出率为33.33%(9/27)，其中1例为有效，8例为无效。两者阳性率比较差异有显著性(P<0.05)。13例NA阳性者中12例治疗无效，占全部无效病例的41.38%(12/29)。随访3个月，2例抗体消失，此2例均为无效病例。
2.3 BA检测结果及与疗效的关系
正常对照组及治疗前全部病例均为阴性。治疗后，IFNα1b组BA阳性8例，检出率为26.67%(8/30)，其中1例显效，4例有效，3例无效。IFNα2a组BA阳性9例，检出率为33.33%(9/27)，其中3例有效，6例无效，两者阳性率比较差异无显著性(P>0.05)。随访3个月，抗体持续存在。
3 讨论
, 百拇医药 干扰素是一类具有强大的免疫调节作用和抗病毒活性的物质。对于治疗慢性病毒性肝炎尤其是慢性丙型肝炎有一定的疗效。但干扰素作为一种蛋白质，具有一定的免疫原性，可以刺激机体的免疫系统产生相应的抗体。而抗干扰素抗体又分为中和抗体和结合抗体。本文结果显示，正常人和干扰素治疗前慢性丙型肝炎病人血清中不含抗干扰素中和抗体与结合抗体，治疗后的部分慢性丙型肝炎病人血清中出现抗干扰素中和抗体与结合抗体，应用IFNα2a治疗组的中和抗体检出率明显高于IFNα1b治疗组[7]，其机理可能与两者的分子结构和制备过程不同有关。IFNα1b是采用中国人基因克隆和表达的产物，中国人白细胞在受到病毒攻击后，产生的多种IFNα亚型中也以α1型为主[8]。而IFNα2a系人骨髓瘤细胞经刺激后所分泌，在正常人体内不存在此型干扰素。中和抗体阳性的13例病人12例治疗无效，说明中和抗体可以中和干扰素的生物活性并影响其疗效[9]。而结合抗体的出现不影响干扰素的疗效，与Giannelli等报道相似[1]。由于干扰素抗体存在于患者血中较长时间，在此期间如需继续应用干扰素治疗时，应考虑更换其它亚型的干扰素，以避免治疗失败。应用两种干扰素治疗，虽然干扰素中和抗体检出率不同，但疗效却无明显差异，其机理考虑可能为应用干扰素(300万IU/次)剂量小，疗程(3个月～6个月)短。若干扰素加大剂量、延长疗程并联合用药，则疗效可能显示出差异。
摘自：中国药房, 百拇医药